Aktywność klastogeniczna 2-chlorodeoksyadenozyny w komórkach somatycznych ssaków

mutageneza
artykuł badawczy

aktywność Klastogeniczna 2-chlorodeoksyadenozyny w komórkach somatycznych ssaków

Gilmara Auseha Antoucciego; Katarzyna Sati Takahashii, II

Iuniversidade Sao Paulo, Wydział Ribeiran Preto, Wydział genetyki, Ribeirão preto, SP, Brazylia
IIUniversidade Sao Paulo, Wydział Filozofii, Nauk i literatury Ribeiran Preto, Wydział Biologii, Ribeirão preto, SP, Brazylia

zaoczny, zaoczny

abstract

The Base Analogue 2-Chlorodeoxyadenosine (2-cda) used for therapy in chronic resistant and advanced, w połączeniu z Disorders, is Cytotoxic for both dividing and non-dividing lymphocytes. W niniejszej pracy oceniono potencjał klastogenny tego leku in vitro w ludzkich limfocytach w hodowli i in vivo w komórkach szpiku kostnego myszy BALB/C. W ludzkich limfocytach działanie klastogenne 2-CdA badano w fazach G1, S I G2 cyklu komórkowego, stosując trzy różne stężenia (10, 20 i 40 mg / mL). Analizowane punkty końcowe obejmowały indeks mitotyczny (MI), indeks proliferacji (PI), siostrzaną wymianę chromatyd (SCE) i aberrację chromosomalną (CA). Analiza statystyczna za pomocą testu wariancji (ANOVA) wykazała znaczny wzrost (p < 0.05) w częstotliwościach CA dla komórek leczonych w fazie S, Ale MI nie różnił się. Badane stężenia nie powodowały znaczącego wzrostu średniej częstości występowania SCE, ani nie zmieniały komórki PI w fazach G1 i S. Stężenia badane in vivo wynosiły 0,25, 0,375 i 0,5 mg / kg masy ciała. W tym teście nie obserwowano zmian w częstości CA i MI przy badanych poziomach dawek. Dlatego wyniki wskazują na klastogenne Działanie 2-CdA w hodowlach ludzkich limfocytów.

słowa kluczowe: limfocyty ludzkie, 2-CdA, aberracje chromosomalne, SCE, cykl komórkowy.

wprowadzenie

analogi puryn są bardzo aktywne w leczeniu zaburzeń limfoproliferacyjnych (Pott-Hoeck i Hiddemann, 1995). Kladrybina, 2-chlorodeoksyadenozyna (2-CdA), jest analogiem nukleozydu z atomem halogenu zastąpionym w pozycji 2 W pierścieniu purynowym, który nadaje odporność na deaminację przez deaminazę adenozyny (ADA). 2-CdA jest lekiem z wyboru w leczeniu białaczki włochatokomórkowej, ale jest również wysoce skuteczny w innych złośliwych nowotworach limfatycznych o niskim stopniu złośliwości, w tym przewlekłej białaczce limfocytowej (CLL). Doniesienia w literaturze wykazały, że 2-CdA daje podobny wskaźnik całkowitej odpowiedzi (CR) i wskaźnik ogólnej odpowiedzi (Or) w stosunku do fludarabiny, ale wpływ obu leków na wskaźniki przeżycia u pacjentów z PBL jest nadal niepewny. Wskaźnik CR wywołany przez 2-CdA jest znacząco wyższy niż u pacjentów leczonych konwencjonalną chemioterapią (Robak, 2001). 2-CdA jest kolejnym nowym chemioterapeutycznym analogiem purynowym, o specyficznej toksyczności dla limfocytów (Schrimer et al., 1997). Cytotoksyczność występuje w proliferujących i spoczynkowych komórkach, powodując takie zdarzenia, jak hamowanie syntezy DNA i białek, a także indukcja apoptozy(Robertsson et al., 1993). Pomimo toksyczności uzyskano dobre wyniki w odpowiedzi terapeutycznej, a lek ten jest główną opcją w leczeniu tricoleukemii, w którym pacjenci wykazują białaczkę włochatokomórkową (HCL) (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993).

deoksynukleozydy Adeninowe indukują apoptozę w limfocytach spoczynkowych i są przydatnymi lekami w leczeniu chorób limfoproliferacyjnych. Zaproponowano kilka mechanizmów wyjaśniających toksyczność deoksyadenozyny i jej analogów w komórkach spoczynkowych, w tym bezpośrednie wiązanie dATP z czynnikiem proapoptotycznym Apaf-1 i aktywację szlaków kaspazy-9 i -3 (Genini i wsp., 2000).

u pacjenta z ostrą białaczką szpikową leczonego 2-CdA i Ara-C stwierdzono opóźnioną regenerację szpiku, zapalenie zatok i posocznicę Candida tropicalis. Wystąpiła niewydolność wielosystemowa i zmarła 1 miesiąc po rozpoczęciu leczenia AML. Badanie pośmiertne, ograniczone do klatki piersiowej i brzucha, ujawniło rozsianą kandydozę obejmującą płuca, serce, wątrobę, nerki i śledzionę (Mathew et al., 2000).

Zwaan i in. (2002) zaobserwował, że pacjenci z t (9:11) wydają się być znacznie bardziej wrażliwi niż inni pacjenci z AML na następujące leki: cytarabina (mediana: 2,9-krotnie), doksorubicyna (4,5-krotnie), mitoksantron (8,0-krotnie), 2-chlorodeoksyadenozyna (10,0-krotnie).

analogi nukleozydów (NA), takie jak arabinozyd cytozyny, fludarabina, kladrybina i gemcytabina są niezbędnymi składnikami terapii indukcyjnej AML (ostra białaczka szpikowa); są również skuteczne w leczeniu zaburzeń limfoproliferacyjnych i były stosowane w leczeniu niektórych guzów litych. Te ważne związki mają pewne wspólne cechy, a mianowicie wymagają transportu przez specyficzne transportery błonowe oraz metabolizmu i interakcji z celami wewnątrzkomórkowymi. Różnią się one jednak pod względem typów transporterów i ich preferencyjnej interakcji z pewnymi celami, które mogą wyjaśniać skuteczność przeciwko szybkim proliferującym nowotworom (Galmarini et al., 2001).

biorąc pod uwagę te informacje, ważne jest, aby ocenić potencjał klastogenny 2-CdA, na podstawie doniesień, że lek ten indukuje cytotoksyczność (Tallman i wsp ., 1992; Tallman et al., 1993) i DNA single-strand breaks (Liliemark and Juliusson, 1994). Celem pracy była ocena zdolności tego chemioterapeutyku do indukowania uszkodzeń chromosomów w ludzkich limfocytach i komórkach szpiku kostnego myszy BALB / C.

materiały i metody

środek chemiczny

2-chlorodeoksyadenozyna przeciwnowotworowa została uprzejmie dostarczona przez Centrum chemioterapii Hospital de Clínicas Szkoły Medycznej Ribeirão Preto (Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto – USP) do eksperymentów in vitro i In vivo.

Ludzkie limfocyty krwi obwodowej

próbki krwi pobrano od sześciu niepalących zdrowych ochotników (trzech kobiet i trzech mężczyzn) w wieku od 25 do 35 lat i poddano leczeniu w fazach G1, S I G2 cyklu komórkowego w celu analizy nieprawidłowości chromosomowych (CA) i wskaźnika mitotycznego (MI). Ponadto do analizy siostrzanej wymiany chromatyd (SCE) i wskaźnika proliferacji (PI) wykorzystano limfocyty trzech osobników (dwie kobiety i dwa samce). Limfocyty hodowano w 78% pożywce RPMI-1640 (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) uzupełnione 20% surowicą cielęcą płodu (Cultilab, Brazylia) i dodane penicyliną (5 mg/mL) i streptomycyną (10 mg/mL). Komórki stymulowano 2% fitohemaglutyniną (Life Technologies, Grand Island, NY). Do każdego 5 mL pożywki hodowlanej Dodano 1 mL osocza i kultury inkubowano w temperaturze 37 °C przez 52 godziny w celu analizy CA. Roztwory 2-CdA rozcieńczono w wodzie dejonizowanej w następujących stężeniach: 10, 20 i 40 mg/mL pożywki hodowlanej, zgodnie z Prestonem i wsp. (1987). Kontrola negatywna została uwzględniona we wszystkich eksperymentach. Przygotowanie szkiełka i barwienie przeprowadzono standardowymi technikami (Moorhead et al., 1960). Szkiełka do analizy siostrzanej wymiany chromatyd (SCE) i wskaźnika proliferacji (PI) uzyskano z hodowli równoległych, dla których 5-Bromo-2′-deoksyurydyna (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg/mL) dodano dodatkowo do 2-CdA. Różnicowe barwienie chromatyd siostrzanych otrzymano techniką fluorescencji i Giemsa, stosując Hoechst 33258 (Calbiochem-Behring Corp.; 0,05 mg/mL roztworu Hanka) i 5% Giemsa (Merck). Metoda ta jest modyfikacją tych opublikowanych przez Korenberga i Freedlendera (1974) oraz Perry ‘ ego i Wolffa (1974). Szkiełka były wystawione na działanie białego światła przez noc. Preparaty metafazy o chromosomach 46 ± 1 analizowano w ślepym teście. Chromosomy zostały narysowane schematycznie dla oceny SCE, a także dla analizy CA.

protokoły leczenia

2-CdA leczenie kultur limfocytów w różnych fazach cyklu komórkowego

aberracje chromosomalne (CAs)

po siedmiu godzinach rozpoczynania hodowli (Faza G1) hodowle limfocytów traktowano 2-CdA przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C w pożywce hodowlanej bez surowicy. Komórki utrwalano 52 godziny po rozpoczęciu hodowli. Po leczeniu 2-CdA komórki przemyto dwukrotnie w pożywce bez surowicy i ponownie inkubowano w pożywce pełnej. W przypadku leczenia w fazie S, 24 h-hodowle były leczone 2-CdA przez 6 godzin. Komórki przemyto dwukrotnie w pożywce wolnej od surowicy, ponownie inkubowano w pożywce pełnej i utrwalono po 52 godzinach inkubacji. W leczeniu fazy G2, 69 hodowli H traktowano 2-CdA przez 3 godziny, a komórki utrwalano po 72 godzinach inkubacji. Kolchicynę (Merck 0,016%) dodano 1,5 godziny przed utrwaleniem. W celu określenia MI oceniono 1000 komórek na hodowlę, a 100 metafaz z każdej hodowli analizowano dla CA, co daje odpowiednio 6000 komórek i 600 metafaz dla każdego leczenia.

siostrzane wymiany chromatydowe (SCE)

hodowle limfocytów od 4 zdrowych dawców (dwie kobiety i dwóch mężczyzn) traktowano 5-BrdU (10 µg/mL) na początku inkubacji, a gdy komórki osiągnęły fazę G1 (7 godzin po rozpoczęciu hodowli), Dodano 2-CdA plus 5-BrdU przez 1 godzinę w temperaturze 37 °C w pożywce hodowlanej bez surowicy. Po leczeniu komórki przemyto dwukrotnie w pożywce wolnej od surowicy, ponownie Dodano 5-BrdU, a następnie ponownie inkubowano komórki w pożywce pełnej. Do leczenia w fazie S, 24 h-hodowle traktowano 2-CdA plus 5-BrdU w pożywce wolnej od surowicy przez 6 godzin. po zabiegu komórki przemyto dwukrotnie w pożywce wolnej od surowicy i ponownie inkubowano w pożywce pełnej 5-BrdU. W przypadku analizy SCE i PI komórki (fazy G1 i S) utrwalano 72 godziny po rozpoczęciu hodowli. 50 metafaz drugiego podziału na kulturę oceniono dla SCE, a 100 metafaz z każdej kultury oceniono dla pierwszego, drugiego i trzeciego podziału komórek, w sumie odpowiednio 200 metafaz i 400 komórek na leczenie. PI Otrzymano za pomocą następującego równania:

PI =

gdzie M1 i m3 są numerami metafaz pierwszego i trzeciego podziału, odpowiednio (Degrassi et al., 1989).

Zwierzęta

wykorzystywanymi zwierzętami były myszy BALB/c (Mus musculus), uzyskane z domu zwierząt School Of Medicine w Ribeirão Preto.

test In vivo na komórkach szpiku kostnego myszy Balb/c

myszy o masie około 30 g (5-6 tygodni) podzielono na grupy po 8 zwierząt (4 samce i 4 samice) i poddano iniekcji dootrzewnowej 0.5 mL/objętość końcowa roztworu 2-CdA rozcieńczonego wodą destylowaną w następujących stężeniach: 0,25, 0,375 i 0,5 mg / kg masy ciała. Dwadzieścia dwie godziny po leczeniu (tj. dwie godziny przed poświęceniem) myszy wstrzyknięto 0,3 mL/objętość końcową 1% roztworu kolchicyny (Sigma) i zabito przez inhalację eterem 2 godziny później. Negatywna grupa kontrolna otrzymała wodę destylowaną 0,5 mL / objętość końcową / zwierzę, a pozytywna grupa kontrolna otrzymała cyklofosfamid (CP), 25 mg / kg masy ciała. Preparaty szpiku kostnego do komórek metafazowych otrzymano standardową techniką (Ford i Hamerton, 1956). Slajdy analizowano w ślepym teście i schematycznie narysowano 100 metafaz na zwierzę. MI uzyskano przez zliczanie liczby komórek mitotycznych w 1000 analizowanych komórkach na zwierzę, a 100 komórek oceniono na ok.

analiza statystyczna

przeprowadzono jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA) na liczbie nieprawidłowych metafaz i całkowitej liczbie CA, MI, sce I PI, z obliczeniami wartości P dla każdej fazy cyklu komórkowego. Ilekroć p < 0.05 stwierdzono, średnie wartości każdego leczenia zostały porównane przez test studenta-Newmana Keulsa. Analiza statystyczna została przeprowadzona przy użyciu pakietów oprogramowania Sigma Stat (Jandel Corporation).

wyniki

limfocytom ludzkim

limfocytom krwi obwodowej podawano różne stężenia (10, 20 i 40 mg/mL) 2-CdA w fazach G1, S i G2 cyklu komórkowego. Analizowano aberracje chromosomalne (CA) i indeks mitotyczny (MI) w leczonych limfocytach od sześciu zdrowych osób (trzech kobiet i trzech mężczyzn) (Tabela 1). W przypadku komórek leczonych w fazie S zaobserwowano znaczny wzrost częstości występowania CA (p < 0,05) we wszystkich stężeniach, w porównaniu z częstotliwościami kontrolnymi. Najczęściej obserwowanymi rodzajami aberracji chromosomalnych były luki chromatydowe i izochromatydowe (dane nie pokazane) i przerwy, po których następowały podwójne minuty, podwójne fragmenty i pojedyncze fragmenty. W przypadku komórek leczonych w fazach G1 i G2 częstość występowania CA nie wykazywała statystycznie istotnej różnicy między kulturami leczonymi a wartościami kontrolnymi. Chociaż stwierdzono niewielkie różnice w MI, statystycznie istotna różnica (p < 0, 05) nie była obserwowana w żadnym z zabiegów w odniesieniu do wskaźników kontrolnych.

średnie częstotliwości wymiany chromatyd siostrzanych (SCE) i wskaźnika proliferacji (PI) oznaczano w czterech grupach kontrolnych oraz w hodowlach limfocytów leczonych 2-CdA podczas faz G1 i S w hodowlach zebranych po 72 godzinach (Tabela 2). Badane stężenia (10, 20 i 40 mg/mL) nie powodowały istotnego wzrostu średniej częstości występowania SCE, ani nie zmieniały komórki PI podczas faz G1 i S (Tabela 2).

u myszy Balb/c

częstość występowania CA i MI analizowano w komórkach szpiku kostnego u 8 myszy Balb / c (4 kobiety i 4 samce) po dootrzewnowym leczeniu 2-CdA w dawce 0,25, 0,37 i 0,50 mg/kg mc. (Tabela 3). W teście in vivo, 2-CdA nie wykazywał działania cytotoksycznego dla żadnej z badanych dawek w odniesieniu do częstości CA, jak również wartości MI, gdy porównywano Wszystkie grupy terapeutyczne. Większość aberracji była przerwami typu chromatydowego. Nie stwierdzono istotnej różnicy (p < 0,05) pomiędzy zwierzętami lub pomiędzy samcami a samicami w odniesieniu do analizowanych parametrów.

dyskusja

w ciągu ostatnich kilku lat kilka badań wykazało antyproliferacyjne działanie leków stosowanych w leczeniu nowotworów limfatycznych. 2-CdA jest analogiem zasadowym stosowanym w chemioterapii konkretnego rodzaju białaczki, białaczki włochatokomórkowej. Istnieją również dane wykazujące, że 2-CdA może być stosowany w połączeniu z innymi lekami, w leczeniu opornego i nawracającego chłoniaka nieziarniczego o niskim stopniu złośliwości (NHL) (Laurencet et al., 1999; Robak et al., 1999). W niniejszej pracy przeprowadzono badanie cytogenetyczne in vitro w celu oceny potencjału klastogennego 2-CdA w ludzkich limfocytach pod względem indukcji CA i SCE. Według Moore ‘ a i Bendera (1993), strukturalny CAs może powodować utratę materiału chromosomalnego. Rodzaj powstałego CA zależy od charakteru zmiany wywołanej w DNA i fazy cyklu komórkowego, podczas której komórki były narażone (Natarajan et al., 1996).

hodowle limfocytów traktowano trzema stężeniami 2-CdA (10, 20 i 40 mg/mL) w różnych fazach cyklu komórkowego. Działanie klastogenne leku wykazano przez znaczny wzrost (p < 0,05) częstości występowania CA dla wszystkich badanych stężeń w fazie s cyklu komórkowego. W celu leczenia w tej fazie, 2-CdA pozostawiono na 6 godzin w kulturach. W przypadku środków działających w określonej fazie cyklu komórkowego, kolejność podawania może określać skuteczność i toksyczność terapii skojarzonej (Smorenburg i wsp ., 2001).

wyniki te są zgodne z tymi zgłoszonymi przez innych autorów (Carson et al., 1983), sugerując, że 2-CdA jest włączany do dna wytwarzając pęknięcia jednowłóknowe (SSBs). SSB mogą powstać zarówno bezpośrednio, w wyniku rozpadu uszkodzonych cukrów, jak i pośrednio, w wyniku enzymatycznego rozszczepiania szkieletu fosfodiestru. Bezpośrednie SSB powstają głównie w wyniku ataku wolnych rodników, takich jak reaktywne formy tlenu, podczas gdy pośrednie SSB są głównie normalnymi półproduktami naprawy wycięcia bazy DNA (Ber). SSB są również najczęstszymi zmianami wywołanymi przez egzogenne genotoksyny, takie jak promieniowanie jonizujące, środki alkilujące oraz kamptotekinę trującą topo1 i jej pochodne przeciwnowotworowe (Caldecott, 2004).

niektóre raporty pokazują, że bazowy analog potrzebuje dłuższego okresu czasu na fosforylację (Gandhi et al., 1997). Mechanizm ten może wyjaśniać zwiększoną częstotliwość całkowitych aberracji chromosomalnych w fazie s cyklu komórkowego. Ten sam mechanizm występuje w komórkach leczonych mitomycyną C, Związkiem zależnym od S, który wymaga replikacji DNA w celu przekształcenia uszkodzeń DNA w aberracje chromosomowe (Evans And Scott, 1964;Traganos et al., 1980). Inne leki przeciwnowotworowe reprezentują ten sam mechanizm i działanie 2-CdA, takie jak fludarabina i 1-B-D-arabinozylocytozyna (ara-C).

cytotoksyczne analogi nukleozydów mają szerokie zastosowanie kliniczne. Były one jednymi z pierwszych chemioterapeutyków stosowanych w leczeniu chorób nowotworowych. Przeciwnowotworowe nukleozydy obejmują analogi fizjologicznych nukleozydów pirymidynowych i purynowych. Środki te działają jako antymetabolity, konkurując z naturalnymi nukleozydami podczas syntezy DNA lub RNA oraz jako inhibitory kluczowych enzymów komórkowych (Szafraniec i in., 2004), są specyficzne dla S I muszą być fosforylowane, aby aktywować trifosforany (Plunkett et al., 1980). W fazie s cyklu komórkowego, kiedy materiał genetyczny jest duplikowany przez mechanizm replikacji DNA, komórki są szczególnie podatne na Genotoksyczność. Podczas gdy punkty kontrolne G1 i G2 / M zatrzymują progresję cyklu komórkowego w dobrze zdefiniowanych punktach poprzez hamowanie kinaz zależnych od cyklin, wiadomo, że punkty kontrolne w fazie s występują w dowolnym momencie w fazie s i obejmują wiele szlaków sygnałowych (Sidorova and Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)

bardzo ważne jest przeanalizowanie mechanizmu reakcji na lek podczas różnych faz cyklu komórkowego. Wysoki poziom zmian chromosomalnych może być spowodowany cytotoksycznością 2-CdA spowodowaną jego konwersją do 2-CdATP, która indukuje hamowanie syntezy DNA i naprawy DNA, z udziałem enzymów reduktazy rybonukleotydowej i polimeraz DNA. Związek ten wykazuje oporność na aktywność deaminazy adenozyny (ADA), która jest nadawana przez atom chloru i zastąpienie wodoru w pozycji 2 pierścienia purynowego adenozyny (Baltz i Montello, 1993).

SCE są często uważane za parametr do oceny genotoksyczności, ponieważ ich częstotliwość wyraźnie zwiększa się w wyniku narażenia na wiele mutagennych i rakotwórczych substancji chemicznych. W niniejszym eksperymencie częstość występowania sce w kulturach leczonych 2-CdA wykazywała niewielki wzrost w stosunku do kultur kontrolnych. Wzrost obserwowany podczas obu faz nie różnił się znacząco.

ponieważ wiele leków jest aktywowanych po ich metabolizmie, zaleca się testy mutagenności in vivo do oceny aktywności klastogennej tych związków wymagających aktywacji metabolicznej. Takie podejście zapewnia również podobne warunki do tych występujących u ludzi (Legator and Ward Jr., 1991). Chociaż istnieją różnice między gryzoniami a ludźmi, zaleca się, aby jakakolwiek ocena opierała się zarówno na badaniach in vitro, jak i in vivo, a nie tylko na żadnym z nich (Huggett et al., 1996).

w niniejszym badaniu działanie klastogenne 2-CdA analizowano również w komórkach szpiku kostnego myszy BALB/c w stężeniach 0,25, 0,375 i 0,5 mg/kg masy ciała. Wyniki wykazały, że 2-CdA nie był skuteczny w indukowaniu aberracji chromosomowych. Brak efektu in vivo może być spowodowany ograniczoną ilością dostępnego 2-CdA, ponieważ został on przekazany w rozcieńczonych warunkach. Wykazano genotoksyczne działanie gemcytabiny w komórkach szpiku kostnego myszy przy użyciu systemów testowania mikrojąder i aberracji chromosomowej. Aydemir i Bilaloglu (2003) wykazały, że gemcytabina nie indukuje żadnego istotnego CAs i nie powoduje zmniejszenia MI o 6 godzin w okresie leczenia w dawkach 2,0, 4,0 i 8,0 mg/kg mc., w porównaniu z kontrolą negatywną; natomiast częstość występowania całkowitego CAs była znacząco zwiększona przez gemcytabinę (p < 0, 0001) przez 24-godzinny okres leczenia tymi samymi dawkami.

podsumowując, 2-CdA wykazywał działanie klastogenne w hodowlach ludzkich limfocytów leczonych in vitro w fazie s cyklu komórkowego, ale nie obserwowano znaczącego działania klastogennego w komórkach leczonych w fazach G1 i G2. W teście in vivo na myszach, 2-CdA nie wykazywał żadnego działania klastogennego przy badanych poziomach dawek.

podziękowania

jesteśmy wdzięczni Prof. Dr. A. T. Natarajan, Dr. Elza T. Sakamoto Hojo i Dr. Lusania G. Antunes za cenne uwagi na temat rękopisu i dla Pana Luiza Augusto da Costa Jr., Pana Silvio A. dos Santos i Pani Sueli A. Neves za cenną pomoc techniczną. Badania te wsparły proces CAPES i FAPESP n. 99/10643-7. Komitet etyki badań zatwierdził projekt (proces: CONEP N. 25000.074430/2001-88).

Andreassen PR, Lohez OD and Margolis RL (2003) G2 and spindle assembly checkpoint adaptation, and tetraploidy arrest: Implications for intrinsic and chemically induced genomic niestabilność. Mutat Res 532:245-53.

Aydemir N I Bilaloglu R (2003) Genotoksyczność dwóch leków przeciwnowotworowych, gemcytabiny i topotekanu, w szpiku kostnym myszy in vivo. Mutat Res 537:43-51.

Baltz JK i Montello MJ (1993) Kladrybina do leczenia nowotworów hematologicznych. Clinical Pharmacy 12: 805-813.

Caldecott KW (2004) DNA single-strand breaks and neurodegeneration. DNA Repair (Amst) 3: 875-82.

Carson DA, Wasson DB, Taetle R and Yu a (1983) Specific toxicity of 2-chlorodeoxyadenosine towards resting and proliferating human lymphocytes. Blood 62:737-743.

Degrassi F, de Salvia R, Tanzarella C and Palitti F (1989) Induction of chromosomal aberrations and sce by camptotecin, an inhibitor of mammalian topoisomerase I. Mutat Res 211:125-130.

Evans HJ and Scott D (1964) Influence of DNA synthesis on the production of chromatid aberrations by X-ray and maleic hydrazyde in Vicia faba Genetics 49:17-38.

Ford CE and Hamerton JL (1956) a Colchicine hypotonic citrate squash sequence for mammalian chromosomes. Technol 3: 247-251.

Galmarini CM, Mackey JR i Dumontet C (2001) : Mechanizmy oporności na leki i strategie odwrócenia. Leukemia 15: 875-890.

Gandhi V, Huang P, Chapman AJ, Chen F i Plunkett w (1997) Incorporation of fludarabine and 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine 5 ‘ triphosphates by DNA polymerase alpha: Affinity, interaction and consequences. Clin Cancer Res 3:1347-1355.

analogi Deoksyadenozyny Geninini D, Adachi S, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA i Leoni lm (2000) indukują programowaną śmierć komórki w przewlekłych limfocytowych komórkach białaczkowych uszkadzając DNA i bezpośrednio wpływając na mitochondria. Krew96:3537-3543.

Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E and Koeman JH (1996) Comparative methods of toxicity testing. Food Chem Toxicol 34: 183-92.

Korenberg JR and Freedlender EF (1974) Giemsa technique for the detection of sister chromatid exchanges. Chromosoma 48:355-360.

Laurencet FM, Zulian GB, Guetty-Alberto m, iten PA, Betticher DC i Alberto P (1999) Kladrybina z cyklofosfamidem i prednizonem w leczeniu złośliwych nowotworów limfoproliferacyjnych o niskim stopniu złośliwości. Br J. 79:1215-1219.

Legator MS and Ward Jr JB (1991) Use of in vivo genetic toxicity data for risk assessment. Mutat Res 250:457-465.

Liliemark J i Juliusson G (1994) 2-Chloro-2′-deoksyadenozyna-rozważania kliniczne, biochemiczne i farmakokinetyczne. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 42:7-10.

Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT i Raimondi SC (2000) chromosomy dwuminutowe i amplifikacja c-MYC u dziecka z wtórnym zespołem mielodysplastycznym po leczeniu ostrej białaczki limfoblastycznej. Leukemia 14: 1314-5.

Moore RC and Bender MA (1993) Sekwencja czasowa zdarzeń prowadzących do powstawania aberracji chromosomowych. Environ Mol Mutagen 22:208-213.

Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battipps DM and Hungerford DA (1960) przygotowanie chromosomów leukocytów wyhodowanych z krwi obwodowej. Exp Cell Res 20: 613-616.

Natarajan AT, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez I, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen s and Xiao y (1996) Mechanisms of induction of chromosomal aberrations and their detection by in situ hybridization. Mutat Res 372:247-58.

Perry PE and Wolff s (1974) New Giemsa method for differential staining of sister chromatids. Nature 251:156-158.

Plunkett w, Chubb S, Alexander L i Montgomery ja (1980) Comparison of the toxicity and metabolism of 9-B-D-arabinofuranosyl-2-fluoroadenine and 9-B-D-arabinofuranosyladenine in human lymphoblastoid cells. Cancer Res 40: 2349-55.

Pott-Hoeck C i Hiddemann W (1995) analogi purynowe w leczeniu chłoniaków niskiego stopnia i przewlekłych białaczek limfocytowych. Ann Oncol 6: 421-433.

Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee Af and Shelby m (1987) Mammalian in vivo cytogenetic assays. Analiza aberracji chromosomowych w komórkach szpiku kostnego. Mutat Res 189:157-65.

Robak T (2001) Kladrybina w leczeniu przewlekłej białaczki limfocytowej. Leuk Lymphoma 40: 551-564.

Robak T, Góra-Tybor J, Urbanska H I Krikowski e (1999) Combination scheme of 2-chlorodeoxyadenosine (cladribine), mitoxantron and deksametasone (CMD) in treatment of refractive and recurrent low-grade non-Hodgkin lymphoma. Leuk Lympho 32: 359-363.

Robertsson LE, Chubb S, Meyn RE, Story M, Ford R, Hitelman WN and Plunkett w (1993) Induction of apoptosis cell death in chronic lymphocytic leukemia by 2-chloro-2′-deoxyadenosine and 9-B-D-arabinosyl-2-fluoradenine. Blood 81:143-150.

Schrimer m, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J and Konwalinka G (1997) the safety profile of low-dose cladribine in refractive reumatoidalne zapalenie stawów. Próbny pilot. Scand J Rhematol 26: 376-379.

Sidorova JM and Breeden LL (2003) Precocious G1/s transitions and genomic instability: The origin connection. Mutat Res 532:5-19.

Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M i Verweij J (2001) chemioterapia skojarzona taksanów i antymetabolitów: jej zastosowanie i ograniczenia. Eur J Rak 37:2310-23.

Szafraniec SI, Stachnik KJ i Skierski js (2004) nowe analogi nukleozydów w leczeniu zaburzeń hematologicznych. Acta Pol Pharm 61:223-32.

Tallman MS, Hakimian D, Hogan D i Petersen L (1993) 2-Chlorodeoksyadenozyna w leczeniu białaczki włochatokomórkowej (HCL): wykrywanie minimalnej choroby resztkowej (MRD) przez immunostaining (IS). Prezentacja na 8 Sympozjum Biologii Molekularnej hematopoezy w Bazylei, 9-13 lipca.

Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E i Kaul K (1992) pojedynczy cykl 2-chlorodeoksyadenozyny powoduje całkowitą remisję u większości pacjentów z białaczką włochatokomórkową. Blood 80: 2203-2209.

Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz z i Melamed MR (1980) Effects of ellipticine on cell survival and cell cycle progression in cultured mammalian cells. Cancer Res 40: 2390-2399.

Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, Hählen K, Huismans DR, Zimmermann m, Harbott J, Slater RM, Creutzig U i Veerman AJP (2002) cellular drug resistance in childhood acute myeloid leukemia is related to chromosomal anormals. Blood 100:3352-3360.