Cnidium officinale Makinon ja Ligusticum chuanxiong Hortin vapaiden radikaalien keräilytoiminta. metanoliuutteet | Jiotower
tulokset ja keskustelu
useat patologiset tapahtumat, kuten tulehdusprosessi, sepelvaltimotauti ja ikääntymisilmiöt, liittyvät ROS: n syntymiseen. Niinpä tässä tutkimuksessa osoitimme, että C. officinalen ja L. chuanxiongin uutteilla on myös antioksidanttisia ominaisuuksia, koska ne pystyivät suojaamaan soluja hapettumisvaurioilta ja myös estämään ROS: n muodostumista.
TEAC-määrityksen osalta taulukossa 1 esitetään C. officinalen ja L. chuanxiongin antiradinen kapasiteetti vesijärjestelmässä mitattuna Abts-radikaaleja määrittämällä. Abts-määritystä on käytetty kasvimateriaalien kokonais antioksidanttiaktiivisuuden mittaamiseen. Rice-Evansin ja Millerin käyttämä Teak heijastaa vedyn tai elektroneja lahjoittavien antioksidanttien suhteellista kykyä haaskata ABTS-radikaalin kationia verrattuna Troloksin vastaavaan. Tässä tutkimuksessa C. officinale ja L. chuanxiong alueella 0-150 µg / ml osoitti antiradista aktiivisuutta, ja näiden näytteiden antiradinen aktiivisuus lisääntyi uutteiden pitoisuuden kasvaessa, mikä osoittaa, että C. officinale ja L. chuanxiong osoittivat vapaiden radikaalien raadollista aktiivisuutta. Kuten taulukosta 1 käy ilmi, C. officinalen ja L. chuanxiongin haaskakykyä ABTS-radikaalikationilla verrattiin askorbiinihappoon. Lisäksi C. officinalella havaittiin huomattava vaikutus ABTS-kationiradikaaleihin verrattuna standardiin, askorbiinihappoon, joka määritettiin teakilla.
Table 1
Antioxidant activities of methanol extracts of C. officinale and L. chuanxiong
TEAC (mM TE/g) | ORAC (mM TE/g) | DPPH (mM TE/g) | |
---|---|---|---|
CO | 2.022 ± 0.538 | 0.484 ± 0.162 | 2.942 ± 0.495 |
LC | 1.249 ± 0.224 | 0.260 ± 0.015 | 4.658 ± 1.183 |
AAa | 0.828 ± 0.010 | 0.030 ± 0.018 | 1.332 ± 0.027 |
arvot ovat kolmen mittauksen keskiarvoja ± SD. CO: C. officinale, LC: L. chuanxiong, AA: askorbiinihappo, TEAC: Trolox-ekvivalentti antioksidanttikapasiteetti, ORAC: happiradikaalien absorbanssikapasiteetti, DPPH: 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyli
taulukossa 1 esitetään myös näytteiden ORAC. Vapaiden radikaalien vaurioiden kohteena on käytetty lukuisista punalevälajeista peräisin olevaa erittäin fluoresoivaa proteiinia, beetafykoerythriiniä (PE). AAF: n lämpöhajoamisesta syntyvät peroksyyliradikaalit sammuttavat fykoerytriinin fluoresenssin, kun taas nopeasti peroksyyliradikaalien kanssa reagoivan antioksidantin lisääminen estää fluoresenssin intensiteetin menetyksen ja tämä inhibitio on verrannollinen antioksidanttiaktiivisuuteen. Lopulliset tulokset voidaan laskea käyttämällä phycoerythriinin hajoamiskäyrien alaisten alueiden eroja nollanäytteen ja näytteen välillä, ja ne ilmaistaan Troloksiekvivalentteina. Tässä tutkimuksessa tulokset osoittivat, että C. officinalella ja L. chuanxiongilla on samanlainen antioksidanttikapasiteetti. Lisäksi ORAC-määritys osoitti, että C. officinale-uutteen antioksidanttipitoisuus on selvästi parantunut tavanomaiseen askorbiinihappoon verrattuna.
vakaa DPPH-radikaalimalli on laajalti käytetty, suhteellisen nopea menetelmä vapaiden radikaalien raadonsyöjäaktiivisuuden arviointiin. Kasvien antioksidanttien vaikutuksen DPPH-radikaaleihin arvellaan johtuvan niiden vedynluovutuskyvystä. Antioksidanttien aiheuttaman DPPH-radikaalin absorbanssin väheneminen antioksidanttimolekyylien ja radikaalin välisen reaktion vuoksi etenee, minkä seurauksena radikaali haalitaan vetyluovutuksella. Taulukko 1 kuvaa DPPH-radikaalien pitoisuuden merkittävää vähenemistä, joka johtuu sekä C. officinale-että L. chuanxiong-uutteiden ja standardin raadontakyvystä. Myös vapaiden radikaalien haaskausaktiivisuus lisääntyi pitoisuuden kasvaessa. Nämä tulokset osoittivat, että molemmat uutteet on huomattava vaikutus scavenging vapaita radikaaleja. L.: N metanoliuute chuanxiong osoitti voimakkaampaa DPPH: n haaskausta kuin C. officinale metanoliuute verrattuna standardiin. Käytimme askorbiinihappoa standardina.
lisäksi voidaan kohdistaa kyky etsiä tiettyjä radikaaleja. Koska eri ROS-aineilla on erilaiset reaktiomekanismit, antioksidanttiaktiivisuuden täydellinen määrittäminen monenlaisia ROS-arvoja vastaan edellyttää kattavampaa määrityskokonaisuutta. Superoksidianioni (O2· -) radikaali on tärkeä tekijä biologisissa systeemeissä. Sen määrittämiseksi, johtuiko NBT: n pelkistymisen estyminen superoksidien raadonsyöjäaktiivisuudesta, käytettiin ei-entsymaattista superoksidien muodostusjärjestelmää. PMS-NADH-NBT-järjestelmässä PMS-NADH: n kytkentäreaktiossa liuenneesta hapesta johdettu superoksidianioni pelkistää NBT: tä. Absorbanssin väheneminen 560 nm: ssä antioksidanttien kanssa kertoo superoksidianionin kulutuksesta reaktioseoksessa. Taulukossa 2 esitetään superoksidiradikaalin muodostumisen prosentuaalinen estyminen 0-150 µg/ml C. officinale-ja L. chuanxiong-metanoliuutteilla verrattuna askorbiinihapon osoittamaan estoon. C. officinale-ja L. chuanxiong – metanoliuutteet osoittivat annosriippuvaista superoksidiradikaalien inhibitiota. Sekä C. officinale-että L. chuanxiong-uutteilla on voimakas superoksidiradikaalien keräysaktiivisuus (IC50 = 96.30 ja 93.85 µg / ml). Saatujen tulosten perusteella voidaan olettaa, että C. officinalen ja L. chuanxiongin metanoliuutteilla on antioksidanttiaktiivisuutta, mikä näkyy tässä superoksidiradikaalin poistumisena. Kaikkien näiden uutteiden IC50-arvot olivat suuremmat kuin askorbiinihapon, jossa IC50 saavutettiin 8,76 µg: n pitoisuudella.
Taulukko 2
C. officinale-ja L. chuanxiong-yhdisteiden Metanoliuutteiden vapaiden radikaalien syövytys-ja metallikelatointiaktiivisuus (IC50 µg/ml)
O2 * | H2O2 | OH * | ei * | Metallikelataatio | |
---|---|---|---|---|---|
CO | 96.259 ± 8.024 | 136.280 ± 2.307 | 119.442 ± 7.444 | 57.252 ± 8.973 | 138.425 ± 13.292 |
LC | 93.848 ± 9.529 | 136.318 ± 2.626 | 113.107 ± 8.890 | 76.502 ± 3.033a* | 17.451 ± 5.858a* |
AAb | 8.762 ± 4.569 | 8.053 ± 3.677 | 3.034 ± 0.191 | 9.885 ± 0.478 | 43.235 ± 8.543 |
Values are means ± SD of three measurements. CO: C. officinale, LC: L. chuanxiong, AA: Ascorbic acid, O2·–: superoxide radical, H2O2: hydrogen peroxide, OH·: hydroxyl radical, NO·: nitric oxide radical
H2O2: n haaskaaminen molempien uutteiden avulla voi johtua niiden fenoleista, jotka voivat luovuttaa elektroneja H2O2: lle, jolloin se neutraloituu vedeksi. Näiden kahden uutteen välinen H2O2-keräyskapasiteetti voi johtua niiden elektroneja luovuttavista kyvyistä. Molempien uutteiden kyky haaskata H2O2 tehokkaasti esitetään taulukossa 2, jossa sitä verrataan askorbiinihapon standardiin. Otteet pystyivät saalistamaan H2O2: ta keskittymisriippuvaisesti. C. officinale ja L. chuanxiong-uutteissa (0-150 µg/ml) IC50 oli vastaavasti 136,28 ja 136,32 µg/ml, kun taas askorbiinihapossa oli 8,05 µg/ml. Korrelaatio C. officinale-ja L. chuanxiong-arvojen välillä oli tilastollisesti merkityksetön. Vaikka H2O2 itsessään ei ole kovin reaktiivinen, se voi joskus aiheuttaa sytotoksisuutta synnyttämällä hydroksyyliradikaaleja solussa. Siten H2O2: n poistaminen on erittäin tärkeää koko ruokajärjestelmässä.
The C. officinale and L. chuanxiong-metanoliuutteita arvioitiin myös niiden kyvystä kerätä hydroksyyliradikaaleja deoksiriboosin hajoamistestillä. Tässä tutkimuksessa tulokset osoittivat, että kaikki näytteet kykenivät estämään deoksiriboosin hajoamista (0-150 µg/ml) profiililtaan samanlaisena. Biokemialliset tutkimukset osoittivat, että C. officinale ja L. chuanxiong aiheuttivat pitoisuudesta riippuvan deoksiriboosin hajoamisen eston. IC50-arvon tasolla C. officinalella (119, 44 µg/ml) ja L. chuanxiongilla (113, 11 µg/ml) oli sama teho . Yhteensä OH radikaali raadonsyöjäkapasiteettia kunkin uutteen verrattiin askorbiinihapon.
kasviuutteita mitattiin ja verrattiin niiden vapaiden radikaalien keräysaktiivisuuteen typpioksidiradikaaleja vastaan. C. officinale-ja L. chuanxiong – metanoliuutteiden no-scavenging-aktiivisuutta tutkittiin käyttämällä SNP: tä NO· – luovuttajana. SNP: stä vapautuva NO reagoi hapen kanssa muodostaen nitriittiä. Mikään haaskalintu ei kilpaile hapen kanssa reagoidessaan PBS: n SNP-liuoksesta vapautuneeseen NO·: aan. Tässä tutkimuksessa, otteita C. officinale ja L. chuanxiongilla ei havaittu haaskakykyä· vaikka joitakin eroja huomattiin. Ei * C. officinalen haaskausaktiivisuus oli merkittävämpää kuin L. chuanxiongin. Tämä inhibitio saattaa johtua myös siitä, että NO·: ta poistetaan suoraan uutteiden avulla. C. officinale oli suurin toiminta sammuttaa mitään radikaalia. IC50-arvot olivat C. officinalella 57, 25 µg/ml ja L. chuanxiongilla 76, 50 µg / ml.
arvioitiin C. officinale-ja L. chuanxiong-uutteiden aiheuttama rauta-ionien Kelaatio, jossa ferrotsiini muodostaa kvantitatiivisesti komplekseja Fe2+: n kanssa. Kelatoivien aineiden läsnä ollessa tämän kompleksin muodostuminen häiriintyy, mikä estää myös kompleksin antaman punaisen värin muodostumista. Tämän värimuutoksen mittaaminen mahdollistaa sen vuoksi rinnakkaisen kelatoijan kelatoivan aktiivisuuden arvioimisen. Tässä määrityksessä sekä uutteet että standardi antioksidanttiyhdiste häiritsivät rauta–ferrotsiinikompleksin muodostumista, mikä viittaa siihen, että niillä on kelatoivaa aktiivisuutta, joka vangitsee rauta-ionin ennen kuin se voi muodostaa kompleksin ferrotsiinin kanssa. Kuten taulukosta 2 ilmenee, Fe2+–ferrotsiinikompleksin muodostuminen ei ole täydellistä C. officinale-ja L. chuanxiong-metanoliuutteiden läsnä ollessa, mikä osoittaa, että molemmat uutteet kelatoivat rautaa. Fe2+ -ferrotsiinikompleksin absorbanssi väheni lineaarisesti annosriippuvaisesti (0-150 µg/ml). Ero C. officinalen ja L. chuanxiongin otteisiin oli tilastollisesti merkittävä. C. officinalen ja L. chuanxiongin metanoliuutteiden sekä askorbiinihapon (kaikki IC50 µg/ml) metallisia kelatointikapasiteetteja olivat 138,43, 17,45 ja 43.24, mikä osoittautui merkittäväksi eroksi otteiden ja kontrollien välillä.
C. officinalen ja L. chuanxiongin vaikutusten määrittämiseksi n2a-solut altistettiin C. officinale-ja L. chuanxiong-soluille (50-500 µg/ml) 1 tunnin inkubaatioajan ajan. kuvassa 1 MTT-testi 1 tunnin inkubaation jälkeen C. officinale-soluviljelmillä ei viittaa merkittävään elinkykyisyyseroon käsitellyissä n2a-soluviljelmissä verrattuna kontrolliin. MTT: n kokeessa 1 tunnin kuluttua L. chuanxiongilla havaittiin L. chuanxiong 500 µg/ml hoidettuja n2a-soluja verrattuna kontrolliin. Kuten kuvasta 2 ilmenee, määritystä ei tehty 1 tunnin inkubaation jälkeen C. officinalen ja L. chuanxiongin (50-500 µg/ml) läsnäollessa. L. chuanxiong-hoito ei vähentänyt NO: n vapautumista merkitsevästi kontrolliin verrattuna, mutta 500 µg/ml C. officinale vähensi merkitsevästi NO: n vapautumista. Tästä tuloksesta voidaan päätellä, että C. officinalen ja L. chuanxiongin metanoliuutteilla ei käytetyillä annoksilla ole toksisia vaikutuksia.
C. officinale-ja L. chuanxiong-metanoliuutteiden vaikutus solujen elinkykyyn N2a-soluissa. Arvot ovat kolmen mittauksen keskiarvoja ± SD. * P < 0, 05 verrattuna hoitamattomaan normaaliin (ANOVA / Tukey)
C. officinalen ja L. chuanxiong metanoliuutteet typpioksidin vapautumista N2a soluissa. Arvot ovat kolmen mittauksen keskiarvoja ± SD. * P < 0, 05 verrattuna hoitamattomaan normaaliin. (ANOVA / Tukey)