cytokeratyny 5/6 i cytokeratyny 8/18 w potrójnie ujemnych nowotworach piersi: clinicopathologic significance in South-Asian population

metody

ogółem z archiwum wydziału patologii wybrano 150 przypadków TNBC. Próbki chirurgiczne obejmowały zmodyfikowaną mastektomię radykalną, mastektomię prostą i szerokie wycięcie miejscowe z rozwarstwieniem wartowniczego węzła chłonnego. Wszyscy pacjenci przeszli operacje w Liaquat National hospital w Karaczi od stycznia 2008 do grudnia 2013 przez okres 6 lat. Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję ds. badań i oceny etycznej instytucji, a wszyscy pacjenci otrzymywali świadomą zgodę w czasie operacji. Pobrano szkiełka barwione hematoksyliną i eozyną oraz bloki parafinowe skrzynek i w razie potrzeby wycięto nowe odcinki. Szkiełka wszystkich przypadków zostały zweryfikowane przez dwóch starszych histopatologów i oceniono cechy patologiczne, takie jak typ histologiczny, stopień guza, stopień T, Stopień N, inwazja limfatyczna, martwica, zwłóknienie, naciek limfocytowy (limfocyty nacierające na nowotwór), obecność składnika insitu, rozprzestrzenianie się pagetoidów i inwazja limfatyczna skóry. Zapis kliniczny wszystkich pacjentów został również zweryfikowany na podstawie zapisów instytucjonalnych w celu oceny wieku pacjenta, radioterapii i chemioterapii w wywiadzie oraz stanu nawrotów. Ponadto wybrano reprezentatywne bloki każdego przypadku i przeprowadzono immunohistochemię ER, PR i Her2neu w celu potwierdzenia potrójnego negatywnego statusu.

ER, PR, Her2neu i KI67 IHC przeprowadzono stosując przeciwciała DAKO jak poniżej, z Envision™ FLEX, high pH DAKO kit zgodnie z protokołem producenta.

1. FLEX monoklonalny królik anty-ludzki receptor estrogenowy Alfa, klon EP1.

2. FLEX monoclonal mouse anty-ludzki klon receptora progesteronu PgR 636.

3. Poliklonalna królicza przeciw ludzkiej onkoproteinie c-erbB-2.

4. FLEX monoclonal mouse anti-human ki67 antigen clone MIB-1.

jądrowe zabarwienie ER i PR w > 1% komórek nowotworowych uznano za dodatnie. W przypadku her2neu przypadki oceniono na 1+, 2+ i 3+ zgodnie z wytycznymi CAP. W przypadku niejednoznacznych przypadków (2+), ryby wykonano przy użyciu zestawu sond Vysion Her2neu zgodnie z protokołami producenta. Wyniki wyrażono jako stosunek sygnałów her2neu do sygnałów CEP17 zgodnie z wytycznymi ASCO / CAP.

odporność Ki67 zapisywano jako zmienne ciągłe oparte na odsetku dodatnich zabarwionych komórek nowotworowych. Ponadto na podstawie wskaźnika Ki67 przypadki zostały podzielone na < 15, 16-24, 25-44 i > 44% kategorii wskaźnika ki67.

CK5/6 IHC przeprowadzono stosując FLEX Monoklonalną Mysz anty-ludzką Cytokeratynę 5/6, klon d5 / 16 B4 metodą DAKO envision zgodnie z protokołem manufacturers protocol. Pośrednie do silnego wybarwienia cytoplazmatycznego i błoniastego w ponad 10% komórek uznano za pozytywne. Słabe lub pośrednie zabarwienie w < 10% uznano za ogniskowe dodatnie, podczas gdy brak zabarwienia uznano za ujemne(dodatkowy plik 1: Rysunek S1).

CK 8/8 IHC przeprowadzono stosując monoklonalną mysz anty-ludzką Cytokeratynę 5/6, klon d5/16 B4, zgodnie z metodą DAKO envision. Pośrednie lub silne zabarwienie cytoplazmatyczne i błoniaste w ponad 50% komórek uznano za pozytywne. Słabe lub pośrednie zabarwienie (cytoplazmatyczne, z utratą reaktywności błony) u 10-50% uznano za ogniskowe dodatnie, podczas gdy brak zabarwienia lub słabe zabarwienie u < 10% uznano za negatywne (dodatkowy plik 1: Rysunek S1).

Stan nawrotów i okres obserwacji oceniano poprzez przegląd dokumentacji medycznej szpitala. Całkowite przeżycie oceniano jako czas od wycięcia chirurgicznego do śmierci lub ostatniej obserwacji, a przeżycie wolne od choroby definiowano jako czas między wycięciem chirurgicznym a miejscowym nawrotem lub odległym przerzutem, zgonem lub ostatnią obserwacją.

pakiet statystyczny dla nauk społecznych (SPSS 21) został wykorzystany do kompilacji i analizy danych. Obliczono średnią i odchylenie standardowe dla zmiennych ilościowych. Częstość i odsetek obliczono dla zmiennych jakościowych. Kwadrat Chi został zastosowany do określenia związku. W celu porównania różnicy średniej między grupami zastosowano test t Studenta lub test Manna Whitneya. Wartość p ≤ 0,05 jako istotna. Krzywe przeżycia zostały wykreślone za pomocą metody Kaplana-Meiera, a znaczenie różnicy między krzywymi przeżycia określono za pomocą współczynnika logarytmicznego. Wartość P ≤ 0.05 został uznany za znaczący.

wyniki

średni wiek pacjentów biorących udział w badaniu wynosił 48, 9 lat, a najczęściej 31-50 lat. Większość pacjentów prezentowała się na etapie T2 z wysokim średnim wskaźnikiem ki67 tj. 46,9%. 42,7% przypadków miało przerzuty węzłowe. Chociaż 84% przypadków dotyczyło konwencjonalnego inwazyjnego raka przewodowego, NST, jednak znaczna część przypadków dotyczyła histologii metaplastycznej (9,3%). Większość przypadków była wysokiego stopnia (86,7% stopnia III). Większość guzów wykazuje nacieki limfocytowe i martwicę. Większość guzów nie ma składnika insitu (61%). Nawrót lokalny lub późny przerzut odległy odnotowano w 17,8% przypadków(Tabela 1).

dodatnia (> 10%) ekspresja CK5/6 wystąpiła u 8% (12 przypadków) TNBC, podczas gdy 2, 4% (4 przypadki) wykazywało ogniskowy dodatni wynik (< 10%), A 89, 3% (134) było ujemnych w przypadku CK5/6. Całkowitą utratę ekspresji CK8/18 obserwowano u 4,7% (7 przypadków), podczas gdy 32,7% (49 przypadków) wykazało ogniskową utratę CK8/18, a 62,7% (94 przypadki) wykazało nienaruszoną normalną ekspresję CK8/18. Nie stwierdzono istotnego związku CK5 / 6 i CK8 / 18 z różnymi parametrami klinikopatologicznymi (tabele 2 i 3). Podobnie nie stwierdzono istotnego związku CK 5/6 i CK8 / 18 ze statusem nawrotu choroby (dodatkowy plik 2: rycina S2).

dyskusja

w niniejszym badaniu oceniliśmy ekspresję jednego markera podstawowego (CK5/6) i jednego markera luminalnego (CK8/18) w TNBC w naszej populacji i stwierdziliśmy, że; 8 i 2,7% TNBC wykazywało dodatnią i ogniskową pozytywną ekspresję CK5/6 odpowiednio oraz 4,7 i 32.U 7% TNBC stwierdzono całkowitą utratę i ogniskową ekspresji CK 8/18. We wszystkich tych przypadkach, w których stwierdzono ogniskową utratę CK8/18, stwierdzono utratę reaktywności błony, podczas gdy barwienie cytoplazmatyczne zostało zachowane w kilku komórkach. Jednak nie zaobserwowano istotnego związku pomiędzy tymi nieprawidłowymi wzorcami ekspresji cytokeratyn z różnymi kliniczno-patologicznymi i prognostycznymi parametrami TNBC w naszej populacji. Rak piersi jest jednym z najczęstszych nowotworów złośliwych w populacji Azji Południowej, zwłaszcza w młodym wieku .

profilowanie ekspresji genów definiuje podstawowe nowotwory piersi jako te wykazujące podstawowe klastry genów, które obejmują EGFR, podstawową cytokeratynę 5/6, c–kit, klaster proliferacji i niską ekspresję genów związanych z receptorem Her2neu i hormonem . Jednak podstawowy rak piersi nie jest pojedynczym podmiotem i obejmuje kilka podtypów, w tym dwa podstawowe podobne podtypy (BL1 i BL2), mezenchymalne, mezenchymalne macierzyste, immunomodulujące i luminalne podtypy androgenów . Oprócz tego zdefiniowano także podtypy interferon bogaty i claudin-low . ASCO/CAP nie zaleca podtypowania podstawowych nowotworów piersi. Ekspresja CK 5/6 waha się od 24 do 72% W TNBC, jak odnotowano we wcześniejszych badaniach . Inni badacze zaproponowali również prognostyczne znaczenie CK 5/6 w nowotworach piersi z przerzutami do węzłów chłonnych . Nielson et al. sugerowano, że CK5/6 dodatni rak piersi mają gorsze rokowanie niezależnie od stopnia guza, T-Stadium i hormonalnej / Her2neu status . Podobnie w innym badaniu zaproponowano, że CK5/6 jest markerem krótszego przeżycia wolnego od choroby, niezależnie od innych czynników prognostycznych raka piersi . Inanc et al. zgłoszono 50.5% ekspresji CK5/6 z dodatnią korelacją CK5 / 6 TNBC z przerzutami węzłowymi i wielkością guza. Jednak w przeciwieństwie do tych badań stwierdzono niską ekspresję CK5/6 w TNBC w naszej badanej populacji, co może reprezentować inny profil genomowy TNBC w naszej populacji, co należy zbadać w dalszych badaniach. Zaproponowano prognostyczną rolę CK5 / 6 w innych nowotworach organizmu .

CK8 / 18 jest cytokeratyną luminalną wyrażoną głównie w nabłonku piersi w błoniastym i cytoplazmatycznym wzorze. Cimpean et al. zdefiniowano te różne wzory CK8 / 18 w raku piersi; rozproszone cytoplazmatyczne, błoniaste i połączone cytoplazmatyczne i błoniaste .Niektórzy badacze zaproponowali, że utrata ekspresji CK8/18/niskiej ekspresji CK8/18 wiąże się z gorszym rokowaniem i wysokim ryzykiem przerzutów . Nie stwierdzono jednak żadnego prognostycznego znaczenia utraty ekspresji CK8/18 z różnymi czynnikami prognostycznymi i nawrotami w TNBC.

odkryliśmy, że 32,7% TNBC wykazuje ogniskową utratę ekspresji CK8/18. We wszystkich tych przypadkach stwierdzono utratę reaktywności błoniastej CK8 / 18, podczas gdy barwienie cytoplazmatyczne zostało zachowane w kilku komórkach. Aiad i in. w badaniu z udziałem 70 przypadków raka piersi stwierdzono nieprawidłową ekspresję CK8 /18 (cytoplazmatyczny) w 70% egipskiego raka piersi, co sugeruje wiele heterogeniczności w cytokeratyny ekspresji raka piersi w różnych częściach świata .