Actividades de eliminación de radicales libres de Cnidium officinale Makino y Ligusticum chuanxiong Hort. extractos metanólicos | Jiotower

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Varios eventos patológicos, como el proceso de inflamación, la enfermedad arterial coronaria y los fenómenos de envejecimiento, están asociados con la generación de ROS. Así, en este estudio, demostramos que los extractos de C. officinale y L. chuanxiong también poseen propiedades antioxidantes, ya que fueron capaces de proteger las células del daño oxidativo y también inhiben la generación de ROS.

Para el ensayo de TEAC, la Tabla 1 muestra la capacidad antirradical de C. officinale y L. chuanxiong en un sistema acuoso, medida mediante el ensayo de radicales ABTS. El ensayo ABTS se ha utilizado para medir la actividad antioxidante total en materiales vegetales. Como lo usan Rice-Evans y Miller, el TEAC refleja la capacidad relativa de los antioxidantes que donan hidrógeno o electrones para eliminar el catión radical ABTS en comparación con el de Trolox. En este estudio, C. officinale y L. chuanxiong en el rango de 0-150 µg/ml mostró actividad antiradical, y la actividad antiradical de estas muestras aumentó con el aumento de la concentración de los extractos, lo que indica que C. officinale y L. chuanxiong mostraron actividad eliminadora de radicales libres. Como se puede ver en la Tabla 1, la capacidad de eliminación de residuos de C. officinale y L. chuanxiong en el catión radical ABTS se comparó con la del ácido ascórbico. Además, C. officinale mostró un marcado efecto eliminador de radicales catiónicos ABTS en comparación con el del ácido ascórbico estándar, determinado a través de TEAC.

Además, la Tabla 1 muestra el ORAC de las muestras. La proteína altamente fluorescente, la beta-ficoeritrina (PE), derivada de numerosas especies de algas rojas, se ha utilizado como blanco del daño de los radicales libres. Los radicales de peroxilo generados por la descomposición térmica del AAF apagan la fluorescencia de la ficoeritrina, mientras que la adición de un antioxidante que reacciona rápidamente con los radicales de peroxilo inhibe la pérdida de intensidad de fluorescencia y esta inhibición es proporcional a la actividad antioxidante. Los resultados finales se pueden calcular utilizando las diferencias en las áreas bajo las curvas de desintegración de ficoeritrina entre el espacio en blanco y una muestra y se expresan en equivalentes de Trolox. En este estudio, los resultados mostraron que C. officinale y L. chuanxiong exhiben capacidad antioxidante con un perfil similar. Además, el ensayo ORAC demostró una mejora clara del contenido de antioxidantes en el extracto de C. officinale en comparación con el ácido ascórbico, como estándar.

El modelo estable de radicales DPPH es un método relativamente rápido y ampliamente utilizado para la evaluación de la actividad de eliminación de radicales libres. Se cree que el efecto de los antioxidantes vegetales en la eliminación de radicales DPPH se debe a su capacidad de donación de hidrógeno. La disminución de la absorbancia del radical DPPH causada por los antioxidantes debido a la reacción entre las moléculas antioxidantes y el radical, progresa, lo que resulta en la eliminación del radical por donación de hidrógeno. La Tabla 1 ilustra una disminución significativa en la concentración de radicales DPPH debido a la capacidad de eliminación de residuos de los extractos de C. officinale y L. chuanxiong y estándar. La actividad de eliminación de radicales libres también aumentó con el aumento de la concentración. Estos resultados indicaron que ambos extractos tienen un efecto notable en la eliminación de radicales libres. El extracto metanol de L. chuanxiong mostró una actividad de eliminación de DPPH más fuerte que el extracto de metanol de C. officinale en comparación con el estándar. Usamos ácido ascórbico de serie.

Además, se puede atacar la capacidad de eliminar radicales específicos. Debido a que diferentes ROS tienen diferentes mecanismos de reacción, para determinar completamente la actividad antioxidante frente a una amplia gama de ROS, se debe llevar a cabo un conjunto más completo de ensayos. El anión superóxido (O2·–) radical es un factor importante en los sistemas biológicos. Para determinar si la inhibición de la reducción de NBT se debió a la actividad eliminadora de superóxido, se utilizó un sistema no enzimático de generación de superóxido. En el sistema PMS-NADH-NBT, el anión superóxido, derivado del oxígeno disuelto de la reacción de acoplamiento del PMS-NADH, reduce el NBT. La disminución de la absorbancia a 560 nm con antioxidantes indica el consumo de aniones superóxido en la mezcla de reacción. La Tabla 2 muestra el porcentaje de inhibición de la generación de radicales superóxido por 0-150 µg/ml de extractos de metanol de C. officinale y L. chuanxiong en comparación con el mostrado por el ácido ascórbico. C. los extractos de metanol de officinale y L. chuanxiong mostraron una inhibición dependiente de la dosis de los radicales superóxido. Ambos extractos de C. officinale y L. chuanxiong tienen una fuerte actividad de eliminación de radicales superóxidos (IC50 = 96,30 y 93,85 µg/ml). Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, se puede anticipar que los extractos metanólicos de C. officinale y L. chuanxiong tienen actividad antioxidante, mostrada aquí por la eliminación del radical superóxido. Los valores de CI50 de todos estos extractos fueron mayores que los del ácido ascórbico en el que se alcanzó la CI50 a una concentración de 8,76 µg.

La eliminación de H2O2 por ambos extractos puede atribuirse a sus fenólicos, que pueden donar electrones al H2O2, neutralizándolo al agua. Las capacidades de extracción de H2O2 entre los dos extractos pueden atribuirse a sus capacidades de donación de electrones. La capacidad de ambos extractos para eliminar eficazmente el H2O2 se muestra en la Tabla 2, en la que se compara con la del ácido ascórbico como estándar. Los extractos eran capaces de eliminar el H2O2 de forma dependiente de la concentración. C. officinale y L. los extractos de chuanxiong (0-150 µg/ml) mostraron CI50 de 136,28 y 136,32 µg/ml, respectivamente, mientras que el ácido ascórbico mostró 8,05 µg/ml. La correlación entre los valores de C. officinale y L. chuanxiong fue estadísticamente no significativa. Aunque el H2O2 en sí no es muy reactivo, a veces puede causar citotoxicidad al dar lugar a radicales hidroxilo en la célula. Por lo tanto, eliminar el H2O2 es muy importante en todos los sistemas alimentarios.

La C. officinale y L. los extractos de metanol de chuanxiong también se evaluaron para determinar su capacidad de eliminar radicales hidroxilo utilizando el ensayo de degradación de desoxirribosa. En este estudio, los resultados mostraron que todas las muestras eran capaces de inhibir la degradación de la desoxirribosa (0-150 µg / ml), con un perfil similar. Los estudios bioquímicos revelaron que C. officinale y L. chuanxiong causaron una inhibición dependiente de la concentración de la degradación de la desoxirribosa. A nivel de valor CI50, C. officinale (119,44 µg/ml) y L. chuanxiong (113,11 µg/ml) mostraron la misma potencia . La capacidad total de eliminación de radicales OH de cada extracto se comparó con la del ácido ascórbico.

Se midieron y compararon extractos de plantas por sus actividades de eliminación de radicales libres contra radicales de óxido nítrico. La actividad de eliminación de NO· de los extractos de metanol de C. officinale y L. chuanxiong se examinó utilizando SNP como donante de NO·. El NO liberado de SNP reacciona con el oxígeno para producir nitrito. NINGÚN eliminador compite con el oxígeno al reaccionar con NO· liberado de la solución de SNP en PBS. En este estudio, extractos de C. officinale y L. chuanxiong no mostró capacidad de recolección de basura·, aunque se observaron algunas diferencias. NO * la actividad de recolección de basura de C. officinale fue más significativa que la de L. chuanxiong. Esta inhibición también podría ser el resultado de la eliminación directa de NO· por extractos. C. officinale tuvo la mayor actividad para calmar a NINGÚN radical. Los valores de CI50 fueron de 57,25 y 76,50 µg / ml para C. officinale y L. chuanxiong, respectivamente.

Se estimó la quelación de iones ferrosos por extractos de C. officinale y L. chuanxiong, en los que la ferrozina forma cuantitativamente complejos con Fe2+. En presencia de agentes quelantes, la formación de este complejo se interrumpe, impidiendo así la formación del color rojo impartido por el complejo también. Por lo tanto, la medición de este cambio de color permite estimar la actividad quelante del quelante coexistente. En este ensayo, tanto los extractos como el compuesto antioxidante estándar interfirieron con la formación del complejo ferroso–ferrozina, lo que sugiere que tienen actividad quelante, capturando el ion ferroso antes de que pueda formar un complejo con ferrozina. Como se muestra en la Tabla 2, la formación del complejo Fe2 + – ferrozina no es completa en presencia de los extractos de metanol de C. officinale y L. chuanxiong, lo que indica que ambos extractos quelatan el hierro. La absorbancia del complejo Fe2 + – ferrozina disminuyó linealmente de forma dependiente de la dosis (0-150 µg/ml). La diferencia entre los extractos de C. officinale y L. chuanxiong y el control fue estadísticamente significativa. Las capacidades quelantes de metales de los extractos de metanol de C. officinale y L. chuanxiong, y el ácido ascórbico (todos a CI50 µg/ml) fueron de 138,43, 17,45 y 43.24, respectivamente, que demostraron ser una diferencia significativa entre los extractos y los controles.

Para determinar los efectos de C. officinale y L. chuanxiong sobre la viabilidad celular, las células N2a se expusieron a C. officinale y L. chuanxiong (50-500 µg/ml) durante un tiempo de incubación de 1 h. En la Figura 1, la prueba de MTT después de 1 h de incubación con C. officinale no indica ninguna diferencia de viabilidad significativa en los cultivos celulares de N2a tratados en comparación con el control. Por prueba de MTT después de 1 h con L. chuanxiong, se observó un aumento significativo de la viabilidad en L. células N2a tratadas con chuanxiong 500 µg/ml en comparación con el control. Como se muestra en la Figura 2, NO se realizó ninguna determinación después de 1 h de incubación en presencia de C. officinale y L. chuanxiong (50-500 µg / ml). El tratamiento con L. chuanxiong no disminuyó significativamente la liberación de NO en comparación con el control, pero 500 µg/ml de C. officinale disminuyó significativamente la liberación de NO. A partir de este resultado, se puede concluir que los extractos metanólicos de C. officinale y L. chuanxiong, a las dosis utilizadas, no tienen efectos tóxicos.

Efecto de los extractos metanólicos de C. officinale y L. chuanxiong sobre la viabilidad celular en células N2a. Los valores son medias ± DE de tres mediciones. * P < 0,05 en comparación con el tratamiento normal no tratado (ANOVA / Tukey)

Efecto de C. officinale y L. extractos metanólicos de chuanxiong sobre la liberación de óxido nítrico en células N2a. Los valores son medias ± DE de tres mediciones. * P < 0,05 comparado con normal no tratado. (ANOVA / Tukey)