Quantificare i livelli di ROS utilizzando CM-H2DCFDA e HyPer

A bassi livelli, le specie reattive dell’ossigeno (ROS) possono agire come molecole di segnalazione all’interno delle cellule. Quando la produzione di ROS supera notevolmente la capacità dei sistemi antiossidanti endogeni, o i livelli antiossidanti sono ridotti, i livelli di ROS aumentano ulteriormente. Quest’ultimo è associato all’induzione dello stress ossidativo e alla trasduzione del segnale associata e caratterizzato da cambiamenti indotti dal ROS nell’omeostasi redox cellulare e / o effetti dannosi sulle biomolecole (ad es. DNA, proteine e lipidi). Dati i complessi meccanismi coinvolti nella produzione e nella rimozione del ROS, in combinazione con la mancanza di molecole reporter che sono veramente specifiche per un particolare tipo di ROS, la quantificazione dei livelli di ROS (sub)cellulare è un compito impegnativo. In questo capitolo descriviamo due strategie per misurare il ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).