Anatomia e fisiologia

Il presente studio è stato condotto, con regole e regolamenti per la cura e l’uso di animali da laboratorio della casa degli animali e il rispettivo esperimento è stato approvato dal Comitato etico animale centrale. 25 topi albini svizzeri femmina con un’età media 45days e 25 a 35gm peso sono stati scelti a caso da Animal house, da diverse colonie di riproduzione. Queste femmine non gravide sono state volutamente copulate da topi maschi della stessa varietà con l’obiettivo di procurare 10 cuccioli di ulteriore generazione. Nella gabbia in policarbonato di plastica con guarnizioni in acciaio inox singolo maschio eterozigote forte e robusto sono stati collocati con singola femmina in un’atmosfera mantenuta continuamente a 20-25C e 55±5% di umidità, 12hrs successivamente ciclo chiaro e scuro. I topi femmina sono stati esaminati per la spina trasversale vaginale e la presenza di ben visualizzare spina sono stati contrassegnati come gravidanza accertata e assegnato giorno zero di gestazionale. Il giorno 7, 8 e 9 di gestazione femmine collegato sono stati controllati per la gravidanza da palpazione addominale.

Caratterizzazione di AgNps

Le nanoparticelle d’argento provenienti da fonti di acquisto di ricerca sono state valutate per la loro dimensione primaria mediante TEM e per la loro agglomerazione in mezzo cellulare mediante spettroscopia di correlazione incrociata di fotoni (PCCS) e spettroscopia ultravioletta–visibile (UV-Vis), Scattering dinamico della luce e potenziale Zeta. Sono state mostrate immagini rappresentative degli AGNP. Le immagini TEM degli AGNP rivestiti PVP disperse e sospese in 1.5M NaCl ha confermato la dimensione delle particelle primarie dichiarata dai produttori. Le nanoparticelle d’argento non rivestite hanno trovato una distribuzione eterogenea nell’intervallo da 50 a 100 nm, la maggior parte delle quali è intorno a 71 nm.

Nel caso di AGNP in polvere sospesa, le immagini TEM hanno mostrato che in un ambiente acquoso le nanoparticelle d’argento si aggregano e formano grandi aggregati, molti dei quali sono più grandi di 50 nm. Questo risultato è coerente con i risultati della distribuzione dimensionale idrodinamica ottenuta dal metodo di dispersione della luce dinamica (zeta sizer). Le analisi EDX hanno confermato che solo l’argento elementare è stato presentato sia negli AGNP colloidali che in quelli in polvere secca. Secondo i risultati ICP-AES, le concentrazioni di ioni Ag negli stock digeriti acidi di AGNP in polvere colloidale e sospeso erano rispettivamente 1908,1 e 447,2 mgl-1. Anche i risultati del modello XRD confermano la cristallinità degli AGNP di tipo in polvere e la presenza di argento cristallino elementare, anche altre fasi, ad eccezione dell’argento metallico, non erano presenti nel campione. Inoltre i risultati di XRF hanno indicato che la purezza del tipo in polvere AgNps era 97,86%.

Esposizione di AgNps soluzione colloidale attraverso ripetuti orale gavages

topi in Gravidanza sono state somministrate doppio con soluzione salina normale (controllo Sham) come veicolo e in una dose di 5, 10, 15, 20 mg/kg b.w. sono stati dati attraverso orale ripetuta gavages, da 7 a 12 gestazionale giorno, con l’aiuto di una punta smussata albero curvo alimentazione ago e van allegato. Gli animali di controllo fittizi sono inclusi in esperimenti con animali trattati e animali non trattati.

Dissezione e l’eviscerazione

Su GD 18, a destra e a sinistra corni dell’utero della madre in gravidanza sono stati esteriorizzato seguenti ventrale laparotomia in profonda etere/cloroformio anestesia e 250 freschi raccolti dighe attraverso la dissezione sono state lavate con acqua di rubinetto in una piastra di Petri per rimuovere il sangue e il liquido amniotico e asciugati con carta da filtro e disidratate in alcool 95% per 48 ore, finalmente esposto all ‘ 1% di KOH per la consistenza di eviscerazione e Alizarina protocollo di colorazione per la corretta visualizzazione di ossa normali o anormali.13

Metodo (Valutazione della dismorfologia scheletrica con la tecnica di eviscerazione e colorazione alizarina) -:

Lo studio di dismorfologia scheletrica è stato effettuato con la tecnica di eviscerazione e colorazione alizarina. Tutti i campioni ( 50 cuccioli) di ciascun gruppo sono stati disidratati in 95% di alcol (spirito rettificato) per 48 ore e poi rimossi e lavati con acqua corrente del rubinetto e quindi eviscerati con soluzione KOH 1% (KOH 1gm+100ml d.w.). Dopo aver eseguito la laparotomia ventrale, gli organi vitali vengono rimossi. I campioni sono stati immersi accuratamente in abbondante soluzione di idrossido di potassio (KOH) all ‘ 1% per almeno 2-4 giorni fino a quando la carne, il tendine, i muscoli e i visceri sono stati trasparenti & chiari e sciolti seguiti da una visibilità cristallina delle ossa e delle cartilagini. Ogni soluzione giorno è stato cambiato quando diventano scoloriti e rifiuti.

L’osso cristallino e la cartilagine visibile campione sono stati poi collocati nello stesso 1% KOH e poi 6 a 8 gocce di 1% Alizarin macchia è stato aggiunto per colorarlo rosso violaceo profondo. La soluzione è stata agitata delicatamente alcune volte all’ora. Quindi la stessa procedura è stata continuata per altri 2-3giorni per dare un profondo colore rosso violaceo alle ossa e alle cartilagini. Per la rimozione di qualsiasi sopra colorazione e lisciatura dei campioni, gli stessi sono poi passati attraverso 40%, 80% (40 ml glicerolo+60 ml di acqua distillata, 80 ml glicerolo+20 ml di acqua distillata) e 1 a 2 cristallo timolo aggiunto per la conservazione a lungo termine infine mantenuto in 100% glicerolo, servito per la fotografia & potente lente a mano di osservazione.

In totale sono stati raccolti 250 feti da 25 madri di 1, 2, 3, 4 e 5 gruppi di cui tutti i campioni sono stati esposti alla sperimentazione di dismorfologia scheletrica. 60 feti sono stati osservati riassorbimento.

Statistiche

La percentuale di malformazione scheletrica è stata valutata da ciascun gruppo e valutata in base al numero di ossa coinvolte nella dismorfologia e infine le percentuali sono state confrontate tra il gruppo e all’interno del gruppo per il fattore di teratogenicità dose dipendente. Multi ANOVA e statistica descrittiva (analisi post hoc) test utilizzato per questo scopo.

Osservazione e risultati

La percentuale di dismorfologia scheletrica è stata trovata più alta e più alta nei cuccioli di gruppo trattati con 15 mg AgNps e 20 mg AgNps/ kg di p.c. (Tabella 1).

La dose più bassa AgNps ha trattato i gruppi (0,5 & 1mg / kg p.c.) sono state osservate percentuali molto minime di anomalie scheletriche, quindi questi gruppi trattati sono stati quasi considerati come feti del gruppo di controllo (Figura 1).

Figura 1 Controllo feto Alizarina macchia vista dorsale (A) e vista laterale (B).

Uno dei 5 mg AgNps / kg p.c. gruppo trattato pup ha dimostrato unossified 5 ° segmento sternale dalla barra sternale e unossified segmento Manumbrium che viene diagnosticata come schisi sternale. Altri feti hanno dimostrato ipoplasia mascellare e mandibolare, osso frontale, parietale e nasale non ossificato, fallimento della fusione del segmento posteriore dell’osso dell’anca, 10,11 e 12a costola vista rudimentale nel lato sinistro di uno del feto. L’assenza di un albero medio di 6-12 costole insieme all’aumento dello spazio tra le costole successive sono state denotate in più feti di diversi gruppi e diagnosticate come aumento dello spazio web, Assenza di corpo & processo spinoso è visto da interi segmenti vertebrali toracici che viene diagnosticato come difetto del tubo neurale di tipo chiuso in 1% casi da questo La percentuale di dismorfologia scheletrica calcolata in questo gruppo era del 32% (Figura 2).

Figura 2 5 mg AgNps gruppo trattato feto Alizarina macchia di vista dorsale (A) e (B), vista laterale (C) vista ventrale (D) e vista dorsale(E)

L’10mg AgNps gruppo trattato feti dimostrato dismorfismi scheletrici in forma di assenza di lombare e sacrale, l’assenza di ossa dell’anca, gravemente degenerata costole senza cartilagini, frontale e parietale osseo ha mostrato unossified e non sviluppate, la scoliosi è osservato toracica e lombare in uno del feto, l’assenza di vertebra cervicale è visto, ipoplasia mascellare, la divulgazione di sagittale e si vedono anche suture coronali. Le ossa degli arti inferiori non sviluppate sono visibili su entrambi i lati di uno del feto. La percentuale di dismorfologia scheletrica calcolata in questo gruppo era del 44% (Figura 3).

Figura 3 10 mg AgNps gruppo trattato feto Alizarina macchia vista dorsale (A, B).

Tra 15mg AgNps gruppo di trattati di 8 cuccioli sono stati osservati assenza di vertebre cervicali con assenza di 12 costola e il resto delle vertebre sono stati osservati non sviluppate processo spinoso, Metatarso schisi è visto anche in vista dorsale del piede di uno del feto, unossified osso dell’anca in vista ventrale con assenza di segmento & la fibrosi è anche visto, unossified osso temporale che si è trovato fibrosed sulla vista laterale del cranio, l’assenza di un segmento prossimale delle ossa innominate, la colonna vertebrale anomalia è stato visto con una rudimentale 6 ° e 9 ° costola e l’assenza di 10,11 e 12 si osserva costole in uno del feto, osso parietale non ossificato è stato visto anche, Anencefalia con scoliosi vertebre è stato visto in L1-L5 in uno del feto, osso dell’anca non ossificato è stato visto, scapole non ossificate di entrambi i lati è stato visto sulla vista dorsale di uno del feto, Assenza di cartilagine è stato visto dal 6 ° al 12 ° costola La percentuale di dismorfologia scheletrica calcolata in questo gruppo era del 60% (Figura 4).

Figura 4 15 mg AgNps gruppo trattato feto Alizarina macchia vista dorsale (A, B) e vista ventrale (C)

Il 20 mg/ kg di peso corporeo. I feti del gruppo trattati con AGNPS hanno presentato la più alta percentuale di dismorfologia scheletrica (76%). La scoliosi è stata osservata nella regione lombare in uno del feto, un feto ha dimostrato osso occipitale non ossificato, scapole non ossificate e osso dell’anca, si osserva una grande fibrosi nelle ossa mascellare, frontale e parietale, lo stesso si osserva anche nel secondo al sesto segmento dello sterno., schisi si osserva nella caviglia, si osserva un aumento dello spazio tra 1a e 2a costola e 5a-8a costola del lato sinistro di uno del feto, anche schisi si osserva nella sinfisi pubica congiunta di uno del feto, ipoplasia mandibolare non ossificata, assenza di processo spinoso con costole ondulate si osserva anche, in un feto abbiamo osservato la fusione completa della 2a-8a vertebra cervicale che è chiaramente differenziato dal resto della 1a vertebra cervicale. Abbiamo anche osservato scoliosi lieve e osso occipitale e parietale non ossificato e assenza di scapole sul lato destro di uno del feto, si osservano anche vertebre ipoplastiche (Figura 5).

Figura 5 20 mg AgNps gruppo trattato feto Alizarina macchia vista dorsale.