Rendimiento clínico de la prueba de VPH Roche Cobas 4800 | Jiotower

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El virus del papiloma humano (VPH) es uno de los virus de transmisión sexual más comunes en todo el mundo y uno de los principales causantes del cáncer, que causa casi 60 000 nuevos casos de cáncer al año en Europa (1) y conduce al desarrollo de cáncer de cuello uterino en mujeres. El VPH16 y el VPH18 son los más cancerígenos (2, 3), ya que aproximadamente el 70% de todos los cánceres de cuello uterino se presentan con infecciones por VPH16 o VPH18 (4). Casi el 30% de los cánceres de cuello uterino no se detectan en las pruebas iniciales de citología cervical (5), por lo que se necesitan pruebas precisas y objetivas para detectar el cáncer de cuello uterino asociado al VPH que utilicen técnicas moleculares más sensibles para proporcionar prevención y tratamiento eficaces a fin de reducir los riesgos futuros y la incidencia del cáncer de cuello uterino.

La prueba de VPH Cobas 4800 de Roche (Cobas) es un novedoso método molecular basado en PCR en tiempo real (RT-PCR) (6, 7), con un sistema totalmente automatizado que permite un procesamiento de muestras rápido y eficiente. Cobas puede detectar el VPH16, el VPH18, 12 otros VPH de alto riesgo (VPHR) (VPH31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, y -68, como resultado agrupado), y el control de la β-globina de forma independiente en la misma PCR. El objetivo principal de nuestro estudio fue evaluar las características de rendimiento técnico y clínico de Cobas. Se recolectaron muestras cervicales de 6,056 mujeres remitidas al Departamento de Patología de la Escuela de Medicina Icahn en Mount Sinai para el examen de rutina de lesiones cervicales entre noviembre de 2011 y febrero de 2012 en un medio citológico a base de líquido (PreservCyt; Hologic, Marlborough, MA) y se conserva a 4°C hasta su uso.

Se analizaron ciento ochenta muestras para genotipos de vhRHP mediante la prueba de VPH Cobas 4800 de Roche y la prueba de ADN de VHRHPV de Captura Híbrida Digene 2 (HC2) (Tabla 1), y las discrepancias se resolvieron mediante la prueba de genotipado de VPH de Matriz Lineal (LA) (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). De acuerdo con la prueba chi-cuadrado de Pearson, hubo una diferencia significativa en el número de muestras positivas y negativas identificadas por las dos pruebas de VPH (P < 0,001). Sin embargo, la concordancia entre las dos pruebas fue estadísticamente fuerte , con un nivel de concordancia de 88,33% (P = 0,0218) y el coeficiente kappa de Cohen de 0,767 (intervalo de confianza del 95%, 0,674 a 0,860; P < 0,001), donde los intervalos de confianza del 95% de los valores kappa se dedujeron de una distribución binomial.

En el discordantes muestras, la prueba de VPH detectado VPH de bajo riesgo (lrHPV) los genotipos en el 50% (2/4) de las muestras que dieron positivo y HC2 Cobas negativo y en el 13,33% (2/15) de las muestras que fueron HC2 negativo y Cobas positivo. El VPH53 se encontró en dos muestras positivas a HC2 y negativas a Cobas, lo que sugiere que las sondas del kit Digene reaccionaron de forma cruzada con este genotipo del VPH. Esta observación no es sorprendente, ya que la reactividad cruzada de la prueba de HC2 con genotipos de lrHPV, específicamente el VPH53, se observó previamente (9). La consecuencia de la reactividad cruzada del genotipo del VHPL en una prueba de VPH es un aumento del número de resultados positivos falsos. Esto podría llevar a una sobreinvestigación y un tratamiento excesivo a través de pruebas de seguimiento de mujeres que poseen solo genotipos de VPL-LRH y que en realidad tienen un riesgo bajo de desarrollar cáncer de cuello uterino. En dos muestras con HC2 negativo / Cobas positivo, se detectaron VPH62 y VPH89 (CP6108) en ambas muestras y VPH42, VPH54, VPH55, VPH61, VPH70 y VPH84 en una de las muestras, lo que sugiere que la infección mixta por VPH conduce a resultados falsos positivos por la prueba de VPH Cobas.

La prueba de VPH LA detectó genotipos de vhRHP en ninguna de las muestras con HC2 positivo y Cobas negativo (0/4) y en el 80% (12/15) de las muestras con HC2 negativo y Cobas positivo. La prueba de HC2 no detectó hrHPV en estas muestras, lo que indica que la prueba de HC2 no detectó más genotipos de hrHPV que la prueba Cobas, lo que implica que Cobas es un ensayo de detección potencialmente más efectivo debido a una mejor sensibilidad y precisión. Por el contrario, el VPH no se detectó mediante la prueba de VPH de LA en el 6,67% (1/15) de las muestras con HC2 negativo/Cobas positivo. En general, sin embargo, la diferencia en la detección del vhRHP entre las pruebas de HC2 y Cobas seguía siendo estadísticamente insignificante (χ2 = 2,901, P = 0,0885).

Se utilizaron sesenta y ocho muestras para determinar la reproducibilidad de la prueba de VPH Cobas. La reproducibilidad entre las pruebas inicial y repetida, calculada con una tabla de contingencia estándar de 2 por 2, fue del 93,55%; el coeficiente kappa entre los resultados de la primera y segunda ronda de pruebas Cobas fue de 0,869 (IC del 95%, 0,744 a 0,993; P < 0,001). La fuerza de este acuerdo se considera muy buena, lo que sugiere que el ensayo es altamente confiable.

Ciento ochenta y siete muestras fueron analizadas por la prueba de VPH Cobas para determinar la diferencia en la detección de VPH entre muestras prealicuotadas y postalicuotadas. Solo 7 muestras no coincidieron, con una tasa de 3,74% (IC del 95%, 1,02% a 6,46%). El análisis estadístico reveló que la diferencia entre las muestras prealicuotadas y postalicuotadas no era significativa (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Dado que no se observó un aumento en la tasa de VPH positivo antes y después del proceso citológico (prealiquot versus postaliquot), la contaminación cruzada de las muestras durante el procesamiento citológico es extremadamente rara. La prueba de VPH después de la citología puede mejorar significativamente el flujo de trabajo y reducir la alícuota innecesaria cuando se pretende una prueba de VPH reflejo para citología anormal.

Finalmente, se analizaron 5.621 muestras utilizando la prueba de VPH de Cobas para determinar los efectos de los vórtices y remolinos (antes de la prueba de Cobas) en las tasas de fracaso. Entre las 1.380 muestras procesadas por vórtice, la tasa de fallos fue de 4.57% (IC del 95%, 3,65% a 5,91%). En contraste, entre las 4.241 muestras procesadas por remolino, la tasa de fracaso fue del 1,16% (IC del 95%, 0,84% a 1,48%). La prueba chi-cuadrado de Pearson reveló que las diferencias de las tasas de falla entre las muestras en vórtice y en remolinos suaves fueron extremadamente significativas (χ2 = 59,983, P < 0,0001), y se recomendó un remolino suave para disminuir la tasa de falla de Cobas.

En conclusión, la prueba de VPH Cobas 4800 demostró un mayor grado de sensibilidad y especificidad en la detección de genotipos de vhRHP que la prueba de vhRHP de Digene HC2. La prueba de Cobas también tuvo un nivel más bajo de reactividad cruzada con genotipos de lrHPV que la prueba de HC2, como lo demuestra el menor número de casos de falsos positivos. Sin embargo, la diferencia en el rendimiento general entre estas dos pruebas no es estadísticamente significativa.