Expresión de citoqueratina 5/6 y citoqueratina 8/18 en cánceres de mama triple negativos: significación clinicopatológica en la población del sur de Asia

Métodos

Se seleccionaron un total de 150 casos de TNBC de los registros de los archivos del departamento de patología. Las muestras quirúrgicas incluyeron mastectomías radicales modificadas, mastectomías simples y escisiones locales amplias con disección de ganglios linfáticos centinela. Todos los pacientes se sometieron a cirugías en el hospital Nacional Liaquat de Karachi desde enero de 2008 hasta diciembre de 2013 durante un período de 6 años. El estudio fue aprobado por el comité de investigación y revisión ética de la institución y se obtuvo el consentimiento informado de todos los pacientes en el momento de la cirugía. Se recuperaron láminas teñidas de hematoxilina y eosina y bloques de parafina de casos y se cortaron nuevas secciones cuando fue necesario. Los portaobjetos de todos los casos fueron revisados por dos histopatólogos expertos y se evaluaron características patológicas como el tipo histológico, el grado tumoral, el estadio T, el estadio N, la invasión linfovascular, la necrosis, la fibrosis, la infiltración linfocítica (linfocitos infiltrantes tumorales), la presencia de un componente insitú, la diseminación pagetoide y la invasión linfática dérmica. También se revisaron los registros clínicos de todos los pacientes de los registros institucionales para evaluar la edad del paciente, los antecedentes de radiación y quimioterapia y el estado de recidiva. Además, se seleccionaron bloques representativos de cada caso y se realizaron inmunohistoquímica de ER, PR y Her2neu para reconfirmar el estado triple negativo.

ER, PR, Her2neu y Ki67 IHC se realizaron utilizando anticuerpos DAKO como bajo, con EnVision ™ FLEX, kit DAKO de alto pH de acuerdo con el protocolo del fabricante.

1. Receptor de estrógeno alfa antihumano de conejo monoclonal FLEXIBLE, clon EP1.

2. Clon monoclonal FLEX del receptor de progesterona antihumana de ratón PgR 636.

3. Oncoproteína policlonal c-ErbB-2 antihumana de conejo.

4. Clon de antígeno Ki67 humano de ratón monoclonal flexible MIB-1.

La tinción nuclear de RE y PR en > 1% de las células cancerosas se consideró positiva. Para her2neu, los casos fueron puntuados 1+, 2+ y 3 + de acuerdo con las directrices de la NAC. Para casos equívocos (2+), el FISH se realizó utilizando el kit de sonda Path Vysion Her2neu de acuerdo con los protocolos del fabricante. Los resultados se expresaron como relación de señales her2neu en comparación con las señales CEP17 de acuerdo con las directrices ASCO/CAP.

La inmunotinción Ki67 se registró como variables continuas basadas en la proporción de células cancerosas teñidas positivas. Además, sobre la base del índice Ki67, los casos fueron categorizados en categorías de índice ki67 < 15, 16-24, 25-44 y > 44%.

La IHC CK5/6 se realizó mediante el uso de Citoqueratina Antihumana 5/6 de Ratón Monoclonal FLEX, clon D5/16 B4 por el método DAKO envision de acuerdo con el protocolo del fabricante. La tinción membranosa y citoplasmática intermedia a fuerte en más de 10% de las células se consideró positiva. La tinción débil a intermedia en < 10% se consideró como focal positiva, mientras que ninguna tinción se consideró negativa (Archivo adicional 1: Figura S1).

CK 8/8 IHC se realizó utilizando citoqueratina 5/6 antihumana monoclonal de ratón, clon D5 / 16 B4, según el método DAKO envision. La tinción membranosa y citoplasmática intermedia a fuerte en más del 50% de las células se consideró positiva. La tinción débil a intermedia (citoplasmática, con pérdida de reactividad de membrana) en el 10-50% se consideró como focal positiva, mientras que ninguna tinción o tinción débil en < 10% se consideró negativa (archivo adicional 1: Figura S1).

El estado de recurrencia y el seguimiento se evaluaron mediante la revisión de la historia clínica hospitalaria. La supervivencia global se tomó como el tiempo transcurrido desde la escisión quirúrgica hasta la muerte o el último seguimiento, y la supervivencia sin enfermedad se definió como el tiempo transcurrido entre la escisión quirúrgica y la recidiva local o metástasis a distancia, la muerte o el último seguimiento.

Se utilizó el paquete estadístico para ciencias sociales (SPSS 21) para la compilación y el análisis de los datos. Se calcularon la media y la desviación estándar para las variables cuantitativas. Se calcularon la frecuencia y el porcentaje para las variables cualitativas. Se aplicó Chi cuadrado para determinar la asociación. Se aplicó la prueba t de Student o la prueba de Mann whitney para comparar la diferencia de medias entre los grupos. Valor de P ≤ 0,05 como significativo. Las curvas de supervivencia se trazaron utilizando el método de Kaplan–Meier y la significación de la diferencia entre las curvas de supervivencia se determinó utilizando la razón logarítmica. Valor de P ≤ 0.05 fue tomado como significativo.

Resultados

La edad media de los pacientes que participaron en el estudio fue de 48,9 años y el grupo de edad más común fue de 31 a 50 años. La mayoría de los pacientes se presentaron en el estadio T2 con un índice ki67 medio alto, es decir, 46,9%. el 42,7% de los casos tenían metástasis ganglionar. Aunque 84% de los casos fueron de carcinoma ductal invasivo convencional, el TSN; sin embargo, una proporción significativa de los casos fueron de histología metaplásica (9,3%). La mayoría de los casos eran de grado alto (86,7% grado III). La mayoría de los tumores muestran infiltración linfocítica y necrosis. La mayoría de los tumores carecen de componente insitú (61%). Se observó recidiva local o metástasis tardía a distancia en el 17,8% de los casos (Tabla 1).

La expresión de CK5/6 positiva (> 10%) se observó en el 8% (12 casos) de TNBC, mientras que el 2,4% (4 casos) mostró focal positiva (< 10%) y el 89,3% (134) fue negativa con CK5/6. Se observó pérdida completa de la expresión de CK8/18 en el 4,7% (7 casos), mientras que el 32,7% (49 casos) reveló pérdida focal de CK8/18 y el 62,7% (94 casos) mostró una expresión normal intacta de CK8/18. No se observó asociación significativa de CK5/6 y CK8/18 con varios parámetros clinicopatológicos (Tablas 2 y 3). Del mismo modo, no se observó una asociación significativa de CK 5/6 y CK8/18 con el estado de recurrencia de los pacientes (Archivo adicional 2: Figura S2).

Discusión

En el presente estudio evaluamos la expresión de un marcador basal (CK5/6) y un marcador luminal (CK8/18) en CBTN en nuestra población y encontramos que; 8 y 2,7% de CBTN mostraron una expresión positiva y focal positiva de CK5/6, respectivamente, y 4,7 y 32.el 7% de TNBC reveló pérdida completa y pérdida focal de expresión de CK 8/18, respectivamente. En todos los casos en los que se observó pérdida focal CK8/18, hubo pérdida de reactividad de la membrana, mientras que la tinción citoplasmática se retuvo en pocas células. Sin embargo, no se observó asociación significativa entre estos patrones de expresión anormales de citoqueratinas con diversos parámetros clínico-patológicos y pronósticos de CBTN en nuestra población. El cáncer de mama es una de las neoplasias malignas más comunes en la población del sur de Asia, especialmente en edades tempranas .

El perfil de expresión génica define los cánceres de mama basales como aquellos que exhiben grupos basales de genes que incluyen EGFR, citoqueratina basal 5/6, C-kit, cúmulo de proliferación y baja expresión de genes relacionados con Her2neu y receptores hormonales . Sin embargo, el cáncer de mama basal no es una entidad única e incluye varios subtipos, incluidos dos subtipos similares a los basales (BL1 y BL2), mesenquimales, mesenquimales, inmunomoduladores y andrógenos luminales . Además, también se han definido subtipos ricos en interferón y bajos en claudina . La ASCO/CAP no recomienda el subtipo de cánceres de mama basales. La expresión de CK 5/6 varía de 24 a 72% en TNBC, como se informó en estudios previos . Otros investigadores también han propuesto la importancia pronóstica de la CK 5/6 en los cánceres de mama sin ganglios linfáticos. Nielson et al. se indicó que el cáncer de mama CK5/6 positivo tiene peor pronóstico independientemente del grado tumoral, el estadio T y el estado hormonal / Her2neu . De manera similar, en otro estudio se propuso que la CK5/6 es un marcador de supervivencia sin enfermedad más corta, independientemente de otros factores pronósticos del cáncer de mama . Inanc et al. reportado 50.expresión de 5% de CK5 / 6 con correlación positiva de CK5/6 TNBC con metástasis ganglionar y tamaño del tumor . Sin embargo, en contraste con estos estudios, encontramos una baja expresión de CK5/6 en TNBC en nuestra población estudiada, lo que puede representar un perfil genómico diferente de TNBC en nuestra población, que debe explorarse en estudios adicionales. Se ha propuesto la función pronóstica de la CK5/6 en otros cánceres del cuerpo .

CK8 / 18 es una citoqueratina luminal expresada principalmente en el epitelio mamario en un patrón membranoso y citoplasmático. Cimpean et al. se definieron estos diferentes patrones de CK8 / 18 en el cáncer de mama; citoplasmático difuso, membranoso y citoplasmático y membranoso combinados .Algunos investigadores han propuesto que la pérdida de expresión de CK8/18/CK8/18 baja se relaciona con un pronóstico más precario y un riesgo alto de metástasis . Sin embargo, no encontramos ninguna significación pronóstica de la pérdida de la expresión de CK8/18 con varios factores pronósticos y recidiva en TNBC.

se encontró que el 32,7% de PURPLE mostrar pérdida focal de expresión CK8/18. En todos estos casos hubo pérdida de reactividad membranosa de CK8/18, mientras que la tinción citoplasmática se mantuvo en pocas células. Aiad et al. en un estudio en el que participaron 70 casos de cáncer de mama, se encontró una expresión anormal de CK8/18 (citoplasmática) en 70% de los casos de cáncer de mama egipcio, lo que indica una gran heterogeneidad en la expresión de citoqueratina del cáncer de mama en diferentes partes del mundo .