Wolne rodniki oczyszczające Cnidium officinale Makino i Ligusticum chuanxiong Hort. ekstrakty metanolowe | Jiotower

wyniki i dyskusja

kilka patologicznych zdarzeń, takich jak proces zapalny, choroba wieńcowa i zjawiska starzenia się, są związane z generowaniem ROS. Tak więc w tym badaniu wykazaliśmy, że ekstrakty C. officinale i L. chuanxiong mają również właściwości przeciwutleniające, ponieważ były w stanie chronić komórki przed uszkodzeniem oksydacyjnym, a także hamować wytwarzanie ROS.

w przypadku testu TEAC, w tabeli 1 przedstawiono zdolność Przeciwrodnikową C. officinale i L. chuanxiong w układzie wodnym, mierzoną przez oznaczanie rodników ABTS. Test ABTS został użyty do pomiaru całkowitej aktywności przeciwutleniającej w materiałach roślinnych. Stosowany przez Rice-Evansa i Millera, TEAC odzwierciedla względną zdolność antyoksydantów oddających wodór lub elektrony do usuwania rodnikowego kationu ABTS w porównaniu z Troloxem. W tym badaniu C. officinale i L. chuanxiong w zakresie 0-150 µg/ml wykazywał aktywność przeciwrodnikową, a aktywność przeciwrodnikową tych próbek zwiększała się wraz ze wzrostem stężenia ekstraktów, co wskazuje, że C. officinale i L. chuanxiong wykazywały aktywność zmiatającą wolnych rodników. Jak widać w tabeli 1, zdolność usuwania C. officinale i L. chuanxiong na rodnikowym kationie ABTS porównano z zdolnością kwasu askorbinowego. Ponadto C. officinale wykazywał wyraźny wpływ zmiatający na rodniki kationowe ABTS w porównaniu ze standardowym kwasem askorbinowym oznaczonym za pomocą TEAC.

ponadto w tabeli 1 przedstawiono ORAC próbek. Wysoce fluorescencyjne białko, beta-fikoerytryna (PE), pochodzące z wielu gatunków czerwonych alg, zostało użyte jako cel uszkodzenia wolnych rodników. Rodniki peroksylowe generowane przez termiczny rozkład AAPH tłumią fluorescencję fikoerytryny, podczas gdy dodanie przeciwutleniacza, który szybko reaguje z rodnikami peroksylowymi, hamuje utratę intensywności fluorescencji i to hamowanie jest proporcjonalne do aktywności przeciwutleniacza. Wyniki końcowe można obliczyć na podstawie różnic w obszarach pod krzywymi rozpadu fikoerytryny między ślepą próbą a próbką i są wyrażone w odpowiednikach Troloxu. W tym badaniu wyniki wykazały, że C. officinale i L. chuanxiong wykazują zdolność przeciwutleniającą o podobnym profilu. Ponadto test ORAC wykazał wyraźne wzmocnienie zawartości przeciwutleniaczy w ekstrakcie C. officinale w porównaniu z kwasem askorbinowym jako standard.

stabilny model rodników DPPH jest szeroko stosowaną, stosunkowo szybką metodą oceny aktywności usuwania wolnych rodników. Uważa się, że wpływ roślinnych przeciwutleniaczy na usuwanie rodników DPPH wynika z ich zdolności oddawania wodoru. Postępuje spadek absorbancji rodnika DPPH spowodowany przez przeciwutleniacze z powodu reakcji między cząsteczkami przeciwutleniacza a rodnikiem, co skutkuje usuwaniem rodnika przez oddawanie wodoru. Tabela 1 ilustruje znaczny spadek stężenia rodników DPPH ze względu na zdolność usuwania zarówno ekstraktów C. officinale, jak i L. chuanxiong i wzorca. Aktywność usuwania wolnych rodników również wzrosła wraz ze wzrostem stężenia. Wyniki te wykazały, że oba ekstrakty mają zauważalny wpływ na oczyszczanie wolnych rodników. Ekstrakt metanolu z L. chuanxiong wykazał silniejszą aktywność usuwania DPPH niż ekstrakt metanolu C. officinale w porównaniu ze standardem. Standardowo użyliśmy kwasu askorbinowego.

ponadto może być ukierunkowana na zdolność do usuwania określonych rodników. Ponieważ różne ROS mają różne mechanizmy reakcji, aby całkowicie określić aktywność przeciwutleniającą wobec szerokiego zakresu ROS, należy przeprowadzić bardziej kompleksowy zestaw testów. Anion ponadtlenkowy (O2* -) Rodnik jest ważnym czynnikiem w układach biologicznych. W celu ustalenia, czy hamowanie redukcji NBT było spowodowane aktywnością zmiatacza ponadtlenków, zastosowano nieenzymatyczny układ generowania ponadtlenku. W układzie PMS-NADH-NBT anion ponadtlenkowy, pochodzący z rozpuszczonego tlenu z reakcji sprzęgania PMS-NADH, redukuje NBT. Spadek absorbancji przy 560 nm z przeciwutleniaczami wskazuje na zużycie anionów ponadtlenkowych w mieszaninie reakcyjnej. Tabela 2 pokazuje procentowe hamowanie generowania rodników ponadtlenkowych o 0-150 µg/ml ekstraktów metanolu C. officinale i L. chuanxiong w porównaniu z kwasem askorbinowym. C. officinale i ekstrakty metanolu L. chuanxiong wykazały zależne od dawki hamowanie rodników ponadtlenkowych. Zarówno ekstrakty C. officinale i L. chuanxiong mają silną aktywność usuwania rodników ponadtlenkowych (IC50 = 96,30 i 93,85 µg/ml). Biorąc pod uwagę uzyskane wyniki, można się spodziewać, że ekstrakty metanolu z C. officinale i L. chuanxiong mają aktywność przeciwutleniającą, pokazaną tutaj przez oczyszczanie rodnika ponadtlenkowego. Wartości IC50 wszystkich tych ekstraktów były większe niż wartości kwasu askorbinowego, w którym IC50 uzyskano przy stężeniu 8,76 µg.

usuwanie H2O2 przez oba ekstrakty można przypisać ich fenolom, które mogą oddawać elektrony do H2O2, neutralizując go w ten sposób do wody. Zdolność usuwania H2O2 między dwoma ekstraktami może być przypisana ich zdolnościom oddawania elektronów. Zdolność obu ekstraktów do skutecznego usuwania H2O2 przedstawiono w tabeli 2, w której porównuje się ją z kwasem askorbinowym jako standard. Ekstrakty były zdolne do usuwania H2O2 w sposób zależny od stężenia. C. officinale i L. ekstrakty chuanxiong (0-150 µg/ml) wykazywały IC50 odpowiednio 136,28 i 136,32 µg/ml, podczas gdy kwas askorbinowy wykazywał 8,05 µg/ml. Korelacja pomiędzy wartościami C. officinale i L. chuanxiong była statystycznie nieistotna. Chociaż sam H2O2 nie jest bardzo reaktywny, może czasami powodować cytotoksyczność, dając początek rodnikom hydroksylowym w komórce. Tak więc usuwanie H2O2 jest bardzo ważne w systemach żywnościowych.

C. officinale i L. ekstrakty z metanolu chuanxiong oceniano również pod kątem ich zdolności do usuwania rodników hydroksylowych za pomocą testu degradacji deoksyrybozy. W tym badaniu wyniki wykazały, że wszystkie próbki były w stanie hamować degradację deoksyrybozy (0-150 µg/ml), o podobnym profilu. Badania biochemiczne wykazały, że C. officinale i L. chuanxiong powodowały zależne od stężenia hamowanie degradacji deoksyrybozy. Na poziomie wartości IC50 C. officinale (119,44 µg/ml) i L. chuanxiong (113,11 µg/ml) wykazywały taką samą siłę działania . Całkowite zdolności usuwania rodników OH każdego ekstraktu porównano z kwasem askorbinowym.

ekstrakty roślinne mierzono i porównywano pod kątem ich aktywności usuwania wolnych rodników przeciwko rodnikom tlenku azotu. Aktywność usuwania no· ekstraktów metanolu C. officinale i L. chuanxiong zbadano przy użyciu SNP jako dawcy NO*. NO uwolniony z SNP reaguje z tlenem w celu wytworzenia azotynów. Żaden zmiatacz nie konkuruje z tlenem w reakcji z NO * uwolnionym z roztworu SNP w PBS. W tym badaniu wyciągi z C. officinale i L. chuanxiong nie wykazywał zdolności usuwania*, chociaż odnotowano pewne różnice. Nie * aktywność oczyszczająca C. officinale była bardziej znacząca niż L. chuanxiong. Hamowanie to może być również wynikiem bezpośredniego usuwania NO· przez ekstrakty. C. officinale miał największą aktywność, aby ugasić żadnych rodników. Wartości IC50 wynosiły odpowiednio 57,25 i 76,50 µg/ml Dla C. officinale i L. chuanxiong.

oszacowano chelatację jonów żelazawych przez ekstrakty C. officinale i L. chuanxiong,w których ferrozyna ilościowo tworzy kompleksy z Fe2+. W obecności czynników chelatujących tworzenie się tego kompleksu jest zakłócane, utrudniając w ten sposób tworzenie się czerwonego koloru nadawanego przez kompleks. Pomiar tej zmiany koloru pozwala zatem na oszacowanie aktywności chelatującej współistniejącego chelatora. W tym teście zarówno ekstrakty, jak i Standardowy związek przeciwutleniający zakłócały tworzenie kompleksu żelazo–ferrozyna, sugerując, że mają one aktywność chelatującą, wychwytując jon żelazawy, zanim będzie mógł utworzyć kompleks z ferrozyną. Jak pokazano w tabeli 2, tworzenie kompleksu Fe2+–ferrozyna nie jest kompletne w obecności ekstraktów metanolu C. officinale i L. chuanxiong, co wskazuje, że oba ekstrakty chelatują żelazo. Absorbancja kompleksu Fe2+ -ferrozyna liniowo zmniejszała się w sposób zależny od dawki (0-150 µg / ml). Różnica między obu ekstraktów C. officinale i L. chuanxiong, a kontrola była statystycznie istotna. Zdolności chelatowania metali ekstraktów metanolowych C. officinale i L. chuanxiong oraz kwasu askorbinowego (wszystkie w IC50 µg/ml) wynosiły 138,43, 17,45 i 43.24, co okazało się istotną różnicą między ekstraktami a kontrolami.

w celu określenia wpływu C. officinale i L. chuanxiong na żywotność komórek, komórki N2A wystawiono na działanie C. officinale i L. chuanxiong (50-500 µg/ml) przez czas inkubacji wynoszący 1 godzinę. na fig.1, Test MTT po 1 godzinie inkubacji z C. officinale nie wykazuje żadnej znaczącej różnicy w żywotności leczonych kultur komórkowych N2A w porównaniu z grupą kontrolną. W teście MTT po 1 h z L. chuanxiong zaobserwowano znaczny wzrost żywotności w L. chuanxiong 500 µg/ml traktowane komórki N2A w porównaniu z kontrolą. Jak pokazano na fig. 2, nie oznaczano po 1 h inkubacji w obecności C. officinale i L. chuanxiong (50-500 µg/ml). Leczenie L. chuanxiong nie zmniejszyło znacząco uwalniania NO w porównaniu z grupą kontrolną, ale 500 µg / ml C. officinale znacznie zmniejszyło uwalnianie NO. Z tego wyniku można wywnioskować, że metanolowe ekstrakty C. officinale i L. chuanxiong w zastosowanych dawkach nie mają działania toksycznego.

wpływ ekstraktów metanolowych C. officinale i L. chuanxiong na żywotność komórek w komórkach N2A. Wartości są średnią ± SD z trzech pomiarów. *P < 0,05 w porównaniu z nieleczoną normalną (ANOVA / Tukey)

wpływ C. officinale i L. chuanxiong metanolowe ekstrakty na uwalnianie tlenku azotu w komórkach N2A. Wartości są średnią ± SD z trzech pomiarów. *P < 0,05 w porównaniu do nieleczonej normy. (ANOVA / Tukey)