A 2-klorodeoxiadenozin klasztogén aktivitása emlős szomatikus sejtekben
mutagenezis
kutatási cikk
a 2-klorodeoxiadenozin klasztogén aktivitása emlős szomatikus sejtekben
Gilmara Ausech AntonucciI; Catherine He TakahashiI; II
S. Pauló-i Egyetem, Orvosi Fakultation of Ribeir, Faculdade de Medicina de Ribeir, Departamento de Gen Operators, Ribeir Operators, SP, Brazília.
Iiuniverzidade S., Bölcsészettudományi Kar, Bölcsészettudományi Kar, Bölcsészettudományi Kar, Bölcsészettudományi Kar, Biológia Tanszék, Ribeir, SP, Brazília.
Levelezés
absztrakt
a krónikus rezisztens és előrehaladott limfoproliferatív rendellenességek kezelésére használt bázisanalóg 2-klór-oxiadenozin (2-CdA) citotoxikus mind az osztódó, mind a nem osztódó limfocitákra. Jelen munka a gyógyszer klasztogén potenciálját értékelte in vitro humán limfocitákban tenyészetben és in vivo balb / c egerek csontvelő sejtjeiben. Humán lymphocytákban a 2-CdA klasztogén hatását a sejtciklus G1, S és G2 fázisaiban vizsgálták három különböző koncentráció (10, 20 és 40 mg/mL) alkalmazásával. Az elemzett végpontok közé tartozott a mitotikus index (MI), a proliferációs index (PI), a testvérkromatidcsere (SCE) és a kromoszóma-aberráció (CA). A variancia (ANOVA) teszttel végzett statisztikai elemzés szignifikáns növekedést mutatott (p < 0.05) Az S fázisban kezelt sejtek CA frekvenciáiban, de az MI nem változott. A vizsgált koncentrációk nem növelték jelentősen az SCE-k átlagos gyakoriságát, és a sejt PI-jét sem változtatták meg a G1 és S fázisokban. Az in vivo vizsgált koncentrációk 0,25, 0,375 és 0,5 mg/ttkg voltak. Ebben a vizsgálatban a vizsgált dózisszintek mellett nem figyeltek meg változásokat a CA gyakoriságában és az MI-ben. Ezért az eredmények a 2-CdA klasztogén hatását jelzik az emberi limfocita tenyészetekben.
kulcsszavak: emberi limfociták, 2-CdA, kromoszóma-rendellenességek, SCE, sejtciklus.
Bevezetés
a purin analógok rendkívül aktívak a limfoproliferatív rendellenességek kezelésében (Pott-Hoeck and Hiddemann, 1995). Kladribin, 2-klorodeoxiadenozin (2-CdA), egy nukleozid analóg a halogénatom puringyűrűjének 2.helyén helyettesítve, amely rezisztenciát biztosít a dezaminációval szemben adenozin-deamináz (ADA). A 2-CdA választott gyógyszer a szőrös sejtes leukémia kezelésében, de nagyon hatékony más alacsony fokú limfoid rosszindulatú daganatokban is, beleértve a krónikus limfocita leukémiát (CLL). A szakirodalomban szereplő jelentések azt mutatták, hogy a 2-CdA a fludarabinhoz hasonló teljes válaszarányt (complete response, CR) és teljes válaszarányt (overall response, or) ad, de mindkét szer hatása a CLL-ben szenvedő betegek túlélési arányára még mindig bizonytalan. A 2-CdA által kiváltott CR Arány szignifikánsan magasabb, mint a hagyományos kemoterápiával kezelt betegeknél (Robak, 2001). A 2-CdA egy másik új kemoterápiás purin analóg, specifikus toxicitással a limfocitákra (Schrimer et al., 1997). A citotoxicitás proliferáló és nyugalmi sejtekben fordul elő, ami olyan eseményeket eredményez, mint a DNS és a fehérjeszintézis gátlása, valamint az apoptózis indukálása (Robertsson et al., 1993). A toxicitás ellenére jó eredményeket értek el a terápiás Válaszban, és ez a gyógyszer a fő lehetőség a tricoleukemia kezelésben, ahol a betegek szőrös sejtes leukémiát (HCL) mutatnak (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993).
az adenin-dezoxinukleozidok apoptózist indukálnak a nyugalmi limfocitákban, és hasznos gyógyszerek az indolens limfoproliferatív betegségek kezelésére. Számos mechanizmust javasoltak a nyugalmi sejtekben a dezoxiadenozin és analógjai toxicitásának magyarázatára, beleértve a dATP közvetlen kötődését az apaf-1 pro-apoptotikus faktorhoz, valamint a kaszpáz-9 és -3 utak aktiválását (Genini et al., 2000).
egy akut myeloid leukémiában szenvedő, 2-CdA-val és Ara-C-vel kezelt betegnél késleltetett csontvelő-helyreállítás, sinusitis és Candida tropicalis sepsis jelentkezett. Multisystem szervi elégtelenség alakult ki, és 1 hónappal az AML-kezelés megkezdése után meghalt. A post mortem vizsgálat, amely a mellkasra és a hasra korlátozódott, disszeminált candidiasist mutatott ki a tüdőben, a szívben, a májban, a vesékben és a lépben (Mathew et al., 2000).
Zwaan et al. (2002) megfigyelte, hogy a T(9:11) betegek szignifikánsan érzékenyebbek, mint más AML betegek a következő gyógyszerekre: citarabin (medián: 2,9-szeres), doxorubicin (4,5-szeres), mitoxantron (8,0-szeres), 2-klorodeoxiadenozin (10,0-szeres).
a nukleozid analógok (NA), mint például a citozin-arabinozid, a fludarabin, a kladribin és a gemcitabin az AML (akut mieloid leukémia) indukciós terápia alapvető alkotóelemei; hatékonyak a limfoproliferatív rendellenességek kezelésére is, és néhány szilárd daganat kezelésében alkalmazták őket. Ezeknek a fontos vegyületeknek közös jellemzőik vannak, nevezetesen a specifikus membrán transzporterek általi szállítás, valamint az intracelluláris célpontokkal való anyagcsere és kölcsönhatás szempontjából. Ezek azonban különböznek a transzporterek típusai, valamint bizonyos célokkal való preferenciális kölcsönhatásuk tekintetében, amelyek magyarázhatják a gyors proliferáló daganatok elleni hatékonyságot (Galmarini et al., 2001).
ezen információk figyelembevételével fontos a 2-CdA klasztogén potenciáljának felmérése azon jelentések alapján, hogy ez a gyógyszer citotoxicitást indukál (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993) és DNS egyszálú törések (Liliemark and Juliusson, 1994). A vizsgálat célja annak értékelése volt, hogy a kemoterápiás szer képes-e kromoszóma károsodást kiváltani balb/C egerek humán limfocitáiban és csontvelősejtjeiben.
anyagok és módszerek
vegyi anyag
a tumorellenes 2-klorodeoxiadenozint az in vitro és in vivo kísérletekhez a Ribeir GmbH (Faculdade de Medicina de Ribeir!!!!!!!!!!!) kemoterápiás központja biztosította.
humán perifériás vér limfociták
vérmintákat hat, 25-35 éves, nemdohányzó egészséges önkéntestől (három nőtől és három férfitól) vettek, akiket a sejtciklus G1, S és G2 fázisában kezeltek a kromoszóma-rendellenességek (CA) és a mitotikus index (MI) elemzése céljából. Ezen kívül három egyedből (két nőstény és két hím) származó limfocitákat használtak a testvérkromatidcsere (SCE) és a proliferációs index (PI) elemzéséhez. A limfocitákat 78%-os RPMI-1640 táptalajban (Sigma Chemical Co., Utca. Louis, USA) 20% magzati borjúszérummal (Cultilab, Brazília) kiegészítve, penicillinnel (5 mg/mL) és sztreptomicinnel (10 mg/mL) kiegészítve. A sejteket 2% fitohemagglutininnel stimuláltuk (Life Technologies, Grand Island, NY). Minden 5 mL táptalajhoz 1 mL plazmát adtunk, majd a tenyészeteket 37 6CC-n 52 órán át inkubáltuk CA analízis céljából. A 2-CdA oldatokat ionmentesített vízben a következő koncentrációkban hígítottuk: 10, 20 és 40 mg/mL táptalaj, Preston et al. (1987). Minden kísérletben negatív kontroll szerepelt. A dia előkészítését és festését standard technikákkal végeztük (Moorhead et al., 1960). A testvérkromatidcsere (SCE) és a proliferációs index (PI) elemzésére szolgáló diákat olyan párhuzamos tenyészetekből nyertük, amelyekbe 5-bróm-2′-dezoxiuridin (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg / mL) a 2-CdA mellett adtuk hozzá. A differenciál testvérkromatid festést fluoreszcencia plusz Giemsa technikával, Hoechst 33258 (Calbiochem – Behring Corp.; 0,05 mg/mL Hank-oldat) és 5% Giemsa (Merck) alkalmazásával nyertük. Ez a módszer a korenberg and Freedlender (1974) és Perry and Wolff (1974) által közzétett módosítások. A diákat egy éjszakán át fehér fénynek tették ki. Metafázis készítmények 46-val 6 a kromoszómákat vak tesztben elemeztük. A kromoszómákat vázlatosan rajzoltuk az SCE pontozáshoz, valamint a CA elemzéshez.
kezelési protokollok
2-CDA lymphocyta tenyészetek kezelése a sejtciklus különböző fázisaiban
kromoszóma-rendellenességek (CAS)
a tenyésztés megkezdését követő hét óra elteltével (G1 fázis) a lymphocyta tenyészeteket 2-CdA-val kezeltük 1 órán át, 37 ~ C hőmérsékleten, szérum nélküli tápközegben. A sejteket a tenyésztés megkezdése után 52 órával rögzítettük. A 2-CdA-val végzett kezelés után a sejteket szérummentes táptalajban kétszer megmossuk, majd teljes táptalajban újra beültetjük. Az S fázisú kezeléshez 24 h-tenyészetet kezeltünk 2-CdA-val 6 órán keresztül. A sejteket szérummentes táptalajban kétszer megmossuk, teljes táptalajba visszadobjuk, majd 52 óra inkubálás után rögzítjük. A G2 fázisú kezeléshez 69 h-tenyészetet kezeltünk 2-CdA-val 3 órán keresztül, és a sejteket 72 óra inkubálás után rögzítettük. Kolhicint (Merck 0,016%) adtak hozzá 1,5 órával a rögzítés előtt. Az MI meghatározásához tenyészetenként 1000 sejtet értékeltek,és minden tenyészetből 100 metafázist elemeztek CA-ra, összesen 6000 sejtet, illetve 600 metafázist minden kezelésre.
Testvérkromatid cserék (SCE)
4 egészséges donortól (két nőstény és két hím) származó limfocita tenyészetet kezeltünk 5-BrdU-val (10
PI =
ahol M1 és M3 az első és harmadosztályú metafázisok száma (Degrassi et al., 1989).
állatok
a felhasznált állatok BALB/C egerek (Mus musculus) voltak, amelyeket a Ribeiri Orvostudományi Iskola Állatházából szereztek be.
In vivo vizsgálat Balb/C egereken csontvelő sejtek
a körülbelül 30 g tömegű egereket (5-6 hét) 8 állatból álló csoportokba osztották (4 hím és 4 nőstény), és intraperitoneális injekcióval kezelték 0-val.5 mL/végső térfogatú 2-CdA oldat desztillált vízzel hígítva a következő koncentrációkban: 0,25, 0,375 és 0,5 mg/ttkg. Huszonkét órával a kezelés után (azaz két órával az áldozat előtt) az egereket 0,3 mL/végső térfogatú 1% – os kolhicin oldattal (Sigma) injektáltuk, majd 2 órával később éter belégzéssel elpusztítottuk. A negatív kontrollcsoport 0,5 mL /végső térfogat/állat desztillált vizet kapott, a pozitív kontrollcsoport pedig 25 mg/testsúly kg ciklofoszfamidot (CP) kapott. A metafázis sejtek csontvelőkészítményeit standard technikával nyertük (Ford and Hamerton, 1956). A diákat vak teszttel elemezték, és állatonként 100 metafázist rajzoltak vázlatosan. Az MI-t úgy kaptuk, hogy állatonként 1000 elemzett sejtben megszámoltuk a mitotikus sejtek számát, 100 sejtet pedig CA-ra értékeltünk.
Statisztikai analízis
egyirányú varianciaanalízist (ANOVA) végeztünk az abnormális metafázisok számán és a CA, MI, SCE és PI összes számán, a p értékek kiszámításával a sejtciklus minden fázisára. Amikor p < 0.05-et találtunk, Az egyes kezelések átlagértékeit összehasonlítottuk a Student-Newman Keuls teszttel. A statisztikai elemzést a Sigma Stat (Jandel Corporation) szoftvercsomagok felhasználásával végeztük.
eredmények
humán limfocitákat
perifériás vér limfocitákat különböző koncentrációjú (10, 20 és 40 mg/mL) 2-CdA-val kezeltünk a sejtciklus G1, S és G2 fázisában. A kromoszóma-rendellenességeket (CA) és a mitotikus indexet (MI) hat egészséges egyén (három nő és három férfi) kezelt limfocitáiban elemezték (1.táblázat). Az S fázisban kezelt sejtek esetében a CA frekvenciák szignifikáns növekedését figyelték meg (p < 0,05) minden koncentrációban, a kontroll frekvenciákhoz képest. A megfigyelt kromoszóma-aberráció leggyakoribb típusai a kromatid és izokromatid hézagok (az adatok nem szerepelnek) és törések voltak, amelyeket kettős perc, kettős fragmentumok és egyetlen fragmentumok követtek. A G1 és G2 fázisban kezelt sejtek esetében a CA-gyakoriság nem mutatott statisztikailag szignifikáns különbséget a kezelt tenyészetek és a kontroll értékek között. Bár az MI enyhe eltérést mutatott, statisztikailag szignifikáns különbséget (p < 0,05) egyik kezelés során sem figyeltek meg a kontrollindexekhez viszonyítva.
a testvérkromatidcsere (SCE) és a proliferációs index (PI) átlagos gyakoriságát négy kontrollcsoportban és 2-CdA-val kezelt lymphocyta tenyészetekben határozták meg a G1 és S fázis alatt 72 óra után betakarított tenyészetekben (2.táblázat). A vizsgált koncentrációk (10, 20 és 40 mg/mL) nem növelték jelentősen az SCE-k átlagos gyakoriságát, és a sejt PI-jét sem változtatták meg a G1 és S fázisok alatt (2.táblázat).
Balb / C egér csontvelő rendszer
CA és MI gyakoriságokat 8 Balb/c egér (4 nőstény és 4 hím) csontvelősejtjeiben elemezték 0,25, 0,37 és 0,50 mg/ttkg 2-CdA-val végzett intraperitoneális kezelést követően (3.táblázat). Az in vivo vizsgálatban a 2-CdA egyetlen vizsgált dózis esetében sem mutatott citotoxikus hatást a CA gyakoriságára és az MI értékekre vonatkozóan, amikor az összes kezelési csoportot összehasonlították. A legtöbb rendellenesség kromatid típusú törés volt. Nem találtak szignifikáns különbséget (p < 0,05) sem az állatok között, sem a hímek és nőstények között a vizsgált paraméterek tekintetében.
megbeszélés
az elmúlt években számos tanulmány kimutatta a limfoid rosszindulatú daganatok kezelésében alkalmazott gyógyszerek antiproliferatív hatását. A 2-CdA egy bázisanalóg, amelyet kemoterápiában alkalmaznak egy bizonyos típusú leukémia, a szőrös sejtes leukémia. Vannak olyan adatok is, amelyek azt mutatják, hogy a 2-CdA más gyógyszerekkel kombinálva alkalmazható a refrakter és visszatérő alacsony fokú non-Hodgkin limfóma (NHL) kezelésében (Laurencet et al., 1999; Robak et al., 1999). Ebben a munkában egy in vitro citogenetikai vizsgálatot végeztek a humán lymphocytákban a 2-CdA klasztogén potenciáljának értékelésére a CA és SCE indukciója tekintetében. Moore és Bender (1993) szerint a strukturális CAs a kromoszómális anyag elvesztését eredményezheti. A kialakult CA típusa a DNS-ben indukált elváltozás jellegétől és a sejtciklus fázisától függ ,amely alatt a sejteket kitették (Natarajan et al., 1996).
lymphocyta tenyészeteket három 2-CdA koncentrációval (10, 20 és 40 mg/mL) kezeltünk a sejtciklus különböző fázisaiban. A gyógyszer klasztogén hatását a CA frekvenciák szignifikáns növekedése (p < 0,05) igazolta a sejtciklus S fázisában vizsgált összes koncentrációban. Ebben a fázisban a 2-CdA-t 6 órán át hagyták a tenyészetekben. A sejtciklus egy meghatározott fázisában ható szerek esetében az alkalmazás sorrendje meghatározhatja a kombinációs terápia hatékonyságát és toxicitását (Smorenburg et al., 2001).
ezek az eredmények összhangban vannak más szerzők (Carson et al., 1983), ami arra utal, hogy a 2-CdA beépül a DNS-be, amely egyszálú töréseket (SSB-ket) termel. Az SSB-k mind közvetlenül, mind a sérült cukrok széteséséből származhatnak, vagy közvetve, a foszfodiészter gerinc enzimatikus hasításával. A közvetlen SSB-k elsősorban a szabad gyökök, például a reaktív oxigénfajok támadásából származnak, míg a közvetett SSB-k elsősorban a DNS-bázis kivágás javításának (BER) normál köztitermékei. Az SSB-k a leggyakoribb elváltozások, amelyeket exogén genotoxinok, például ionizáló sugárzás, alkilező szerek, valamint a topo1 méreg camptothecin és rákellenes származékai okoznak (Caldecott, 2004).
egyes jelentések azt mutatják, hogy az alap analógnak hosszabb időre van szüksége a foszforilezéshez (Gandhi et al., 1997). Ez a mechanizmus magyarázhatja a teljes kromoszóma-rendellenességek megnövekedett gyakoriságát a sejtciklus s fázisában. Ugyanez a mechanizmus fordul elő a mitomicin C-vel kezelt sejtekben, egy S-függő vegyületben, amely DNS-replikációt igényel a DNS-károsodások kromoszóma-rendellenességekké történő átalakításához (Evans and Scott, 1964; Traganos et al., 1980). Más tumorellenes szerek a 2-CdA mechanizmusát és hatását képviselik, mint például a fludarabin és az 1-b-D-arabinozilcitozin (ara-C).
a citotoxikus nukleozid analógok széles körű klinikai alkalmazással rendelkeznek. A rosszindulatú betegségek kezelésében alkalmazott első kemoterápiás szerek közé tartoztak. A rákellenes nukleozidok közé tartoznak a fiziológiás pirimidin és purin nukleozidok analógjai. Ezek a szerek antimetabolitokként hatnak, versenyeznek a természetes nukleozidokkal a DNS vagy RNS szintézis során, valamint a kulcssejt enzimek inhibitoraiként (Szafraniec et al., 2004), S-specifikusak, és foszforilezni kell a trifoszfátok aktiválásához (Plunkett et al., 1980). A sejtciklus s fázisában, amikor a genetikai anyagot a DNS replikációs gép duplikálja, a sejtek különösen érzékenyek a genotoxikus sértésre. Míg a G1 és G2/M ellenőrző pontok a ciklin-függő kinázok gátlása révén megállítják a sejtciklus progresszióját jól meghatározott pontokon, az S-fázison belüli ellenőrző pontokról ismert, hogy az S-fázison belül bármikor előfordulnak, és több jelátviteli útvonalat is magukban foglalnak (Sidorova and Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)
nagyon fontos elemezni a gyógyszerválasz mechanizmusát a sejtciklus különböző fázisaiban. A kromoszómális lézió magas szintje a 2-CDA citotoxicitásának tudható be, amelyet a 2-CdATP-vé történő átalakulása okoz, amely gátolja a DNS-szintézist és a DNS-helyreállítást, beleértve a ribonukleotid-reduktáz és a DNS-polimeráz enzimeket. Ez a vegyület rezisztenciát mutat az adenozin-deamináz (ADA) aktivitással szemben, amelyet egy klóratom és a hidrogén helyettesítése a puringyűrű adenozin 2.pozíciójában (Baltz and Montello, 1993).
az SCE-ket gyakran tekintik a genotoxicitás értékelésének paraméterének, mivel gyakoriságukat egyértelműen növeli számos mutagén és rákkeltő vegyi anyagnak való kitettség. Jelen kísérletben az SCE-k gyakorisága a 2-CdA-val kezelt kultúrákban enyhe növekedést mutatott a kontroll kultúrákhoz képest. A két fázisban megfigyelt növekedés nem változott jelentősen.
mivel sok gyógyszer metabolizálódása után aktiválódik, in vivo mutagenitási tesztek ajánlottak a metabolikus aktiválást igénylő vegyületek klasztogén aktivitásának felmérésére. Ez a megközelítés hasonló feltételeket is biztosít, mint az embereknél (Legator and Ward Jr., 1991). Bár vannak különbségek a rágcsálók és az emberek között, ajánlott, hogy minden értékelés mind in vitro, mind in vivo vizsgálatokon alapuljon, és ne csak egyiken (Huggett et al., 1996).
ebben a vizsgálatban a 2-CdA klasztogén hatását BALB/C egerek csontvelő sejtjeiben is elemezték 0,25, 0,375 és 0,5 mg/ttkg koncentrációban. Az eredmények azt mutatták, hogy a 2-CdA nem volt hatékony a kromoszóma-rendellenességek kiváltásában. Az in vivo hatás hiánya a rendelkezésre álló 2-CdA korlátozott mennyiségének tudható be, mivel hígított körülmények között adományozták. A gemcitabin bázisanalóg genotoxikus hatásairól egér csontvelő sejtjeiben számoltak be a micronucleus és a kromoszóma aberráció vizsgálórendszerek alkalmazásával. Aydemir és Bilaloglu (2003) azt mutatta, hogy a gemcitabin nem indukál jelentős CAs-t, és nem okoz csökkenést az MI-ben egy 6 órás kezelési periódusban a 2,0, 4,0 és 8,0 mg/ttkg dózisok mellett, összehasonlítva a negatív kontroll; ezzel szemben az összes CAs gyakoriságát szignifikánsan növelte a gemcitabin (p < 0, 0001) egy 24 órás kezelési periódussal azonos dózisokkal.
összefoglalva, a 2-CdA klasztogén hatást mutatott az in vitro kezelt humán lymphocytatenyészetekben a sejtciklus S fázisában, de a G1 és G2 fázisban kezelt sejtekben nem figyeltek meg szignifikáns klasztogén hatást. Egereken végzett in vivo vizsgálatban a 2-CdA nem mutatott klasztogén hatást a vizsgált dózisszinteken.
Köszönetnyilvánítás
hálásak vagyunk Prof. Dr. A. T. Natarajan, Dr. Elza T. Sakamoto Hojo és Dr. Lusania G. Antunes a kézirathoz fűzött értékes megjegyzésekért, valamint Luiz Augusto da Costa Jr., Silvio A. dos Santos és Sueli A. Neves asszony értékes technikai segítségért. CAPES and FAPESP process n. 99/10643 – 7 támogatta ezt a kutatást. A kutatási Etikai Bizottság jóváhagyta a projektet (folyamat: CONEP n. 25000.074430/2001-88).
Andreassen PR, Lohez OD and Margolis RL (2003) G2 és orsó szerelvény checkpoint adaptáció, és tetraploidia letartóztatás: következményei intrinsic és kémiailag indukált genomiális instabilitás. Mutat Res 532:245-53.
Aydemir n és Bilaloglu R (2003) két rákellenes gyógyszer, a gemcitabin és a topotekán Genotoxicitása egér csontvelőben in vivo. Mutat Res 537:43-51.
Baltz JK és Montello MJ (1993) kladribin a hematológiai rosszindulatú daganatok kezelésére. Klinikai Gyógyszertár 12: 805-813.
Caldecott KW (2004) DNS egyszálú törések és neurodegeneráció. DNS javítás (Amst) 3:875-82.
Carson DA, Wasson DB, Taetle R and Yu a (1983) a 2-klór-dezoxiadenozin specifikus toxicitása a nyugalmi és proliferáló humán limfocitákra. Vér 62: 737-743.
Degrassi F, de Salvia R, Tanzarella C és Palitti F (1989) kromoszóma-rendellenességek és SCE indukálása az emlős topoizomeráz I. inhibitora, a camptotecin által.Mutat Res 211:125-130.
Evans HJ és Scott D (1964) hatása a DNS-szintézis a termelés kromatid aberrációk röntgensugarak és malein-hidrazid a Vicia Faba Genetics 49:17-38.
Ford CE és Hamerton JL (1956) egy kolchicin hipotóniás citrát squash szekvencia emlős kromoszómák. Technika 3:247-251.
Galmarini CM, Mackey JR és Dumontet C (2001) nukleozid analógok: A gyógyszerrezisztencia és a visszafordítási stratégiák mechanizmusai. Leukémia 15: 875-890.
Gandhi V, Huang P, Chapman aj, Chen F és Plunkett W (1997) a fludarabin és az 1-béta-D-arabinofuranozilcitozin 5 ‘ trifoszfátok beépítése a DNS-polimeráz alfa által: affinitás, kölcsönhatás és következmények. Clin Rák Res 3: 1347-1355.
Genini D, Adachi S, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA és Leoni lm (2000) Dezoxiadenozin analógok indukálják programozott sejthalál krónikus limfocita leukémia sejtek károsítják a DNS és közvetlenül befolyásolja a mitokondriumok. Vér 96:3537-3543.
Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E és Koeman JH (1996) összehasonlító toxicitási vizsgálati módszerek. Élelmiszer Chem Toxicol 34: 183-92.
KORENBERG JR és Freedlender EF (1974) Giemsa technika testvérkromatid cserék kimutatására. Kromoszóma 48: 355-360.
Laurencet FM, Zulian GB, Guetty-Alberto M, Iten PA, Betticher DC és Alberto P (1999) kladribin ciklofoszfamiddal és prednizonnal az alacsony fokú limfoproliferatív malignus betegségek kezelésében. Br J Haematol 79: 1215-1219.
Legator MS és Ward Jr JB (1991) in vivo genetikai toxicitási adatok felhasználása a kockázatértékeléshez. Mutat Res 250:457-465.
Liliemark J és Juliusson G (1994) 2-klór-2′-dezoxiadenozin-klinikai, biokémiai és farmakokinetikai szempontok. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 42:7-10.
Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT és Raimondi SC (2000) kettős perces kromoszómák és c-MYC amplifikáció másodlagos myelodysplasiás szindrómában szenvedő gyermeknél akut limfoblasztos leukémia kezelése után. Leukémia 14: 1314-5.
Moore RC és Bender MA (1993) a kromoszóma aberráció kialakulásához vezető események Idősorai. Environ Mol Mutagén 22:208-213.
Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battipps DM és Hungerford DA (1960) perifériás vérből tenyésztett leukociták kromoszóma előkészítése. Exp Cell Res 20:613-616.
Natarajan AT, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez I, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen S és Xiao Y (1996) a kromoszóma-rendellenességek indukciós mechanizmusai és in situ hibridizációval történő kimutatásuk. Mutat Res 372:247-58.
Perry PE és Wolff S (1974) új Giemsa módszer a testvérkromatidok differenciálfestésére. Természet 251: 156-158.
Plunkett W, Chubb S, Alexander L és Montgomery JA (1980) a 9-b-d-arabinofuranozil-2-fluoroadenin és a 9-b-d-arabinofuranoziladenin toxicitásának és metabolizmusának összehasonlítása humán limfoblasztoid sejtekben. Rák Res 40: 2349-55.
Pott-Hoeck C és Hiddemann W (1995) purin analógok alacsony fokú limfómák és krónikus limfocitás leukémiák kezelésében. Ann Oncol 6:421-433.
Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee AF és Shelby M (1987) emlős in vivo citogenetikai vizsgálatok. Kromoszóma-rendellenességek elemzése a csontvelő sejtekben. Mutat Res 189:157-65.
Robak T (2001) kladribin a krónikus limfocita leukémia kezelésében. Leuk Limfóma 40: 551-564.
Robak T, G Xhamsterra-Tybor J, Urbanska H és Krikowski E (1999) 2-klorodeoxiadenozin (kladribin), mitoxantron és dexametazon (CMD) kombinációs kezelése refrakter és visszatérő, alacsony fokú non-Hodgkin lymphoma kezelésében. Leuk Lympho 32: 359-363.
Robertsson LE, Chubb S, Meyn RE, story M, Ford R, Hitelman WN és Plunkett W (1993) apoptózis sejthalál indukciója krónikus limfocitás leukémiában 2-klór-2′-dezoxiadenozin és 9-b-D-arabinozil-2-fluoradenin által. Vér 81: 143-150.
Schrimer M, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J és Konwalinka G (1997) az alacsony dózisú kladribin biztonságossági profilja refrakter rheumatoid arthritisben. Kísérleti tárgyalás. Scand J Rhematol 26:376-379.
Sidorova JM and Breeden LL (2003) korai G1/s átmenetek és genomiális instabilitás: az eredet kapcsolat. Mutat Res 532:5-19.
Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M és Verweij J (2001) a taxánok és antimetabolitok kombinált kemoterápiája: használata és korlátai. Eur J Rák 37: 2310-23.
Szafraniec SI, Stachnik KJ and Skierski JS (2004) Új nukleozid analógok a hematológiai rendellenességek kezelésében. Acta Pol Pharm 61:223-32.
Tallman MS, Hakimian D, Hogan D és Petersen L (1993) 2-Klorodeoxiadenozin a szőrös sejtes leukémia (HCL) kezelésében: a minimális reziduális betegség (MRD) kimutatása immunfestéssel (IS). Bemutatták a vérképzés molekuláris biológiájáról szóló 8. szimpóziumon Bázelben, július 9-13.
Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E és Kaul K (1992) a 2-klorodeoxiadenozin egyetlen ciklusa teljes remissziót eredményez a szőrös sejtes leukémiában szenvedő betegek többségében. Vér 80: 2203-2209.
Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz Z és Melamed MR (1980) az ellipticin hatása a sejtek túlélésére és a sejtciklus progressziójára tenyésztett emlőssejtekben. Rák Res 40:2390-2399.
Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, H ons K, Huismans DR, Zimmermann M, Harbott J, Slater RM, Creutzig U és Veerman AJP (2002) a gyermekkori sejtes gyógyszerrezisztencia az akut mieloid leukémia kromoszóma-rendellenességekkel függ össze. Vér 100: 3352-3360.
