Cuantificando los niveles de ROS usando CM-H2DCFDA e HyPer
A niveles bajos, las especies reactivas de oxígeno (ROS) pueden actuar como moléculas de señalización dentro de las células. Cuando la producción de ROS excede en gran medida la capacidad de los sistemas antioxidantes endógenos, o los niveles de antioxidantes se reducen, los niveles de ROS aumentan aún más. Este último está asociado con la inducción de estrés oxidativo y la transducción de señales asociada y se caracteriza por cambios inducidos por ROS en la homeostasis redox celular y/o efectos dañinos en biomoléculas (p. ej. ADN, proteínas y lípidos). Dados los complejos mecanismos involucrados en la producción y eliminación de ROS, en combinación con la falta de moléculas reporteras que sean realmente específicas para un tipo particular de ROS, la cuantificación de los niveles (sub)celulares de ROS es una tarea desafiante. En este capítulo describimos dos estrategias para medir ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).
