Myeloomakasvaimen klooninen monimuotoisuus: Solusukupolvista hoidon vaikutuksiin
kloonisen monimuotoisuuden käsite on tulossa hyvin hyväksytyksi syövän tunnusmerkkinä. Kasvaimen kasvaessa ja edetessä solukannan geneettinen maisema voi muuttua. Nämä muutokset johtuvat suurelta osin kunkin solunjakautumisen aikana sattuneista satunnaisvirheistä tai erilaisten altistusten stimuloimista mutaatiotapahtumista. Kun jokin näistä sattumanvaraisista tapahtumista tapahtuu oikeassa lokuksessa, se johtaa eloonjäämisetuun kaikille tämän alkuperäisen solun myöhemmille jälkeläisille. Kloonien moninaisuuden perusteiden ymmärtäminen voi osoittautua oleelliseksi osaksi potilaiden hoitosuunnitelmaa, mikä auttaa ohjaamaan lääkkeiden valintaa ja määrittämään niiden kloonien prosenttiosuuden, jotka voivat olla reagoivia/resistenttejä tietyille hoidoille. Lisäksi monet myelooman hoitoon käytetyt hoidot todennäköisesti aiheuttavat mutaatioita vaikutusmekanismiensa kautta tai odottamattomien toissijaisten vaikutusten kautta. Ymmärtäminen vaikutuksia yksittäisten hoitojen ja erityisiä yhdistelmiä taustalla mutaationopeudet, jotka ajavat monimuotoisuutta kasvain väestöstä auttaa tunnistamaan hoito, jotka lisäävät taustalla mutaationopeus ja laittaa potilaan lisääntynyt riski kehittää aggressiivinen klooni. Nämä muutokset voidaan tunnistaa seuraavan sukupolven sekvensoimalla irtotavarana kasvainpopulaation verrattuna yksittäissoluklooneihin, jotka on valittu kyseisestä populaatiosta. Jotta voidaan tunnistaa monimuotoisuus mutaatioita löytyy irtotavarana kasvain populaation, ehdotamme, että yhden solun Kloonaus vanhemman populaation, ja sitten sekvensointi ja vertaamalla eri yksittäisten kloonien antaa paremman käsityksen satunnainen erilaisia mutaatioita läsnä yksittäisissä soluissa, jotka ovat peräisin samasta vanhemman väestöstä.
tunnistaaksemme myelooman satunnaispopulaation monimuotoisuuden valitsimme mallijärjestelmäksi ihmisen myeloomasolulinjan KMS-18. Lajitimme yksittäiset solut kms-18-vanhempaispopulaatiosta FACS: n mukaan valintakriteerein, jotka perustuvat yksinomaan elinkelpoisiin yksittäissoluihin. Nämä yksittäin lajitellut solut laajenivat viikkojen ajan, kunnes populaatio oli tarpeeksi suuri analysoitavaksi (kohde noin 5E6 solua). Näistä yksisoluklooneista valittiin neljä (SCC_04, SCC_10, SCC_16, SCC_18) analysoitavaksi. Koko genomikirjastot valmisteltiin ja 3,2 Mb: n alue kuvattiin Agilent SureSelect Kinome capture kit-järjestelmällä. Lopulliset kaappauskirjastot jaksotettiin Illumina MiSeq-alustalla keskimääräiseen kohdealueen syvyyteen 200x.
tulokset suodatettiin, jotta voitiin tunnistaa pelkästään yhdessä alaluokassa esiintyvien mutaatioiden määrä toiseen verrattuna. Tällaisia tapahtumia oli joko alkuperäisessä yksittäisessä solussa tai ne sattuivat jo yksisoluisen kloonin laajenemisen alkuvaiheessa. Rajoittaaksemme analyysin koskemaan tapahtumia alkuperäisessä yksittäisessä solussa tai hyvin varhaisessa kaksinkertaistumisprosessissa tunnistimme variantteja, joita havaittiin >20%: n esiintymistiheydellä. Monet näistä tapahtumista olivat läsnä useita yhden solun klooneja, jotka voivat määritellä kloonisuhde kunkin alkuperäisen solun, kuitenkin 10% näistä muunnoksista oli ainutlaatuinen yhden subclone. Keskimäärin havaitsimme 1,6 mutaatiota kohdealueen Mb: tä kohden. Jos tämä sama mutaationopeus pitää paikkansa koko genomissa, odotamme näkevämme yli 5000 ainutlaatuista mutaatiota minkä tahansa kahden satunnaisen solun välillä, jotka on otettu kasvainnäytteestä.
meneillään on tutkimuksia, joissa tutkitaan kloonien erilaisuutta alalajien sukupolvien välillä. Lisätutkimuksia on myös käynnissä kloonien monimuotoisuuden muutosten tarkastelemiseksi eri myelooma-alatyyppien välillä, olettaen, että aggressiivisemmat alatyypit, kuten t(4;14) ja MAF, voivat johtaa monimuotoisempaan kloonipopulaatioon. Jos monipuolisempi klooninen populaatio korreloi aggressiivisemman kasvaimen alatyypin kanssa, niin tämä palaa täyden ympyrän kysymykseen sopivista hoidoista, ja jos tietyt hoidot voivat todellakin lisätä monimuotoisuutta kasvainpopulaatiossa ja johtaa aggressiivisempaan taudin uusiutumiseen.
ei relevantteja eturistiriitoja ilmoitettavaksi.
