Análisis Genético de una Quimera de Poliovirus/Virus de la Hepatitis C (VHC): Interacción entre la Hoja de Trébol de Poliovirus y una Secuencia en la Región No Traducida del VHC Da como Resultado un Fenotipo de Replicación
RESUMEN
Los sitios de entrada ribosómica interna (IRESs) pueden funcionar en genomas virales extraños o en ARNm dicistrónicos artificiales. Describimos una interacción entre la secuencia específica del virus de la hepatitis C (VHC) de tipo salvaje y la hoja de trébol terminal 5’del poliovirus (PV) en un virus quimérico PV/VHC (que contiene el virus IRE del VHC), lo que resulta en un fenotipo de replicación. Ya sea una mutación puntual en el nucleótido (nt) 29 o una deleción de hasta nt 40 en la región no traducida del VHC 5′ alivió el bloqueo de replicación, produciendo variantes de PV/VHC que se replican a títulos altos. Las interacciones fortuitas pero paralizantes entre un IRES y el ARN heterólogo circundante deben considerarse cuando se construyen vectores de expresión dicistrónicos basados en IRES.
Todos los genomas del picornavirus contienen un elemento genético denominado sitio de entrada ribosómico interno (IRES) que permite la traducción de ARNm genómicos virales de una manera independiente de 5′ y cap (5, 12, 13, 16, 20, 25). También se han descubierto elementos genéticos similares en genomas del virus de la Hepatitis C(VHC) (24), un Hepacivirus, y del virus de la diarrea viral bovina (21), un Pestivirus, de la familia Flaviviridae. Los IRESs se encuentran en el segmento terminal 5’de los genomas, donde controlan el inicio de la síntesis de poliproteínas. Sin embargo, ciertos virus ARN de insectos, por ejemplo, el virus del intestino estaleal de Plautia, son excepcionales en el sentido de que sus IRES afines mapean varios miles de nucleótidos aguas abajo del extremo 5′ del genoma, separando dos cistrones que codifican dos poliproteínas diferentes (23). Es interesante que hayamos diseñado previamente un poliovirus dicistrónico (PV) insertando las IRES del virus de la encefalomiocarditis en la región codificante de la poliproteína PV (16). La organización genética de este VP dicistrónico, que codifica dos poliproteínas separadas por un elemento IRES, se parece mucho a la del virus intestinal P. stali.
Los elementos IRES se definen por función y no por secuencia de nucleótidos. De hecho, el IRESs de PV, un picornavirus, y el VHC, un flavivirus, tienen poca o ninguna secuencia en común, sin embargo, ambos funcionan como promotores de la entrada ribosómica interna para el inicio de la traducción. Este fenómeno es más evidente en los virus quiméricos PV/VHC en los que se han intercambiado las IRES de VP afines con las del VHC (15, 28). Inesperadamente, el IRE del VHC incluye una secuencia aguas abajo del codón AUG que inicia su poliproteína (15, 22). En la construcción de un virus quimérico VP/VHC viable, una porción de la secuencia de codificación de proteínas centrales fue necesaria para obtener un virus viable (Fig.1, ΔCore) (15). La secuencia ΔCore conduce a la formación de una poliproteína de fusión ΔCore/PV que debe ser procesada a través de la escisión por la proteinasa viral PV 2Apro en la unión ΔCore*1A (Fig. 1) (28). Sin embargo, la producción de péptidos codificados por secuencia de núcleo resultante de la traducción de la secuencia ΔCore no es necesaria para la función de las IRE del VHC en P/H710-d17* (28). (En estudios previos, P / H710-d17 fue designado P / H701-2A porque el genoma quimérico contenía la secuencia específica del VHC de los nucleótidos 18 a 710 del genoma del VHC . La numeración de la región no traducida del VHC 5′ en este artículo se ajusta a la numeración del VHC 5 ‘ NTR de longitud completa .)
