Citocheratina 5/6 e citocheratina 8/18 espressione in seno triplo negativo tumori: clinicopathologic significato nel Sud-Asiatica, popolazione

Metodi

Totale di 150 casi di TNBC sono stati selezionati dal record del dipartimento di patologia archivi. I campioni chirurgici includevano mastectomie radicali modificate, mastectomie semplici e ampie escisioni locali con dissezione linfonodale sentinella. Tutti i pazienti sono stati sottoposti a interventi chirurgici al Liaquat National hospital, Karachi da gennaio 2008 a dicembre 2013 per un periodo di 6 anni. Lo studio è stato approvato dal comitato di ricerca e revisione etica dell’istituzione e il consenso informato è stato preso da tutti i pazienti al momento dell’intervento chirurgico. Sono stati recuperati vetrini macchiati di ematossilina ed eosina e blocchi di paraffina di casi e sono state tagliate nuove sezioni dove necessario. I vetrini di tutti i casi sono stati esaminati da due istopatologi senior e sono state valutate caratteristiche patologiche come tipo istologico, grado tumorale, stadio T, stadio N, invasione linfovascolare, necrosi, fibrosi, infiltrazione linfocitica (linfociti infiltranti tumorali), presenza di componente insitu, diffusione pagetoide e invasione linfatica dermica. Le cartelle cliniche di tutti i pazienti sono state anche esaminate dai registri istituzionali per valutare l’età del paziente, la storia di radiazioni e chemioterapia e lo stato di recidiva. Inoltre, sono stati selezionati blocchi rappresentativi di ciascun caso e sono state eseguite immunoistochimica ER, PR e Her2neu per riconfermare lo stato triplo negativo.

ER, PR, Her2neu e Ki67 IHC sono stati eseguiti utilizzando anticorpi DAKO come sotto, con EnVision ™ FLEX, kit DAKO ad alto pH secondo il protocollo del produttore.

1. FLEX monoclonale coniglio anti-umano estrogeno recettore alfa, clone EP1.

2. Clone anti-umano PgR 636 del ricevitore del progesterone del topo monoclonale della FLESSIONE.

3. Oncoproteina anti-umana c-erbB-2 del coniglio policlonale.

4. FLEX monoclonale mouse anti-umano Ki67 antigene clone MIB-1.

La colorazione nucleare di ER e PR in > 1% delle cellule tumorali è stata considerata positiva. Per her2neu, i casi sono stati valutati 1+, 2+ e 3 + secondo le linee guida della PAC. Per casi equivoci (2+), FISH è stato eseguito utilizzando il kit sonda Path Vysion Her2neu secondo i protocolli del produttore. I risultati sono stati espressi come rapporto tra i segnali her2neu rispetto ai segnali CEP17 secondo le linee guida ASCO / CAP.

L’immunostenere Ki67 è stato registrato come variabili continue basate sulla percentuale di cellule tumorali colorate positive. Inoltre, sulla base dell’indice Ki67, i casi sono stati classificati nelle categorie < 15, 16-24, 25-44 e > 44% dell’indice ki67.

CK5/6 IHC è stato eseguito utilizzando FLEX Monoclonal Mouse Anti-human Cytokeratin 5/6, clone D5 / 16 B4 dal metodo DAKO envision secondo il protocollo dei produttori. La colorazione citoplasmatica e membranosa da intermedia a forte in oltre il 10% delle cellule è stata considerata positiva. La colorazione da debole a intermedia in < 10% è stata presa come focale positiva, mentre nessuna colorazione è stata considerata negativa (File aggiuntivo 1: Figura S1).

CK 8/8 IHC è stato eseguito utilizzando citocheratina anti-umana monoclonale di topo 5/6, clone D5 / 16 B4, secondo il metodo DAKO envision. La colorazione citoplasmatica e membranosa da intermedia a forte in oltre il 50% delle cellule è stata considerata positiva. La colorazione da debole a intermedia (citoplasmatica, con perdita di reattività di membrana) nel 10-50% è stata presa come positiva focale, mentre nessuna colorazione o colorazione debole in < 10% è stata considerata negativa (File aggiuntivo 1: Figura S1).

Lo stato di recidiva e il follow-up sono stati valutati rivedendo la cartella clinica ospedaliera. La sopravvivenza globale è stata presa come tempo dall’escissione chirurgica fino alla morte o all’ultimo follow-up e la sopravvivenza libera da malattia è stata definita come tempo tra l’escissione chirurgica e la recidiva locale o metastasi a distanza, la morte o l’ultimo follow-up.

Il pacchetto statistico per le scienze sociali (SPSS 21) è stato utilizzato per la compilazione e l’analisi dei dati. La media e la deviazione standard sono state calcolate per le variabili quantitative. Frequenza e percentuale sono state calcolate per le variabili qualitative. Chi square è stato applicato per determinare l’associazione. Student t test o Mann whitney test sono stati applicati per confrontare differenza di mezzi tra i gruppi. Valore P ≤ 0,05 come significativo. Le curve di sopravvivenza sono state tracciate usando il metodo Kaplan–Meier e il significato della differenza tra le curve di sopravvivenza è stato determinato usando il rapporto log-rank. Valore P ≤ 0.05 è stato preso come significativo.

Risultati

L’età media dei pazienti coinvolti nello studio era di 48,9 anni e la fascia di età più comune era di 31-50 anni. La maggior parte dei pazienti si è presentata allo stadio T2 con un indice ki67 medio elevato, ovvero il 46,9%. il 42,7% dei casi ha avuto metastasi nodali. Sebbene l ‘ 84% dei casi fosse di carcinoma duttale invasivo convenzionale, NST; tuttavia una percentuale significativa di casi era di istologia metaplastica (9,3%). La maggior parte dei casi era di alto grado (86,7% grado III). La maggior parte dei tumori mostra infiltrazione linfocitica e necrosi. La maggior parte dei tumori manca di componente insitu (61%). Recidiva locale o metastasi tardive a distanza è stata osservata nel 17,8% dei casi (Tabella 1).

L’espressione positiva (> 10%) di CK5/6 è stata notata nell ‘8% (12 casi) di TNBC mentre il 2,4% (4 casi) ha mostrato focale positiva (< 10%) e l’ 89,3% (134) era negativa con CK5/6. La perdita completa dell’espressione di CK8/18 è stata osservata nel 4,7% (7 casi) mentre il 32,7% (49 casi) ha rivelato una perdita focale di CK8/18 e il 62,7% (94 casi) ha mostrato un’espressione normale intatta di CK8/18. Non è stata osservata alcuna associazione significativa di CK5/6 e CK8/18 con vari parametri clinicopatologici (Tabelle 2 e 3). Allo stesso modo non è stata notata alcuna associazione significativa di CK 5/6 e CK8/18 con lo stato di recidiva dei pazienti (File aggiuntivo 2: Figura S2).

Discussione

Nel presente studio abbiamo valutato l’espressione di una basale (CK5/6) e uno lume marcatore (CK8/18) in TNBC nella nostra popolazione e ha scoperto che; 8 e il 2,7% di TNBC mostrato positivo focale e l’espressione positiva di CK5/6, rispettivamente 4,7 e 32.7% di TNBC ha rivelato la perdita completa e la perdita focale di espressione di CK 8/18 rispettivamente. In tutti quei casi in cui la perdita focale CK8/18 è stata notata, c’è stata perdita di reattività di membrana mentre la colorazione citoplasmatica è stata mantenuta in poche cellule. Tuttavia non è stata osservata alcuna associazione significativa tra questi modelli di espressione anomala di citocheratine con vari parametri clinici e prognostici di TNBC nella nostra popolazione. Il cancro al seno è una delle neoplasie più comuni nella popolazione dell’Asia meridionale, specialmente in giovane età .

Gene expression profiling definisce i tumori al seno basali come quelli che presentano cluster basali di geni che includono EGFR, citocheratina basale 5/6, C-kit, cluster di proliferazione e bassa espressione di Her2neu e geni correlati ai recettori ormonali . Tuttavia il cancro al seno basale non è una singola entità e comprende diversi sottotipi tra cui due sottotipi basali (BL1 e BL2), mesenchimali, mesenchimali simili a staminali, immunomodulatori e sottotipi di androgeni luminali . Oltre a ciò sono stati definiti anche sottotipi ricchi di interferone e bassi di claudina . La sottotipizzazione dei tumori basali della mammella non è raccomandata da ASCO / CAP. L’espressione di CK 5/6 varia dal 24 al 72% nei TNBC come riportato in studi precedenti . Altri ricercatori hanno anche proposto il significato prognostico di CK 5/6 nei tumori al seno negativi al nodo . Nielson et al. suggerito che il cancro al seno positivo CK5 / 6 ha una prognosi peggiore indipendente dal grado del tumore, dallo stadio T e dallo stato ormonale/Her2neu . Allo stesso modo in un altro studio è stato proposto che CK5/6 è marker di sopravvivenza libera da malattia più breve, indipendente da altri fattori prognostici del cancro al seno . Inanc et al. segnalato 50.5% espressione di CK5 / 6 con correlazione positiva di CK5 / 6 TNBC con metastasi nodali e dimensioni del tumore . Tuttavia, in contrasto con questi studi abbiamo trovato una bassa espressione di espressione CK5/6 in TNBC nella nostra popolazione studiata, che può rappresentare un diverso profilo genomico di TNBC nella nostra popolazione, che deve essere esplorato in ulteriori studi. Il ruolo prognostico di CK5 / 6 è stato proposto in altri cancri dell’organismo .

CK8 / 18 è una citocheratina luminal pricipalmente espressa in epitelio del seno in un modello membranoso e citoplasmatico. Cimpean et al. definiti questi diversi modelli di CK8 / 18 nel cancro al seno; citoplasmatico diffuso, membranoso e combinato citoplasmatico e membranoso .Alcuni ricercatori hanno proposto che la perdita di espressione CK8/18/basso CK8/18 è associata a prognosi peggiore e ad alto rischio di metastasi . Tuttavia non abbiamo trovato alcun significato prognostico di perdita di espressione CK8/18 con vari fattori prognostici e recidiva in TNBC.

Abbiamo scoperto che il 32,7% di TNBC mostra una perdita focale di espressione CK8/18. In tutti questi casi c’è stata perdita di reattività membranosa di CK8/18 mentre la colorazione citoplasmatica è stata mantenuta in poche cellule. Aiad et al. in uno studio che coinvolge 70 casi di cancro al seno trovato espressione anormale di CK8 / 18 (citoplasmatico) nel 70% del cancro al seno egiziano, che suggeriscono un sacco di eterogeneità nell’espressione citocheratina del cancro al seno in diverse parti del mondo .