A myeloma Tumor klonális sokfélesége: a sejtek Generációitól a kezelési Következményekig
a klonális sokféleség fogalma jól elfogadottá válik a rák fémjeleként. Ahogy a daganat növekszik és fejlődik, a sejtpopuláció genetikai tájképe megváltozhat. Ezek a változások nagyrészt az egyes sejtosztódások során bekövetkező véletlenszerű hibáknak vagy a különböző expozíciók által stimulált mutációs eseményeknek tudhatók be. Ha ezen véletlenszerű események egyike a megfelelő lókuszban történik, az túlélési előnyt eredményez a kezdeti sejt összes későbbi utódja számára. A klonális sokféleség alapjainak megértése a betegek kezelési tervének lényeges részének bizonyulhat, segítve a gyógyszer kiválasztását és annak meghatározását, hogy a klónok hány százaléka reagálhat/rezisztens lehet a specifikus kezelésekre. Sőt, a myeloma kezelésére alkalmazott terápiák közül sok valószínűleg mutációkat indukál hatásmechanizmusuk vagy váratlan másodlagos hatások révén. Az egyes terápiák és specifikus kombinációk hatásának megértése az alapul szolgáló mutációs arányokra, amelyek a tumor populáció sokféleségét vezérlik, segítenek azonosítani azokat a kezelési módokat, amelyek növelik az alapul szolgáló mutációs arányt, és fokozzák a beteg agresszív klón kialakulásának kockázatát. Ezeket a változásokat az ömlesztett tumor populáció következő generációs szekvenálásával lehet azonosítani az egysejtű klónokhoz képest, amelyeket ebből a populációból választottak ki. A tömeges daganatpopulációban talált mutációk sokféleségének azonosítása érdekében javasoljuk, hogy az egysejtű klónozza a szülő populációt, majd szekvenálja és összehasonlítja több egyedi klón között jobb képet ad az egyes sejtekben jelenlévő mutációk véletlenszerű változatosságáról, amelyek ugyanabból a szülőpopulációból származnak.
a myeloma sejtek véletlenszerű populációjában jelenlévő sokféleség azonosítására a humán myeloma sejtvonalat választottuk ki kms-18 mint Modellrendszer. A KMS-18 szülőpopuláció egyetlen sejtjeit FACS szerint rendeztük, kizárólag az életképes, egyetlen sejten alapuló kiválasztási kritériumokkal. Ezek az egyedileg rendezett sejtek hetek alatt kibővültek, amíg a populáció elég nagy volt ahhoz, hogy elemzésre összegyűjtsék (körülbelül 5e6 sejtet célozzanak meg). Ezen egysejtű klónok közül négyet (SCC_04, SCC_10, SCC_16, SCC_18) választottak ki elemzésre. Teljes genomkönyvtárakat készítettünk, és egy 3,2 Mb-os régiót rögzítettünk az Agilent SureSelect Kinome capture kit segítségével. A végső befogási könyvtárakat az Illumina MiSeq platformon szekvenáltuk egy átlagos célrégió mélységig, 200x.
az eredményeket szűrtük, hogy azonosítsuk a kizárólag az egyik szubklonban jelen lévő mutációk számát a másikhoz képest. Ilyen események vagy léteztek az eredeti egyetlen cellában, vagy az egysejtű klón terjeszkedésének korai szakaszában fordultak elő. Annak érdekében, hogy az elemzést az eredeti egyetlen cellában vagy a duplázási folyamat nagyon korai szakaszában jelen lévő eseményekre korlátozzuk, azonosítottuk azokat a variánsokat, amelyeket >20% gyakorisággal találtunk. Ezen események közül sok több egysejtű klónban volt jelen, amelyek meghatározhatták az egyes eredeti sejtek klonális kapcsolatát, azonban ezeknek a variánsoknak a 10% – a egyedülálló volt egyetlen alklonra. Átlagosan 1,6 mutációt figyeltünk meg a célrégió Mb-jára. Ha ugyanez a mutációs Arány igaz az egész genomra, akkor több mint 5000 egyedi mutációt várhatunk bármely két véletlenszerű sejt között, amelyeket ömlesztett tumormintából vettek.
jelenleg tanulmányok folynak a szubklonok generációi közötti klonális sokféleség vizsgálatára. További vizsgálatok is folyamatban vannak a különböző Myeloma altípusok közötti klonális sokféleség változásainak vizsgálatára, azzal a hipotézissel, hogy az agresszívebb altípusok, mint a t(4;14) és a MAF, változatosabb klonális populációhoz vezethetnek. Ha egy változatosabb klonális populáció korrelál az agresszívebb tumor altípussal, akkor ez teljes körűen visszatér a megfelelő terápiák kérdéséhez, és ha bizonyos terápiák valóban növelhetik a daganatos populáció sokféleségét, és a betegség agresszívabb visszaesését eredményezhetik.
nincs bejelentendő lényeges összeférhetetlenség.
