határok az endokrinológiában

Bevezetés

a policisztás petefészek szindróma (PCOS), amely a reproduktív korú nők körében az anovuláció és a meddőség fő oka, a leggyakoribb endokrin rendellenesség, amely világszerte a nők 5-10%-át érinti (1). A PCOS-ban szenvedő nőknél a gyorsított lipolízis és az azt követő diszlipidémia metabolikus rendellenességekkel jár, beleértve az elhízást, az inzulinrezisztenciát és a 2-es típusú cukorbetegséget (T2DM) (2). A domináns tüsző (3, 4) follikuláris folyadékában (FF) bekövetkező visszavert változások közvetlenül befolyásolhatják az oocita minőségét és metabolizmusát. Az alacsony fokú krónikus gyulladást általában a meddőség etiopatogenetikai mechanizmusaként hibáztatják. A gyulladásos citokinek szignifikánsan magasabbak a megmagyarázhatatlan meddőségben szenvedő nők körében (5). Kimutatták, hogy a gyulladásgátló tényezők szignifikánsan összefüggenek az in vitro megtermékenyítés (IVF) magasabb meghibásodási arányával, különösen az implantációs szakaszban, megmagyarázhatatlan meddőségben szenvedő nők körében (6). A vizsgálatok során emelkedett gamma-interferon (IFN-6) és interleukin-2 (IL-2) szinteket, valamint csökkent transzformáló növekedési faktor béta (TGF-6) szintet találtak, amely fontos endogén gyulladáscsökkentő mediátor (7) a megmagyarázhatatlan meddőségben szenvedő nők plazmájában, összehasonlítva a termékeny kontrollokkal az implantációs ablak alatt (luteális fázis) (8). Sőt, a megmagyarázhatatlan terméketlen betegeknél emelkedett szérum IL-2, IL-4, IL-6, IL-21, tumor nekrózis faktor alfa (TNF-6) és IFN-6, összehasonlítva a termékeny nőkkel (5).

A króm-kiegészítők jótékony hatásairól már beszámoltak a PCOS-ban szenvedő nők metabolikus rendellenességeiről. Egy meta-analízisben, amelyet Fazelian et al. (9), a króm-kiegészítés csökkentette a szérum inzulint és a szabad tesztoszteront, és javította a testtömegét PCOS-ban szenvedő betegeknél. Már közzétettük a króm-kiegészítők 8 hétig történő bevételének előnyeit a glikémiás kontrollról, a kardiometabolikus kockázati paraméterekről és az oxidatív stresszről PCOS-ban szenvedő terméketlen nőknél, akik IVF-re jelöltek voltak (10). Továbbá a diabéteszes patkányokban a krómpótlás antidiabetikus aktivitást mutatott, ami a krómnak a peroxiszóma proliferátor által aktivált Gamma receptor (PPAR-kb), az inzulinreceptor szubsztrát 1 (IRS-1) és a nukleáris faktor kB (NF-kB) fehérjék modulációjára gyakorolt hatásával magyarázható (11). Hasonlóképpen, Wang et al. (12) megállapította, hogy az elhízott kontroll patkányokhoz képest a krómmal kiegészített patkányok jelentősen javultak a glükóz ártalmatlanítási arányukban, és emelkedett az inzulin-stimulált p-IRS-1 és a foszfatidilinozitol-3 kináz aktivitás a vázizmokban. Egy másik állatkísérletben a diabéteszes patkányok 7 héten keresztül történő krómbevitele szignifikánsan csökkentette a gyulladásos markereket, beleértve a C-reaktív fehérjét (CRP), a TNF-6-ot és az IL-6-ot (13).

figyelembe véve a króm antidiabetikus és lipidcsökkentő hatásait (11, 14), feltételeztük, hogy a króm-kiegészítés előnyös lehet PCOS-ban szenvedő nőknél és IVF-jelölteknél, akik különböző anyagcsere-rendellenességekben szenvednek. Legjobb tudásunk szerint semmit sem tettek közzé a króm-kiegészítés hatásairól az inzulin, a lipid és a gyulladásos markerek génexpressziójára PCOS-ban szenvedő terméketlen nőknél, akik IVF-re jelöltek. Ennek a kísérletnek az volt a célja, hogy meghatározza a króm-kiegészítés hatását az inzulin, a lipid és a gyulladásos markerek génexpressziójára olyan terméketlen nőknél, akik PCOS-ban szenvedtek és IVF-re jelöltek voltak.

anyagok és módszerek

a vizsgálat megtervezése és a résztvevők jellemzői

ezt a randomizált, kettős vak, placebo-kontrollos vizsgálatot az iráni weboldal regisztrálta a klinikai vizsgálatok regisztrálására (http://www.irct.ir:IRCT20170513033941N32). Negyven terméketlen, PCOS-ban szenvedő, 18-40 éves nő, akik az IVF-re jelentkeztek, az IVF korábbi kórtörténete nélkül. A tanulmányt a teheráni Taleghani kórházban végezték 2018 februárja és májusa között. A PCOS diagnózisának megerősítésére Rotterdami kritériumokat alkalmaztak (15). Metabolikus rendellenességekkel küzdő résztvevőket, beleértve a pajzsmirigy diszfunkcióját, cukorbetegségét vagy csökkent glükóztoleranciáját kizárták a vizsgálatból. Ezt a vizsgálatot a Helsinki nyilatkozatnak és a helyes klinikai gyakorlatra vonatkozó iránymutatásoknak megfelelően végezték el, és a teheráni Shahid Beheshti Orvostudományi Egyetem (SUMS) kutatási etikai bizottsága hagyta jóvá. Az írásbeli tájékozott beleegyezést minden személy aláírta.

beavatkozás

A résztvevőket véletlenszerűen osztottuk be beavatkozási csoportokba, hogy vagy 200-at vegyenek be 600g/nap króm-pikolinát (Nature Made, California, USA) (n = 20) vagy placebo (Barij Essence, Kashan, Irán) (n = 20) 8 hétig. A króm-kiegészítőket és a placebókat a forma, a megjelenés, az illat és a csomagolás szempontjából illesztették össze. A randomizálást számítógéppel generált véletlen számok felhasználásával végeztük. A randomizációs és allokációs folyamatot mind a kutatók, mind a résztvevők elől elrejtették a végső elemzések befejezéséig. Egy másik személy, aki nem vett részt a vizsgálatban, és nem tudott a véletlenszerű szekvenciákról, az alanyokat a számozott tablettákhoz rendelte. A kiegészítők és a placebók betartását a vizsgálat során megfigyelték, kérve az egyéneket, hogy hozzák vissza a gyógyszeres tartályokat. A megfelelési arány növelése érdekében minden résztvevő rövid napi emlékeztető üzeneteket kapott mobiltelefonján a kiegészítők szedésére. A vizsgálat résztvevői a beavatkozás 0., 4. és 8. hetében kitöltötték az étrendi nyilvántartást.

az eredmények értékelése

A szérum nagy érzékenységű C-reaktív fehérje (hs-CRP) szintjét tekintették elsődleges végpontnak, a metabolikus profilokat pedig másodlagos végpontnak. Éhgyomri vérmintákat (15 mL) gyűjtöttek a 8 hetes beavatkozás elején és végén a Taleghani kórházban (Teherán, Irán). A HR-CRP szinteket kereskedelmi forgalomban kapható ELISA kit (LDN, Nordhorn, Németország) alkalmazásával mértük, 7% – nál kisebb inter-és intra-assay koefficiens varianciákkal (CVs). A plazma nitrogén-monoxid (NO) szintjét Griess-módszerrel (16) mértük, az intra-assay CVs értéke < 5% volt.

limfocita sejtek izolálása

vérmintákat használtunk a limfocita sejtek kivonására, 50% percoll alkalmazásával (Sigma-Aldrich, Dorset, UK). A sejtszám-és életképességi vizsgálatot trypan blue, RNS és DNS extrakcióval végeztük (17).

RNS extrakciót és valós idejű PCR-t (RT-PCR)

az RNS-t vérmintákból extraháltuk RNX-plus kit (Cinnacolon, Teherán, Irán) segítségével. Az RNS-szuszpenziót -20 C-on fagyasztottuk, amíg a cDNS-t ki nem derítettük. Az egyes mintákból származó összes RNS kivonását követően az RNS-t UV spektrofotométerrel számszerűsítettük. Minden minta OD 260/280 aránya 1,7-2,1 nem jelentett szennyeződést sem fehérjével, sem DNS-sel (17). Moloney egér leukémia vírus reverz transzkriptáz (RT) alkalmazásával az izolált RNS-t reverz transzkriptáltuk a cDNS könyvtárba. A perifériás vér mononukleáris sejtjein (Pbmc) SYBR green detection és Amplicon Kit alkalmazásával, valamint kvantitatív RT-PCR és Light Cycler technológiával (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Svájc) a PPAR-6, glucose transporter 1 (GLUT-1), low-density lipoprotein receptor (LDLR), IL-1, IL-8, TNF-6, TGF-6 és vascularis endotheliális növekedési faktor (VEGF) génexpresszióit végezték el (Roche Diagnostics, Rotkreuz, Svájc). Glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH) primereket használtunk háztartási génként. A primereket Primer Express szoftverrel (Applied Biosystems, Foster City, USA) és Beacon designer szoftverrel (Takaposizt, Teherán, Irán) tervezték. A relatív transzkripciós szinteket Pffafi vagy 2-ONCT módszerekkel számítottuk ki.

mintaméret és statisztikai módszerek

A mintaméretet az RCT-k számára kialakított képlettel számítottuk ki, az első típusú (6) és a második típusú hibákat (0,05 és 0) tekintették.20, hogy a hatalom 80%. Egy korábbi közzétett tanulmány (18) alapján a minta méretének kiszámításához 1500,0 ng/mL átlagos különbséget (d), valamint 1496,1 ng/mL szórást (SD) használtunk a hs-CRP esetében. Figyelembe véve az egyes intervenciós csoportok 4 alanyának valószínű lemorzsolódását, a végső mintaméretet csoportonként 20 (16 + 4) alanynak határoztuk meg.

az adatok normalitását Kolmogorov-Smirnov teszttel értékeltük. Az elemzéseket intention-to-treat (itt) megközelítéssel végeztük. Független minták t-tesztet alkalmaztak az antropometriai mérések és az inzulin, a lipid és a gyulladás génexpressziójának különbségeinek meghatározására az intervenciós csoportok között. A króm-kiegészítés gyulladásos markerekre gyakorolt hatását ismételt ANOVA-teszttel értékeltük. Az aránybeli különbségeket Fisher pontos tesztjével értékeltük. A P < 0, 05 statisztikailag szignifikánsnak tekinthető. A statisztikai elemzéseket a Társadalomtudományi statisztikai csomag 18. verziója (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA).

eredmények

minden intervenciós csoportban három lemorzsolódásról számoltak be, személyes okokból. Tehát összesen 34 résztvevő fejezte be a vizsgálatot (1.ábra). Az ITT megközelítést alkalmazva mind a 40 résztvevőt (minden csoportban 20-at) bevonták a végső adatelemzésbe. A megfelelési arány ebben a vizsgálatban magas volt, a tabletták több mint 90% – át fogyasztották a beavatkozás során mindkét csoportban. Ebben a vizsgálatban a PCOS-ban szenvedő nők krómfogyasztását követően nem jelentettek mellékhatásokat.

az antropometriai mérések statisztikailag nem különböztek az intervenciós csoportok között (2.táblázat). Ezenkívül a krómpótlást követően az IVF eredményei, beleértve az endometrium vastagságát, a kinyert petesejtek számát, a megtermékenyített petesejtek számát, a megtermékenyítési arányt, a terhességi arányt és az embrió számát, nem különböztek szignifikánsan a kiegészített és a placebo csoportok között.

a makro – és mikroelem-bevitel átlaga szintén nem különbözött szignifikánsan két beavatkozási csoport között a kezelés során (az adatok nem szerepelnek).

A Krómpótlás szintén csökkentette az IL-1 (P = 0,004) génexpresszióját a Pbmc-kben a placebóhoz képest (3.ábra). PCOS-ban szenvedő betegek Pbmc-jében a krómpótlás nem volt szignifikáns hatással az IL-8, a TNF-ONS, a TGF-esek és a VEGF génexpressziójára.

megbeszélés

A króm beadásának jótékony hatásait 8 hétig találtuk PCOS-ban szenvedő terméketlen nőknél, akik IVF-re jelöltek. A krómpótlás csökkentette a gyulladást és javította a PPAR-6, a GLUT-1, az LDLR és az IL-1 génexpresszióját, bár nem befolyásolta az IL-8, a TNF-ONS, a TGF-esek és a VEGF génexpresszióját. Legjobb tudásunk szerint ez az első vizsgálat, amely beszámol a króm-kiegészítés hatásairól az inzulinhoz, lipidhez és gyulladásos markerekhez kapcsolódó génexpresszióra PCOS-val diagnosztizált és IVF-jelölt terméketlen nőknél.

a króm hatása az inzulin és a Lipid metabolizmus Génexpressziójára

A PCOS-ban szenvedő betegek érzékenyek a különböző anyagcsere-rendellenességekre, mint például a megnövekedett inzulinrezisztencia, a diszlipidémia és a krónikus gyulladás (19, 20). A jelenlegi tanulmány kimutatta, hogy a króm-kiegészítés 8 hétig PCOS-ban szenvedő meddő nőknél, akik IVF-re jelöltek, jelentősen megnövelték a PPAR-6, a GLUT-1 és az LDLR génexpresszióját. Eredményeinkkel összhangban a diabéteszes patkányoknak adott króm antidiabetikus aktivitást mutatott, valószínűleg a krómnak a PPAR-6 és IRS-1 fehérjék modulációjára gyakorolt hatásával kapcsolatban (11). Wang et al. (12) Azt is megállapították, hogy a krómmal kiegészített elhízott patkányok jelentősen növelték glükóz ártalmatlanítási arányukat. Továbbá, összehasonlítva az elhízott kontrollokkal, ezek a patkányok az inzulin-stimulált p-IRS-1 és a foszfatidilinozitol-3 kináz aktivitás emelkedését mutatták a vázizmokban. Egy másik vizsgálatban a króm, a biotin vagy ezek kombinációja jelentősen felszabályozta a PPAR-ons expressziót a zsírszövetben, ami hatékony inzulinszenzibilizáló hatást fejthet ki és csökkentheti az inzulinrezisztenciát egy diabéteszes patkánymodellben (11). A króm elősegítheti a GLUT-4 kereskedelmet és az inzulin-stimulált glükóz transzportot (21). Hasonlóképpen, a diabéteszes retinopátiában szenvedő patkányok, akiket krómmal egészítettek ki 12 hétig, javultak a GLUT-1, a GLUT-3 és az inzulin génexpressziójában (22). A PPAR (PPAR) az inzulin, a glükóz és a lipid metabolizmus központi szabályozója, amely széles körben expresszálódik a zsírszövetben. A PPAR-6 javíthatja az inzulinérzékenységet és a lipidprofilokat a 2-es típusú cukorbetegségben szenvedő betegeknél, valamint a diabéteszes rágcsáló modellekben (23). A jelenlegi bizonyítékok arra utalnak, hogy a PPAR-6 agonisták hasznosak lehetnek a renális kortikális lipidek és a proteinuria csökkentésében a hypoglykaemiás hatásuktól független mechanizmus révén (24, 25).

a króm hatása a gyulladásos markerek Génexpressziójára

Vizsgálatunk alátámasztotta, hogy a króm 8 héten át történő beadása jelentősen csökkentette az IL-1 és a szérum hs-CRP szint génexpresszióját PCOS-ban szenvedő meddő nőknél, akik IVF-re jelöltek voltak, bár ez nem befolyásolta az IL-8, a TNF -, a TGF-és a VEGF génexpresszióját. A krómpótlásnak a gyulladásos markerek génexpressziójára és azok keringő szintjére gyakorolt hatását bemutató jelenlegi bizonyítékok szűkösek, és többnyire állatkísérletekre korlátozódnak. Króm kiegészítés 8 hétig a Zucker diabéteszes zsíros (ZDF) patkányok számára jelentősen csökkentette a szérum CRP szintjét (26). Egy másik vizsgálatban a króm-niacinát 7 héten át történő bevétele csökkentette a gyulladásgátló citokinek (TNF-6, IL-6 és CRP) szintjét, az oxidatív stresszt és a lipidkoncentrációt diabéteszes patkányokban (13). Továbbá, a króm-pikolinát, foszfatidil-szerin, dokozahexaénsav és bór tartalmú táplálékkiegészítő 12 héten keresztül történő alkalmazása jelentősen csökkentette a CRP és a TNF-ons koncentrációját magas zsírtartalmú étrenddel táplált patkányokban (27). Nem találtunk szignifikáns hatást a krómpótlásra az IL-8-ra, a TNF-re, a TGF-re és a VEGF-re, ami a különböző vizsgálati tervek alkalmazásával, a használt króm típusával és dózisaival, a beavatkozás időtartamával és a résztvevők jellemzőivel magyarázható. A króm nagyobb adagjai jelentősen javíthatják a metabolikus profilokat, beleértve az IL-8-at, a TNF-xhamstereket, a TGF-xhamstereket és a VEGF-et. A gyulladás és az oxidatív stressz markerei sok diabéteszes betegnél emelkednek, ami pozitívan képviseli az érrendszeri gyulladást (28). Az inzulinrezisztencia és az azt követő érrendszeri gyulladás a CVD kialakulásának fő kockázati tényezői (29). A króm gyulladásgátló markerekre gyakorolt elnyomó hatását elősegítheti az oxidatív stressz utak inaktiválása és a májban az inzulinrezisztencia kaszkádhoz kapcsolódó Akt foszforiláció csökkentése (30). A jelenlegi bizonyítékok azt mutatják, hogy a megnövekedett gyulladásos citokinek részt vesznek az IVF kimenetelében. Egy tanulmányban, amelyet Haimovici et al. (31), azoknál a nőknél, akik élve születtek magzatuknak, alacsonyabb volt az IL-6 szintje. A progeszteront termelő luteális sejtek gátlása az IL-1 jelenléte esetén a beültetés sikertelenségéhez vezető egyik tényező lehet (32). A megnövekedett follikuláris TNF-6 és IL-6 ronthatja a tüsző mikrokörnyezetét, ezáltal negatívan befolyásolhatja a petesejt és az embrió minőségét (33). Egy másik tanulmányban, amelyet Levin et al. (34), a magasabb CRP-szint az IVF stimuláció során szignifikánsan összefüggött a fogamzás kudarcával. A fent említett közzétett bizonyítékok szerint feltételeztük, hogy az IVF kimenetelét befolyásolhatja a csökkent gyulladás. Egy nemrégiben készült tanulmány kimutatta, hogy a TNF-inhibitor és az intravénás immunglobulin alkalmazása jelentősen javította az IVF kimenetelét, beleértve; implantáció, klinikai terhesség és élő születési arány fiatal terméketlen nőknél, akiknél magas volt a T helper 1/T helper 2 citokinek szintje (35).

ebben a tanulmányban volt néhány korlátozás. A nem megfelelő finanszírozás miatt nem tudtuk mérni a krómszintet, és nem tudtuk felmérni a króm hatását az oxidatív stressz génexpressziójára.

összességében tanulmányunk azt sugallja, hogy a króm-kiegészítés előnyei a gyulladásos markerek csökkentésében a PPAR-6, a GLUT-1, az LDLR és az IL-1IN PCOS-ban szenvedő, IVF-re jelölt nők génexpressziójának javításával.

szerzői hozzájárulások

za segített a kézirat kidolgozásában, tervezésében és statisztikai elemzésében. MA, SZ, NM, EA és SS közreműködtek az adatgyűjtésben és a kéziratok elkészítésében. ZA felügyelte a tanulmányt.

finanszírozás

ezt a tanulmányt a kutatási alkancellár, A Shahid Beheshti Orvostudományi Egyetem és az iráni Teherán támogatta.

összeférhetetlenségi nyilatkozat

A szerzők kijelentik, hogy a kutatást olyan kereskedelmi vagy pénzügyi kapcsolatok hiányában végezték, amelyek potenciális összeférhetetlenségnek tekinthetők.