Komplementista riippuva sytotoksisuus

terapeuttiset antibodiesEdit

antitumoraalisten terapeuttisten vasta-aineiden kehittymiseen liittyy in vitro niiden efektoritoimintojen analyysi, mukaan lukien kyky laukaista CDC tappamaan kohdesoluja. Klassinen lähestymistapa on inkuboida vasta-aineita kohdesoluilla ja komplementin lähteellä (seerumi). Sitten solukuolema määritetään useilla lähestymistavoilla:

• radioaktiivinen menetelmä: kohdesolut merkitään 51Cr: llä ennen CDC-määritystä, Kromi vapautuu solujen hajoamisen aikana ja radioaktiivisuuden määrä mitataan.
• elävien solujen metabolisen aktiivisuuden mittaaminen (elävien solujen värjäytyminen): kun kohdesolut on inkuboitu vasta-aineilla ja komplementilla, lisätään plasmakalvon läpäisevää väriainetta (esim.kalseiini-AM tai resatsuriini). Elävät solut metaboloivat sen läpäisemättömäksi fluoresoivaksi tuotteeksi, joka voidaan havaita virtaussytometrialla. Tätä tuotetta ei voi muodostua metabolisesti inaktiivisissa kuolleissa soluissa.
• vapautuneiden solunsisäisten entsyymien aktiivisuuden mittaaminen: kuolleet solut vapauttavat entsyymiä (esim. LDH tai GAPDH) ja sen substraatin lisääminen johtaa värimuutokseen, joka yleensä kvantifioidaan absorbanssin tai luminisenssin muutoksena.
• kuolleiden solujen värjäytyminen: (fluoresoiva) väriaine pääsee kuolleiden solujen sisälle niiden vaurioituneen plasmakalvon kautta. Esimerkiksi propidiumjodidi sitoutuu kuolleiden solujen DNA: han ja fluoresoiva signaali mitataan virtaussytometrialla.

HLA-tyypitys ja crossmatch testEdit

CDC-määrityksiä käytetään sopivan luovuttajan löytämiseksi elin-tai luuytimensiirtoa varten, eli luovuttajan, jolla on vastaava histokompatibiliteettijärjestelmän HLA fenotyyppi. Aluksi HLA-tyypitys tehdään potilaalle ja luovuttajalle HLA-fenotyyppien määrittämiseksi. Kun mahdollisesti sopiva pari löytyy, crossmatch-testi tehdään sen poissulkemiseksi, että potilas tuottaa luovuttajalle spesifisiä anti-HLA-vasta-aineita, jotka voivat aiheuttaa siirteen hylkimisreaktion.

CDC – muodossa HLA-tyypityksessä (toisin sanoen serologisessa tyypityksessä) käytetään Eriä anti-HLA-vasta-aineita, jotka on saatu karakterisoiduista allogeenisista antiseerumeista tai monoklonaalisista vasta-aineista. Nämä vasta-aineet inkuboidaan yksi kerrallaan potilaan tai luovuttajan lymfosyyttien ja komplementin lähteen kanssa. Kuolleiden solujen määrä (ja siten positiivinen tulos) mitataan kuolleiden tai elävien solujen värjäytymisellä. Nykyään CDC-tyypitys korvataan molekyylityypityksellä, jolla voidaan tunnistaa HLA-molekyylien nukleotidisekvenssejä PCR: n avulla.

CDC-määritystä käytetään yleensä crossmatch-testin suorittamiseen. Perusversiossa potilaan seerumi inkuboidaan luovuttajan lymfosyyteillä ja toinen inkubaatio kanin komplementin lisäämisen jälkeen. Kuolleen solun esiintyminen (positiivinen testi) tarkoittaa, että luovuttaja ei sovellu tälle nimenomaiselle potilaalle. Testiherkkyyden lisäämiseksi on saatavilla muutoksia, kuten minimaalisen inkubaatioajan pidentäminen, antihumaaniglobuliinin (AHG) lisääminen, sitoutumattomien vasta-aineiden poistaminen ennen komplementin lisäämistä, T-solun ja B-solun osajoukon erottaminen. Lisäksi CDC crossmatch on flow-cytometric crossmatch saatavilla, joka on herkempi ja voi havaita jopa täydentää ei-aktivoivia vasta-aineita.