Sytokeratiini 5/6 ja sytokeratiini 8/18 ilmentymä kolmoisnegatiivisissa rintasyövissä: klinikopatologinen merkitsevyys Etelä-Aasian populaatiossa

menetelmät

yhteensä 150 TNBC-tapausta valittiin patologian osaston arkistoista. Kirurgiset näytteet sisälsivät muunneltuja radikaalimastomioita, yksinkertaisia mastektomioita ja laajoja paikallisia leikkauksia, joissa oli sentinel-imusolmuke-dissektio. Kaikille potilaille tehtiin leikkauksia Liaquatin kansallisessa sairaalassa, Karachissa tammikuusta 2008 joulukuuhun 2013 6 vuoden ajan. Tutkimuksen hyväksyi laitoksen tutkimus-ja eettinen arviointikomitea ja tietoon perustuva suostumus otettiin kaikilta potilailta leikkauksen yhteydessä. Hematoksyliinin ja eosiinin värjäämiä dioja ja parafiinilohkoja haettiin ja uusia osia leikattiin tarvittaessa. Dioja kaikista tapauksista tarkasteltiin kaksi vanhempi histopatologists ja patologiset ominaisuudet, kuten histologinen tyyppi, kasvain luokka, T-vaihe, N-vaihe, lymfovaskulaarinen invaasio, nekroosi, fibroosi, lymfosyyttinen infiltraatio (tuumori infiltroituvia lymfosyyttejä), läsnäolo insitu komponentti, pagetoidi leviäminen ja ihon imunestejärjestelmän invaasio arvioitiin. Kaikkien potilaiden kliiniset tiedot tarkistettiin myös laitosrekistereistä, jotta voitiin arvioida potilaan ikä, sädehoito-ja kemoterapiahistoria sekä uusiutumistila. Lisäksi valittiin edustavia lohkoja kustakin tapauksesta ja ER, PR ja Her2neu immunohistokemia tehtiin kolmoisnegatiivisen tilan vahvistamiseksi.

ER, PR, Her2neu ja Ki67 IHC tehtiin käyttäen Dako-vasta-aineita kuten alla, EnVision™ FLEX, high pH DAKO kit valmistajan protokollan mukaan.

1. FLEX monoklonaalinen kani anti-human estrogeenireseptor alfa, klooni EP1.

2. FLEX monoklonal mouse anti-human progesterone receptor clone PgR 636.

3. polyklonaalinen kaniini anti-human C-erbB – 2-onkoproteiini.

4. FLEX monoklonaalinen hiiren anti-human Ki67 antigeenikloni MIB-1.

erytropoietiinin ja PR: n Nuclear-värjäytymistä > 1% syöpäsoluista pidettiin positiivisena. Her2neu: lle tapaukset pisteytettiin CAP-ohjeiden mukaisesti 1+, 2+ ja 3+. Epäselvissä tapauksissa (2+) FISH tehtiin Path Vysion Her2neu probe kit-testisarjalla valmistajan protokollien mukaisesti. Tulokset ilmaistiin her2neu-signaalien suhteena verrattuna CEP17-signaaleihin ASCO/CAP-ohjeiden mukaisesti.

Ki67-immunostisointi kirjattiin jatkuvina muuttujina positiivisten värjäytyneiden syöpäsolujen osuuden perusteella. Lisäksi ki67-indeksin perusteella tapaukset luokiteltiin < 15, 16-24, 25-44 ja > 44% ki67-indeksiluokkiin.

CK5/6 IHC suoritettiin käyttämällä FLEX monoklonaalista hiiren Anti-human Sytokeratiinia 5/6, klooni D5/16 B4 Dako envision-menetelmällä valmistajan protokollan mukaisesti. Yli 10% soluissa havaittiin voimakasta sytoplasmavärjäystä ja kalvovärjäystä. Heikkoa tai keskivaikeaa värjäytymistä < 10%: lla pidettiin fokaalipositiivisena, kun taas värjäytymistä ei pidetty negatiivisena (Lisätiedosto 1: kuva S1).

ck 8/8 IHC suoritettiin monoklonaalisella hiiren anti-human Sytokeratiini 5/6, klooni D5/16 B4, Dako envision-menetelmän mukaisesti. Yli 50%: ssa soluista havaittiin voimakasta sytoplasmavärjäystä ja kalvovärjäystä. Heikko tai välivaiheen värjäytyminen (sytoplasma, johon liittyy kalvon reaktiivisuuden häviäminen) 10-50%: lla todettiin fokaaliseksi positiiviseksi, kun taas < 10%: lla ei värjäytymistä tai heikkoa värjäytymistä pidetty negatiivisena (Lisätiedosto 1: kuva S1).

Uusiutumistila ja seuranta arvioitiin käymällä läpi sairaalan potilastietoja. Kokonaiselossaoloaika otettiin leikkauksesta kuolemaan tai viimeiseen seurantaan asti ja taudista vapaa elossaolo määriteltiin ajaksi leikkauksen ja paikallisen uusiutumisen tai etäpesäkkeiden, kuoleman tai viimeisen seurannan välillä.

yhteiskuntatieteiden Tilastopakettia (SPSS 21) käytettiin tiedon keräämiseen ja analysointiin. Kvantitatiivisille muuttujille laskettiin keskiarvo ja keskihajonta. Yleisyys ja prosenttiosuus laskettiin kvalitatiivisille muuttujille. Chi square haettiin määrittää assosiaatio. Opiskelijoiden t-testiä tai Mann whitney-testiä käytettiin vertailemaan ryhmien välisiä keinoeroja. P-arvo ≤ 0,05 yhtä merkitsevä. Elossaolokäyrät piirrettiin Kaplan-Meier-menetelmällä ja elossaolokäyrien eron merkitys määritettiin log-rank-suhteella. P-arvo ≤ 0.05 pidettiin merkittävänä.

tulokset

tutkimukseen osallistuneiden potilaiden keski-ikä oli 48, 9 vuotta ja yleisin ikäryhmä oli 31-50 vuotta. Suurin osa T2-vaiheessa esitellyistä potilaista, joiden keskimääräinen ki67-indeksi oli korkea eli 46,9%. 42,7%: lla tapauksista oli solmukohtien etäpesäkkeitä. Vaikka 84% tapauksista oli tavanomaisesta invasiivisesta duktaalisyövästä, NST: stä; kuitenkin merkittävä osa tapauksista oli metaplastista histologiaa (9, 3%). Suurin osa tapauksista oli korkea-asteisia (86,7% III-asteisia). Useimmissa kasvaimissa esiintyy lymfosyyttistä infiltraatiota ja nekroosia. Useimmista kasvaimista puuttuu insitu-komponentti (61%). Paikallinen uusiutuminen tai myöhäinen etäpesäke todettiin 17, 8%: ssa tapauksista (Taulukko 1).

positiivinen (> 10%) CK5/6-ilmentymä todettiin 8%: lla (12 tapausta) TNBC: stä, kun taas 2, 4% (4 tapausta) oli fokaalinen positiivinen (< 10%) ja 89, 3% (134) oli negatiivinen CK5/6: lla. CK8/18-ilmentymän täydellinen häviäminen havaittiin 4, 7%: ssa (7 tapausta), kun taas 32, 7%: ssa (49 tapausta) havaittiin CK8/18-ilmentymän fokaalinen häviäminen ja 62, 7%: ssa (94 tapausta) CK8/18-ilmentymän muuttumaton normaali ilmentyminen. CK5/6: n ja CK8/18: n ei havaittu merkitsevästi liittyvän erilaisiin kliinisopatologisiin parametreihin (taulukot 2 ja 3). Myöskään kreatiinikinaasi 5/6: n ja kreatiinikinaasi 8 / 18: n merkittävää yhteyttä potilaiden uusiutumistilanteeseen ei havaittu (Lisätiedosto 2: Kuva S2).

Keskustelu

tässä tutkimuksessa arvioimme yhden TNBC: n perusasteen (CK5/6) ja yhden luminaalimarkkerin (CK8/18) ilmentymistä väestössämme ja havaitsimme, että; 8 ja 2, 7% TNBC: stä osoitti CK5/6: n positiivisen ja fokaalisen positiivisen ilmentymän vastaavasti ja 4, 7 ja 32.7% TNBC osoitti täydellinen menetys ja polttoväli menetys CK 8/18 expression vastaavasti. Kaikissa niissä tapauksissa, joissa havaittiin polttoväli CK8/18, havaittiin kalvojen reaktiivisuuden häviämistä, kun taas sytoplasmavärjäys säilyi harvoissa soluissa. Näiden sytokeratiinien epänormaalien ilmentymismallien ja TNBC: n erilaisten klinikopatologisten ja ennustavien parametrien välillä väestössämme ei kuitenkaan havaittu merkittävää yhteyttä. Rintasyöpä on Etelä-Aasian väestön yleisimpiä maligniteetteja erityisesti nuorella iällä .

Geeniekspressioprofilointi määrittelee tyviproteiinisyövät sellaisiksi, joissa esiintyy tyviproteiiniklustereita, joihin kuuluvat EGFR, tyviproteiinisytokeratiini 5/6, C–kit, proliferaatioklusteri ja her2neu: n ja hormonireseptoreihin liittyvien geenien Alhainen ilmentymä . Basaalinen rintasyöpä ei kuitenkaan ole yksittäinen kokonaisuus ja siihen kuuluu useita alatyyppejä, mukaan lukien kaksi basaalista alatyyppiä (BL1 ja BL2), mesenkymaalinen, mesenkymaalinen varren kaltainen, immunomodulatorinen ja luminaalinen androgeeninen alatyyppi . Sen lisäksi on määritelty myös interferonirikas ja claudin-low-alatyypit . ASCO/CAP ei suosittele basaalisen rintasyövän alatyypitystä. CK 5/6 ilmentyminen vaihtelee 24-72% TNBC kuten raportoitu aiemmissa tutkimuksissa . Muut tutkijat ovat myös ehdottaneet CK 5/6: n ennustavaa merkitystä solmun negatiivisissa rintasyövissä . Nielson ym. ehdotti, että CK5/6 positiivinen rintasyöpä on huonompi ennuste riippumaton kasvain luokka, T-vaiheessa ja hormonaalista / Her2neu tila . Samoin toisessa tutkimuksessa ehdotettiin, että CK5/6 on merkki lyhyemmästä taudista vapaasta elossaolosta riippumatta muista rintasyövän ennustavista tekijöistä . Inanc ym. ilmoitti 50.5% ilmentymä CK5 / 6 positiivinen korrelaatio CK5/6 TNBC solmukohtien etäpesäke ja kasvaimen koko . Kuitenkin, toisin kuin nämä tutkimukset löysimme Alhainen ilmentymä CK5 / 6 ilmentymä TNBC meidän tutkittu väestö, joka voi edustaa eri genomiprofiili TNBC meidän väestöstä, joka on tutkittava lisätutkimuksissa. CK5/6: n ennustavaa roolia on ehdotettu muissa elimistön syövissä .

CK8/18 on luminaalinen sytokeratiini, joka esiintyy pääasiassa rintojen epiteelissä kalvomaisessa ja sytoplasmamaisessa kuviossa. Cimpean ym. määritteli nämä CK8/18: n eri muodot rintasyövässä; diffuusi sytoplasminen, kalvomainen ja yhdistetty sytoplasminen ja kalvomainen .Jotkut tutkijat ovat esittäneet, että CK8/18 expression/low CK8/18: n häviäminen liittyy huonompaan ennusteeseen ja suureen etäpesäkkeiden riskiin . Emme kuitenkaan löytäneet mitään prognostista merkitystä CK8/18-lausekkeen häviämiselle eri prognostisilla tekijöillä ja toistumiselle TNBC: ssä.

havaitsimme, että 32,7% TNBC: stä osoittaa fokaalisen ilmaisun menetyksen CK8/18. Kaikissa näissä tapauksissa CK8/18: n kalvoreaktiot vähenivät, kun taas sytoplasmavärjäys säilyi vain harvoissa soluissa. Aiad ym. tutkimuksessa, jossa 70 tapausta rintasyöpä löytyi epänormaali ilmentyminen CK8 / 18 (sytoplasminen) 70% Egyptin rintasyöpä, jotka viittaavat paljon heterogeenisuutta sytokeratiinin ilmentyminen rintasyövän eri puolilla maailmaa .