Prestazioni cliniche del test HPV Roche Cobas 4800 | Jiotower

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Il papillomavirus umano (HPV) è uno dei virus a trasmissione sessuale più comuni in tutto il mondo e un importante contributo al cancro, causando quasi 60.000 nuovi casi di cancro all’anno in Europa (1) e portando allo sviluppo del cancro cervicale nelle donne. HPV16 e HPV18 sono i più cancerogeni (2, 3), in quanto circa il 70% di tutti i tumori cervicali presenti con infezioni da HPV16 o HPV18 (4). Quasi il 30% dei tumori cervicali sono mancati dallo screening citologico cervicale iniziale (5), quindi sono necessari test accurati e oggettivi per il cancro cervicale associato all’HPV che utilizzano tecniche molecolari più sensibili per fornire una prevenzione e un trattamento efficaci per ridurre i rischi futuri e l’incidenza del cancro cervicale.

Il Roche Cobas 4800 HPV test (Cobas) è un nuovo metodo molecolare basato sulla PCR in tempo reale (RT-PCR) (6, 7), con un sistema completamente automatizzato che consente un’elaborazione rapida ed efficiente del campione. Cobas in grado di rilevare HPV16, HPV18, 12 altri ad alto rischio HPVS (hrHPVs) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, e -68, come risultato in pool), e il controllo β-globina indipendentemente nella stessa PCR. Lo scopo principale del nostro studio era quello di valutare le caratteristiche tecniche e cliniche delle prestazioni dei Cobas. Campioni cervicali da 6.056 donne di cui al Dipartimento di Patologia presso la Icahn School of Medicine del Monte Sinai per l’esame di routine delle lesioni cervicali tra novembre 2011 e febbraio 2012 sono stati raccolti in un mezzo citologico a base liquida (PreservCyt; Hologic, Marlborough, MA) e conservato a 4°C fino all’uso.

Centottanta esemplari sono stati testati per i genotipi hrHPV sia dal test HPV Roche Cobas 4800 che dal test DNA hrHPV Digene Hybrid Capture 2 (HC2) (Tabella 1), con eventuali discrepanze risolte utilizzando il test di genotipizzazione HPV Linear Array (LA) (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Secondo il test chi-quadrato di Pearson, c’era una differenza significativa nel numero di campioni positivi e negativi identificati dai due test HPV (P < 0.001). Tuttavia, la concordanza tra i due test era statisticamente forte , con un livello di accordo dell ‘ 88,33% (P = 0,0218) e il coefficiente kappa di Cohen di 0,767 (intervallo di confidenza al 95%, da 0,674 a 0,860; P < 0,001), dove gli intervalli di confidenza del 95% dei valori kappa sono stati dedotti da una distribuzione binomiale.

Nel discordanti campioni, la HPV test rilevato di HPV a basso rischio (lrHPV) genotipi nel 50% (2/4) dei campioni che sono stati HC2 positivo e Cobas negativo e nel 13,33% (2/15) dei campioni che erano HC2 negativo e Cobas positivo. HPV53 è stato trovato in due campioni HC2 positivi e Cobas negativi, suggerendo che le sonde nel kit Digene hanno reagito in modo incrociato con questo genotipo HPV. Questa osservazione non sorprende, poiché la reattività crociata del test HC2 con genotipi lrHPV, in particolare HPV53, è stata osservata in precedenza (9). La conseguenza della reattività crociata del genotipo lrHPV in un test HPV è un aumento del numero di risultati falsi positivi. Ciò potrebbe portare a un’indagine eccessiva e a un trattamento eccessivo attraverso test di follow-up su donne che possiedono solo genotipi lrHPV e sono in realtà a basso rischio di sviluppare il cancro cervicale. In due campioni HC2-negativi / Cobas-positivi, HPV62 e HPV89 (CP6108) sono stati rilevati in entrambi i campioni e HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 e HPV84 sono stati rilevati in uno dei campioni, suggerendo che l’infezione mista da HPV porta a risultati falsi positivi dal test HPV Cobas.

Il test LA HPV ha rilevato genotipi hrHPV in nessuno dei campioni HC2 positivi e Cobas negativi (0/4) e nell ‘ 80% (12/15) dei campioni HC2 negativi e Cobas positivi. Il test HC2 non è riuscito a rilevare hrHPV in questi campioni, il che indica che il test HC2 ha mancato più genotipi hrHPV rispetto al test Cobas, il che implica che Cobas è un test di screening potenzialmente più efficace a causa di una migliore sensibilità e precisione. Al contrario, l’HPV non è stato rilevato dal test LA HPV nel 6,67% (1/15) dei campioni HC2-negativi/Cobas-positivi. Nel complesso, tuttavia, la differenza nella rilevazione dell’hrHPV tra i test HC2 e Cobas era ancora statisticamente insignificante (χ2 = 2,901, P = 0,0885).

Sessantotto campioni sono stati poi utilizzati per determinare la riproducibilità del test Cobas HPV. La riproducibilità tra le prove iniziali e ripetute, calcolata con una tabella di contingenza standard 2 per 2, è stata del 93,55%; il coefficiente kappa tra i risultati del primo e del secondo ciclo di test Cobas è stato di 0,869 (IC al 95%, da 0,744 a 0,993; P < 0,001). La forza di questo accordo è considerata molto buona, suggerendo che il test è altamente affidabile.

Centottantasette campioni sono stati testati dal Cobas HPV test per determinare la differenza nel rilevamento di HPV tra campioni prealiquotati e postaliquotati. Solo 7 campioni sono risultati non corrispondenti, per un tasso del 3,74% (IC 95%, da 1,02% a 6,46%). L’analisi statistica ha rivelato che la differenza tra i campioni prealiquotati e quelli postaliquotati non era significativa (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Poiché non è stato osservato alcun aumento della percentuale di HPV positivi prima e dopo il processo citologico (prealiquot versus postaliquot), la contaminazione incrociata dei campioni durante il trattamento citologico è estremamente rara. Il test HPV dopo la citologia può migliorare significativamente il flusso di lavoro e ridurre l’aliquota non necessaria quando è previsto un test HPV riflesso per citologia anormale.

Infine, 5.621 campioni sono stati testati utilizzando il test Cobas HPV per determinare gli effetti del vortexing e del vortexing (prima del test Cobas) sui tassi di guasto. Tra i campioni 1,380 elaborati dal vortex, il tasso di fallimento era 4.57% (IC al 95%, dal 3,65% al 5,91%). Al contrario, tra i campioni 4,241 elaborati da swirling, il tasso di fallimento era 1.16% (95% CI, 0.84% a 1.48%). Il test del chi-quadrato di Pearson ha rivelato che le differenze dei tassi di fallimento tra i campioni vortexati e delicatamente roteati erano estremamente significative (χ2 = 59.983, P < 0.0001), con un vortice delicato raccomandato per ridurre il tasso di fallimento di Cobas.

In conclusione, il test HPV Cobas 4800 ha dimostrato un maggior grado di sensibilità e specificità nella rilevazione dei genotipi hrHPV rispetto al test hrHPV Digene HC2. Il test Cobas aveva anche un livello inferiore di reattività crociata con genotipi lrHPV rispetto al test HC2, come evidenziato dal minor numero di casi falsi positivi. Tuttavia, la differenza di prestazioni complessive tra questi due test non è statisticamente significativa.