KOMPLEMENT-függő citotoxicitás

terápiás antitestekszerkesztés

a tumorellenes terápiás antitestek kifejlesztése magában foglalja az effektor funkcióik in vitro elemzését, beleértve a CDC kiváltásának képességét a célsejtek elpusztítására. A klasszikus megközelítés az antitestek inkubálása célsejtekkel és komplementforrással (szérum). Ezután a sejthalált több megközelítéssel határozzák meg:

• radioaktív módszer: a célsejteket 51CR-rel jelöljük a CDC vizsgálat előtt, a króm felszabadul a sejtlízis során, és megmérjük a radioaktivitás mennyiségét.
• az élő sejtek metabolikus aktivitásának mérése (élő sejtek festése): a célsejtek antitestekkel és komplementerekkel történő inkubálása után plazmamembrán-áteresztő festéket adnak hozzá (pl. kalcein-AM vagy rezazurin). Az élő sejtek át nem eresztő fluoreszcens termékké metabolizálják, amelyet áramlási citometriával lehet kimutatni. Ez a termék nem képződik metabolikusan inaktív halott sejtekben.
• a felszabadult intracelluláris enzimek aktivitásának mérése: az elhalt sejtek felszabadító enzimjei (pl. LDH vagy GAPDH) és szubsztrátjának hozzáadása színváltozáshoz vezet, amelyet általában az abszorbancia vagy a luminiszcencia változásaként számszerűsítenek.
• halott sejtek festése: a (fluoreszkáló) festék a sérült plazmamembránon keresztül jut be az elhalt sejtekbe. Például a propidium-jodid kötődik az elhalt sejtek DNS-éhez, és a fluoreszcens jelet áramlási citometriával mérik.

HLA typing and crossmatch testEdit

a CDC vizsgálatokat arra használják, hogy megfelelő szerv-vagy csontvelő-transzplantációra alkalmas donort találjanak, nevezetesen a hisztokompatibilitási rendszer megfelelő fenotípusú HLA-val rendelkező donort. Először HLA tipizálást végeznek a beteg és a donor számára, hogy meghatározzák a HLA fenotípusukat. Ha potenciálisan megfelelő pár található, crossmatch tesztet végeznek annak kizárására, hogy a beteg donor-specifikus anti-HLA antitesteket termel, amelyek graft kilökődést okozhatnak.

a HLA tipizálás CDC formája (más szóval szerológiai tipizálás) a jellemző allogén antiszérumokból vagy monoklonális antitestekből származó anti-HLA antitesteket használ. Ezeket az antitesteket egyenként inkubáljuk a beteg vagy a donor limfocitáival és a komplement forrásával. Az elhalt sejtek mennyiségét (és így a pozitív eredményt) az elhalt vagy élő sejtek festésével mérik. Manapság a CDC tipizálását molekuláris tipizálás váltja fel, amely PCR-en keresztül képes azonosítani a HLA molekulák nukleotidszekvenciáit.

a CDC vizsgálatot általában a crossmatch teszt elvégzésére használják. Az alapváltozat magában foglalja a beteg szérumának inkubálását a donor limfocitáival és a második inkubációt a nyúl KOMPLEMENT hozzáadása után. A halott sejt jelenléte (pozitív teszt) azt jelenti, hogy a donor nem alkalmas erre a betegre. Vannak olyan módosítások, amelyek növelik a teszt érzékenységét, beleértve a minimális inkubációs idő meghosszabbítását, az antihuman globulin (AHG) hozzáadását, a nem kötött antitestek eltávolítását a komplement hozzáadása előtt, a T-sejt és a B-sejt részhalmazának elválasztását. A CDC crossmatch mellett rendelkezésre áll flow-citometriás crossmatch is, amely érzékenyebb és még komplementer nem aktiváló antitesteket is képes kimutatni.