citomegalovírus (CMV) fertőzés HIV/AIDS betegekben és a CMV diagnosztikai értékei-DNS kimutatás különböző mintatípusokban

Bevezetés

a citomegalovírus (CMV) gyakori herpeszvírus, amely széles körben elterjedt az emberi populációkban. A CMV fertőzés általában nem okoz tüneteket, és elsősorban a nyálmirigyeket, a veséket és más szerveket érinti. A vírusreplikáció azonban előfordulhat immunhiányos betegeknél, és hozzájárulhat a szervek és funkcióik károsodásához. Az opportunista fertőzések gyakoribbak és súlyosabbak a HIV / AIDS-es betegeknél. A CMV vírusfertőzés gyakori ezeknél a betegeknél, és több szervet/rendszert érinthet, beleértve a szemet, a tüdőt, az idegrendszert és az emésztőrendszert. Számos tanulmány feltárta az egyszerű CMV-fertőzés virológiai és immunológiai jellemzőit (1), különösen a nőknél és a gyermekeknél. A CMV fertőzés immunológiai jellemzői azonban meglehetősen egyediek a már immunhiányos HIV / AIDS betegeknél. Különbségek vannak a klinikai jellemzők, a kezelési intézkedések, a prognosztikai tényezők között a CMV-fertőzésben szenvedő HIV-betegek és a CMV-fertőzésben szenvedő betegek között (2). A kínai iránymutatás azt javasolta, hogy a CMV és az ART azonnali antivirális terápiájára van szükség azoknál a HIV / AIDS-es betegeknél, akiknek szövődményei vannak (retinitis, tüdőgyulladás, CMV encephalitis, enteritis stb.) ha CMV-fertőzést azonosítanak. A CMV-fertőzés által okozott klinikai tünetek nem specifikussága miatt a CMV-fertőzés diagnosztizálásának fő alapja a laboratóriumi vizsgálat. A két legszélesebb körben alkalmazott klinikai módszer a CMV vírus replikáció és a szérum immunológiai módszerek, beleértve a CMV IgG, CMV IgM és CMV antigén PP65 kimutatását (2) károsodott immunfunkciójú betegeknél a CMV antitest termelése gyengül vagy késik, ami hamis negatívhoz vezethet, és növelheti a kimaradt diagnózis arányát, ezért a CMV-DNS PCR kimutatása nagyrészt a CMV fertőzés diagnosztizálásának és a kezelés monitorozásának standard módszerévé vált (3). Daisuke Mizushima et al. arról számoltak be, hogy a plazma CMV-DNS PCR-nek fontos értéke van mind a CMV retinitis, mind az összes CMV-EOD diagnózisában előrehaladott HIV-1 fertőzésben szenvedő betegeknél (4). A CMV-DNS PCR számos mintatípusban kimutatható, például plazmában, vizeletben, cerebrospinális folyadékban, vizes humorban, székletben stb. (5). Azonban kevés cikk elemezte és tárgyalta a CMV-DNS PCR kimutatásának jelentőségét és értékét a plazmától eltérő mintákban. Jelen tanulmányban retrospektív módon elemeztük a laboratóriumi vizsgálatokat (beleértve a CMV-DNS-t, CMV antitestet, CD4+ T limfocitaszámot, HIV vírusterhelést stb.) 808 HIV / AIDS betegben, akiket központunkban kezeltek 2017 – től 2019-ig, hogy megértsék a CMV koinfekcióját, valamint számos kimutatási módszer erősségeit és gyengeségeit. A következő cikket/esetet az MDAR jelentési ellenőrzőlistának megfelelően mutatjuk be (elérhető a http://dx.doi.org/10.21037/apm-20-1352címen).

módszerek

alanyok

összesen 808 HIV/AIDS fekvőbeteg került be a központunkba 2017 januárja és 2019 októbere között. A HIV-RNS-t, a CD4+ T lymphocytaszámot, a CMV-DNS-t és a kapcsolódó antitesteket minden betegnél mérték. A HIV-fertőzés diagnózisa a HIV/AIDS diagnózisán és kezelési irányelvein (harmadik kiadás) (6) alapult, és minden beteget HIV-fertőzésként igazoltak a Fuzhou Municipal Centers for Disease Control (CDC) vagy a helyi CDC, amely a beteget kezelte. A CMV-fertőzés diagnózisa a következő kritériumokon alapult: (I) CMV-DNS pozitív a plazmában, alveoláris mosófolyadék, vizelet, cerebrospinális folyadék (CSF) és / vagy más testnedvek; (II) szérum CMV-immunglobulin M (IgM) pozitív; (III) CMV retinitis szemészeti diagnózisa; (IV) CMV tüdőgyulladás, amely főként láz, köhögés, váladék és mellkasi szorítás formájában jelentkezik; CMV-DNS pozitív az alveoláris mosófolyadékban; (V) CMV enteritis vagy oesophagitis, amely elsősorban dysphagia/nyelési fájdalom, hasmenés vagy hasi fájdalom, valamint hatékony diagnosztikai Anti-CMV kezelés formájában jelentkezik; (VI) CMV encephalitis, amely idegrendszeri tünetekként nyilvánul meg, és CMV-DNS pozitív a CSF-ben vagy az agyszövetben; (VII) CMV hepatitis, amely lázként, kóros májfunkcióként és kellemetlen érzésként jelentkezik a májban, és CMV-DNS pozitív a májbiopsziában . A CMV-fertőzés diagnosztizálására akkor került sor, ha a fenti kritériumok bármelyike a II.pont kivételével teljesült, vagy ha a II. pont plusz bármely más kritérium teljesült (7).

az ebben a tanulmányban az emberi résztvevőket érintő összes eljárás összhangban volt a Helsinki nyilatkozattal (a 2013-ban felülvizsgált módon). A tanulmányt központunk Orvosi Etikai Bizottsága hagyta jóvá (Jóváhagyási szám. KS2019-070-01). Az adatok névtelenek, ezért eltekintettek a tájékozott beleegyezés követelményétől.

befogadás és kizárás

felvételi kritériumok: HIV / AIDS-es betegek, akik először látogatták meg a Fujian Orvostudományi Egyetem Mengchao hepatobiliáris kórházát, és 14 napon belül befejezték a HIV-RNS, CMV-DNS, CMV-IgG antitest, CMV-IgM antitest és CD4+ T limfociták kimutatását. Zárja ki azokat a HIV / AIDS eseteket, amelyek a minta elégtelen mérete miatt nem tudják teljesíteni a fenti vizsgálati elemeket.

reagensek és berendezések

HIV-RNS mennyiségi meghatározása

fluoreszcens Kvantitatív valós idejű polimeráz láncreakciót (PCR) (FQ-PCR) végeztünk az Mx3000p QPCR rendszeren (Agilent, USA) a QIAGEN (Shenzhen, Kína) által gyártott HIV-RNS kvantitatív készlet felhasználásával.

CD4+ T limfocita számlálás

az alkalmazott műszer a FACSCalibur áramlási citométer volt (BD Biosciences, USA), az alkalmazott reagenskészlet pedig a BD Multitest CD3/CD4/CD8/CD45 (BD Biosciences, USA).

CMV-DNS mennyiségi meghatározása

FQ-PCR-t végeztek az Mx3000p QPCR rendszeren (Agilent, USA) a CMV-DNS plazmaszintjének, vizeletének és CSF-jének kimutatására. A használt készletet a Sansure Biotech (Hunan, Kína) gyártotta.

CMV antitest teszt

kemilumineszcens immunvizsgálatot végeztek az anti-CMV-IgG és IgM antitestek kimutatására a Cobas e601 analizátoron (Roche Diagnostics, Németország) a támogató készletekkel (Roche Diagnostics, Németország).

vizsgálati módszerek

nukleinsav kimutatás

miután a HIV/AIDS betegeket kórházba vitték, 3 mL éhgyomri etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA) antikoagulált teljes vérmintát gyűjtöttünk, majd 3000 r/perc sebességgel 5 percig centrifugáltuk, hogy 200 ml plazmát gyűjtsünk a HIV-RNS és CMV-DNS kimutatására. Minden betegnél reggel 5 mL vizeletmintát gyűjtöttek össze, majd alaposan összekeverték, majd CMV-DNS-kimutatás céljából 200 6L-t gyűjtöttek be. Neurológiai tünetekkel rendelkező betegek esetében 1 mL CSF-t kaptunk a CMV-DNS kimutatására. A CMV-DNS kit és a HIV-RNS kit kimutatási határértéke és pozitív megítélési standardja szerint. A mintákat pozitívnak tekintették, ha a CMV-DNS érték 400 kópia/mL felett volt, vagy ha a HIV-RNS szint 500 kópia/mL felett volt.

a T-lymphocyta alcsoportok kimutatása

HIV/AIDS-es betegeknél a felvételkor 3 mL EDTA-antikoagulált éhomi teljes vérmintát gyűjtöttek, majd a T-lymphocyta alcsoport kimutatásához alaposan összekeverték egy BD FACSCalibur áramlási citométeren a kiegészítő reagensek alkalmazásával.

immun antitestek kimutatása

a HIV/AIDS betegeknél 3 mL éhomi vérmintát gyűjtöttünk a felvételkor, 3000 r/perc sebességgel centrifugáltuk 5 percig egy szérumcsőben gélelválasztóval, majd teszteltük a gépen.

a fenti vizsgálatokat szigorúan a gyártó kézikönyvében szereplő reagens utasításoknak és a műszerek szabványos működési eljárásainak megfelelően végezték el.

statisztikai elemzés

a statisztikai elemzést SPSS 21.0 szoftverrel végeztük. A normál eloszlású mérési adatokat a középértékek alapján mutatjuk be, a nem normál eloszlású adatokat pedig középértékként ( 25-75 percentilis) fejezzük ki. A számlálási adatokat százalékban és arányban fejezzük ki. A nem normálisan elosztott mérési adatok összehasonlítását két csoport között nem parametrikus rangösszegvizsgálat alkalmazásával végeztük, míg a számlálási adatokat a khi-négyzet teszt segítségével hasonlítottuk össze. A <0, 05 P értéket statisztikailag szignifikánsnak tekintették.

eredmények

Általános adatok

808 HIV/AIDS beteg általános adatait az 1.táblázat foglalja össze. A nem és az életkor nem mutatott szignifikáns különbséget a CMV-csoport és a nem CMV-csoport között. Az abszolút CD4 szám a CMV-fertőzött csoportban szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a CMV-fertőzött csoportban (Z=-8,87, P<0,001), és a HIV-RNS szint szignifikánsan magasabb volt a CMV-fertőzött csoportban, mint a nem CMV-fertőzött csoportban (Z=-3,207, P<0,05) (1.táblázat).

1. táblázat 823 HIV/AIDS beteg általános adatai
teljes táblázat

CMV-DNS, CMV-IgG és CMV-IgM pozitív aránya

a CMV-DNS teljes pozitív aránya 29,08% volt (235/808); pontosabban 5,70% (13/228) volt a CSF-ben 26,01% (77/296) a plazmában és 25,75% (180/699) a vizeletben. A CMV-IgG pozitív aránya 99,8% (806/808), a CMV-IgM pozitív aránya 10,40% (84/808) volt.

a CMV fertőzés Éscd4+ t limfocitaszám

a CD4+ T limfocitaszám csoportosítása után azt találtuk, hogy a CD4+ T limfocita alacsony frekvenciájú citomegalovírussal fertőzött betegek aránya nagyobb volt, mint a nem CMV-fertőzött betegeké. A CMV-fertőzés előfordulási gyakorisága a CD4-szám csökkenésével nőtt (2.táblázat).

2. táblázat a CD4-szám eloszlása a CMV-fertőzött csoportban és a CMV-nem fertőzött csoportban
teljes táblázat

a CMV-DNS kimutatása különböző mintákban

ebből a 808 betegből 198 beteg kapott plazma és vizelet CMV-DNS és plazma anti–CMV-IgG és CMV-IgM antitestek. A párosított adatok khi-négyzet analízisének felhasználásával a vizelet CMV-DNS-ét, illetve a plazma CMV-DNS-ét a plazma CMV-IgM antitesttel páronként összehasonlítottuk. Megállapították, hogy a vizelet és a plazma CMV-DNS kimutatásának eredményei szignifikánsan különböztek a plazma CMV-IgG antitest vizsgálat eredményeitől (P<0,001), míg a plazma CMV-DNS kimutatás eredménye nem különbözött szignifikánsan a vizelet CMV-DNS kimutatásának eredményétől (P>0,05) (3,4 táblázat).

3. táblázat a plazma CMV-DNS kimutatásának és a vizelet CMV-DNS kimutatásának eredményeinek összehasonlítása a plazma Anti-CMV-IgM antitest kimutatásának eredményeivel
teljes táblázat

4.táblázat a plazma és a vizelet CMV-DNS kimutatási eredményeinek összehasonlítása
teljes táblázat

Vita

a CMV a herpeszvírus-csoport tagja, és szigorú fajspecificitása és az emberi populációkban elterjedt előfordulása jellemzi. A CMV szeroprevalencia gyermekeknél körülbelül 85%, felnőtteknél pedig legfeljebb 95%. Jelenlegi tanulmányunkban a CMV-IgG pozitív aránya elérte a 99,8% – ot. A CMV a legtöbb esetben látens, de immunhiányos egyénekben a vírus exponenciálisan replikálódik és a vérrel terjed az egész testben, CMV virémiát, sőt szerves CMV betegséget okozva (8). A CMV-fertőzés az egyik leggyakoribb opportunista fertőzés HIV / AIDS betegek. A CD4+ T limfociták a HIV-vírus célsejtjei, és számuk gyakran tükrözi az AIDS lefolyását, és indikátorként is használható az AIDS-betegek immunállapotának értékelésére. Ez a tanulmány a CMV-fertőzést, a CD4-számot és a HIV-RNS-szintet elemezte 808 HIV / AIDS-ben szenvedő betegnél. Megállapítottuk, hogy a CMV pozitív aránya az AIDS-es betegeknél a CD4-szám csökkenésével és a HIV vírusterhelés növekedésével nőtt. Szintén a jelenlegi vizsgálatunkban a CMV-pozitív betegek akár 77,02%-ának CD4-száma <50 sejt/6L volt, ami arra utal, hogy a CD4 <50 sejt/6L a HIV-CMV koinfekció kockázati tényezője, amely összhangban van a Deng et al. (9). A HIV-RNS mennyiségi szintje CMV-vel fertőzött csoportban magasabb volt, mint a CMV-vel nem fertőzött csoportban, ami közvetett módon azt sugallta, hogy a HIV-RNS vírusterhelésének magas szintje a CMV-fertőzés másik kockázati tényezője volt HIV/AIDS betegek .Ezért javasolt, hogy a HIV / AIDS-ben szenvedő betegek a lehető leghamarabb kezdjék meg az ART-kezelést az immunrendszer rekonstitúciójának elősegítése érdekében az opportunista fertőzések megelőzése érdekében, és a HCMV szűrése elengedhetetlen azoknál a HIV / AIDS-es betegeknél, akiknél a CD4-szám <50 sejt/6L (2).

a vírus nukleinsavvizsgálatok és immunológiai módszerek értékeit is értékeltük a CMV fertőzés klinikai kimutatásában. Kínai és nemzetközi tanulmányok kimutatták, hogy a CMV-DNS korábban jelenik meg, mint a CMV fertőzések klinikai tünetei és szerológiai reakciói. Az FQ-PCR jelenleg a legpontosabb és leggyorsabb mikrobiális mennyiségi meghatározási módszer, amely képes leküzdeni a hagyományos PCR néhány problémáját (pl. az amplifikációs termék szennyeződése és a nem mennyiségi meghatározás) (10). Jelenlegi vizsgálatunkban a CMV-DNS pozitív aránya 5 volt.70% (13/228) a 228 neurológiai tünetekkel rendelkező beteg CSF mintáiban, ami sokkal alacsonyabb volt, mint a plazma-és vizeletmintákban, ami a vér-agy gát és a szervek érzékenységével magyarázható. Az anti-CMV-IgM antitestet gyakran használják az aktív vírusfertőzés markereként; az anti-CMV-IgM antitest pozitív aránya azonban csak 10,40% (84/808) volt HIV/AIDS betegeinkben, ami alacsonyabb volt, mint a nem HIV/AIDS populációkban jelentett CMV-fertőzés pozitív aránya (11). Ezenkívül pozitív aránya gyengén megegyezett a nukleinsav kimutatásának eredményeivel, ami a legyengült immunrendszernek vagy az IgM antitestek késleltetett generációjának tudható be HIV/AIDS betegekben. Ezért a CMV-IgM antitest kimutatása korlátozott szerepet játszik a HIV/AIDS betegek HCMV szűrésében. Sőt, a CMV-fertőzés pozitív aránya 808 betegnél 29,05% (235/808) volt a jelenlegi vizsgálatunkban, ami valamivel magasabb, mint a Li et al.által jelentett 21,85%., és ennek oka lehet az ebben a vizsgálatban gyűjtött minták nagyobb változatossága (beleértve a plazmát, a vizeletet és a CSF-et) (12). A CMV-DNS pozitív aránya 25,57% volt a vizeletben és 26,01% a plazmában, a különbség statisztikailag nem volt szignifikáns. Ezért azt javasoljuk, hogy CMV-DNS szűrést végezzenek a plazmában és a vizeletben, ha a CD4+ T limfocitaszám kevesebb, mint 200 sejt/6L, különösen akkor, ha <50 sejt/6L; ezenkívül a CMV-DNS kimutatása a CSF-ben szükséges, ha nyilvánvaló neurológiai tünetek jelentkeznek.

következtetések

összefoglalva, az alacsony CD4+ T limfocitaszám és a magas HIV-1 vírusterhelés a CMV-fertőzés kockázati tényezői a HIV/AIDS-es betegeknél. A vizelet vagy a plazma CMV-DNS FQ-PCR-rel történő kimutatása rendkívül értékes a CMV-fertőzés szűrésében HIV / AIDS betegeknél, míg a vér CMV IgG és CMV IgM szintjének kimutatása korlátozott klinikai értékkel bír. Vér vagy vizelet CMV-DNS szűrés ajánlott az AIDS-es betegek számára a CMV-fertőzés korai megelőzése és diagnosztizálása, valamint életminőségük javítása érdekében.

Köszönetnyilvánítás

finanszírozás: a Fujian, P. R. C. legfontosabb klinikai szakterület-építési programja támogatta

lábjegyzet

jelentési ellenőrző lista: a szerzők kitöltötték az MDAR jelentési ellenőrző listát. Elérhető a http://dx.doi.org/10.21037/apm-20-1352

adatmegosztási Nyilatkozat: elérhető a http://dx.doi.org/10.21037/apm-20-1352

összeférhetetlenség: minden szerző kitöltötte az ICMJE egységes közzétételi űrlapját (elérhető a http://dx.doi.org/10.21037/apm-20-1352címen). A szerzőknek nincs összeférhetetlenségük.

etikai nyilatkozat: A szerzők felelősek a munka minden aspektusáért annak biztosításában, hogy a munka bármely részének pontosságával vagy integritásával kapcsolatos kérdéseket megfelelően kivizsgálják és megoldják. A tanulmányban az emberi résztvevőket bevonó összes eljárás összhangban volt a Helsinki nyilatkozattal (a 2013-ban felülvizsgált módon). A tanulmányt központunk Orvosi Etikai Bizottsága hagyta jóvá (Jóváhagyási szám. KS2019-070-01). Az adatok névtelenek, ezért eltekintettek a tájékozott beleegyezés követelményétől.

nyílt hozzáférésű nyilatkozat: Ez egy nyílt hozzáférésű cikk, amelyet a Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivs 4.0 Nemzetközi licenc (CC BY-NC-ND 4.0), amely lehetővé teszi a cikk nem kereskedelmi célú sokszorosítását és terjesztését azzal a szigorú feltétellel, hogy nem történik módosítás vagy szerkesztés, és az eredeti művet megfelelően idézik (beleértve mind a hivatalos közzétételre mutató linkeket a vonatkozó DOI-n keresztül, mind a licencet). Lásd: https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/.

1. Yu X, Tong M, He G. a citomegalovírus fertőzés hatása a terhes nők szabályozó immunsejtjeire Kínai. Nosocomiology folyóirat. 2017;27:2103-6.
2. a Nemzeti Tudományos és technológiai nagyprojekt segíti az opportunista fertőzés kutatócsoportot a 13. ötéves terv során. Szakértői konszenzus a cytomegalovírus betegséggel komplikált AIDS klinikai diagnózisáról és kezeléséről . A délnyugati Egyetem folyóirata (Természettudományi kiadás): 1-17 .
3. Hodowanec AC, Pikis a, Komatsu TE, et al. A CMV-betegség kezelése és megelőzése transzplantált betegeknél: jelenlegi ismeretek és jövőbeli perspektívák. J Clin Pharmacol 2019; 59: 784-98.
4. Mizushima D, Nisidzsima T, Jasiro S, et al. A kvantitatív plazma citomegalovírus DNS PCR diagnosztikai hasznossága citomegalovírus végszervi betegségeihez HIV-1 fertőzésben szenvedő betegeknél. J Acquir Immun Defic Syndr 2015; 68:140-6.
5. Michaelides A, Liolios L, Glare EM, et al. Megnövekedett humán citomegalovírus (HCMV) DNS-terhelés perifériás vér leukocitákban a tüdőtranszplantáció után korrelál a HCMV pneumonitissel. Transzplantáció 2001; 72: 141-7.
6. a neurológia fertőzése, a Kínai Orvosi Szövetség AIDS csoportja. HIV / AIDS diagnózis és kezelési irányelvek (harmadik kiadás). Kínai fertőző betegségek lapja 2015; (10): 577-93.
7. Corrales I, Gimnazianniz E, Solano C, et al. Az aktív citomegalovírus fertőzés előfordulása és dinamikája allogén őssejt-transzplantált betegeknél a donor és a recipiens CCR5, MCP-1, IL-10 és TLR9 gének egyetlen nukleotid polimorfizmusa szerint. J Med Virol 2015;87: 248-55.
8. Tagarro A, Del Valle R, Dominguez-Rod stb. Növekedési minták veleszületett citomegalovírus fertőzésben szenvedő gyermekeknél. Pediatr Fertőz Dis J 2019; 38: 1230-5.
9. Deng X, Liu J, Zhang M, et al. A HIV/AIDS citomegalovírus fertőzéssel kombinált virológiai és immunológiai jellemzőinek elemzése. Kínai folyóirat a kórházi fertőzésről 2019;29: 2241-6.
10. Kawano Y, Kawada J, Kamya Y, et al. A keringő humán és vírusos mikroRNS sin betegek elemzése veleszületett citomegalovírus fertőzésben. J Perinatol 2016; 36: 1101-5.
11. Li L, Gao S, Zhang T, et al. A humán citomegalovírus fertőzés DNS-kimutatásának és IgM-kimutatásának összehasonlítása és kombinált alkalmazási értékük megvitatása. Kínai kísérleti diagnosztikai folyóirat 2015;(1): 78-80.
12. Li X, Cao L, Yu C, et al. Tanulmány a cytomegalovírus fertőzéséről AIDS-es betegekben. Modern Megelőző Orvoslás 2012;39:2278-9.

(angol nyelvű szerkesztő: J. Gray)