Skuteczność kliniczna testu Roche Cobas 4800 HPV | Jiotower

TEXT

wirus brodawczaka ludzkiego (HPV) jest jednym z najczęstszych wirusów przenoszonych drogą płciową na całym świecie i głównym czynnikiem rakotwórczym, powodując prawie 60 000 nowych przypadków raka rocznie w Europie (1) i prowadząc do rozwoju raka szyjki macicy u kobiet. HPV16 i HPV18 są najbardziej rakotwórcze (2, 3), ponieważ około 70% wszystkich nowotworów szyjki macicy jest zakażonych HPV16 lub hpv18 (4). Prawie 30% przypadków raka szyjki macicy jest pomijanych przez wstępne badania cytologiczne szyjki macicy (5), dlatego dokładne i obiektywne testy na raka szyjki macicy związanego z HPV, które wykorzystują bardziej wrażliwe techniki molekularne, są niezbędne do zapewnienia skutecznej profilaktyki i leczenia w celu zmniejszenia przyszłego ryzyka i częstości występowania raka szyjki macicy.

Roche Cobas 4800 HPV test (Cobas) jest nowatorską metodą molekularną opartą na PCR w czasie rzeczywistym (RT-PCR) (6, 7), z w pełni zautomatyzowanym systemem umożliwiającym szybkie i wydajne przetwarzanie próbek. Cobas wykrywa HPV16, HPV18, 12 innych HPV wysokiego ryzyka (hpv31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, i -68, jako wynik zbiorczy), a kontrola β-globiny niezależnie w tym samym PCR. Głównym celem naszych badań była ocena technicznej i klinicznej charakterystyki działania Cobas. Próbki szyjki macicy od 6056 kobiet skierowanych do zakładu patologii w Icahn School of Medicine na górze Synaj w celu rutynowego badania zmian szyjki macicy w okresie od listopada 2011 do lutego 2012 zebrano w płynnym ośrodku cytologicznym (konserwant; Hologic, Marlborough, MA) i przechowywać w temperaturze 4°C do czasu użycia.

sto osiemdziesiąt próbek zbadano pod kątem genotypów hrHPV zarówno w teście HPV Roche Cobas 4800, jak i w teście DNA Hrhpv Digene Hybrid Capture 2 (HC2) (Tabela 1), przy czym wszelkie rozbieżności zostały rozwiązane za pomocą testu genotypowania HPV Linear Array (LA) (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Zgodnie z testem chi-kwadrat Pearsona stwierdzono istotną różnicę w liczbie próbek pozytywnych i negatywnych zidentyfikowanych w dwóch testach HPV(P < 0,001). Jednak zgodność między tymi dwoma testami była statystycznie silna, z poziomem porozumienia wynoszącym 88,33% (P = 0,0218) i współczynnikiem kappa Cohena wynoszącym 0,767 (95% przedział ufności , 0,674 do 0,860; P < 0,001), gdzie 95% przedziałów ufności wartości kappa wyprowadzono z rozkładu dwumianowego.

w próbkach niezgodnych test la HPV wykrył genotypy HPV niskiego ryzyka (lrHPV) w 50% (2/4) próbek, które miały dodatni wynik HC2 i Cobas ujemny i w 13,33% (2/15) próbek, które miały HC2 ujemny i Cobas dodatni. HPV53 znaleziono w dwóch próbkach z dodatnim HC2 i ujemnym Cobas, co sugeruje, że sondy w zestawie Digene zareagowały krzyżowo z tym genotypem HPV. Ta obserwacja nie jest zaskakująca, ponieważ wcześniej obserwowano reaktywność krzyżową testu HC2 z genotypami lrHPV, w szczególności HPV53 (9). Konsekwencją reaktywności krzyżowej genotypu lrhpv w teście HPV jest zwiększona liczba wyników fałszywie dodatnich. Może to prowadzić do nadmiernego dochodzenia i nadmiernego leczenia poprzez badania kontrolne kobiet, które posiadają tylko genotypy lrHPV i są faktycznie na niskim ryzyku zachorowania na raka szyjki macicy. W dwóch próbkach HC2-ujemnych / Cobas-dodatnich, HPV62 i HPV89 (CP6108) wykryto w obu próbkach, A HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 i HPV84 wykryto w jednej z próbek, co sugeruje, że mieszane zakażenie HPV prowadzi do fałszywie dodatnich wyników w teście Cobas HPV.

test LA HPV nie wykrył genotypów hrHPV w żadnej z próbek, które miały dodatni wynik HC2 i ujemny wynik Cobas (0/4) oraz w 80% (12/15) próbek, które miały ujemny wynik HC2 i dodatni wynik Cobas. Test HC2 nie wykrył hrHPV w tych próbkach, co wskazuje, że test HC2 ominął więcej genotypów hrHPV niż test Cobas, co oznacza, że Cobas jest potencjalnie bardziej skutecznym testem przesiewowym ze względu na lepszą czułość i dokładność. Natomiast HPV nie zostało wykryte w badaniu LA HPV w 6,67% (1/15) próbek HC2-ujemnych/Cobas-dodatnich. Ogólnie jednak różnica w wykrywaniu hrHPV pomiędzy testami HC2 i Cobas była statystycznie nieistotna (χ2 = 2,901, P = 0,0885).

następnie wykorzystano sześćdziesiąt osiem próbek do określenia odtwarzalności testu Cobas HPV. Odtwarzalność między testami wstępnymi i powtórnymi, obliczona za pomocą standardowej tabeli awaryjności 2 na 2, wynosiła 93,55%; współczynnik kappa między wynikami pierwszej i drugiej rundy testu Cobas wynosił 0,869 (95% CI, 0,744 do 0,993; P < 0,001). Siła tej umowy jest uważana za bardzo dobrą, co sugeruje, że test jest wysoce wiarygodny.

stu osiemdziesięciu siedmiu próbek poddano testowi Cobas HPV w celu określenia różnicy w wykrywaniu HPV między próbkami prealiquoted i postaliquoted. Tylko 7 próbek było niedopasowanych, przy wskaźniku 3,74% (95% CI, 1,02% do 6,46%). Analiza statystyczna wykazała, że różnica między próbkami prealiquoted i postaliquoted nie była znacząca (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Ponieważ przed i po zakończeniu badania cytologicznego (prealiquot i postaliquot) nie obserwowano zwiększenia częstości występowania HPV-dodatniego, zanieczyszczenie krzyżowe próbek podczas badania cytologicznego jest niezwykle rzadkie. Badanie HPV po cytologii może znacznie poprawić przepływ pracy i zmniejszyć niepotrzebne alikwoty, gdy odruchowy test HPV dla nieprawidłowej cytologii jest przeznaczony.

ostatecznie, 5621 próbek poddano testowi Cobas HPV w celu określenia wpływu wiru i wirowania (przed testem Cobas) na wskaźniki awaryjności. Wśród 1380 próbek przetworzonych przez vortexing wskaźnik awaryjności wynosił 4.57% (95% CI, 3, 65% do 5, 91%). Natomiast wśród 4241 próbek przetwarzanych przez wirowanie wskaźnik niepowodzenia wynosił 1,16% (95% CI, 0,84% do 1,48%). Badanie chi-square przeprowadzone przez Pearsona wykazało, że różnice w współczynnikach awaryjności między próbkami wirowymi i delikatnie wirowanymi były niezwykle znaczące (χ2 = 59,983, P < 0,0001), przy czym zaleca się delikatne wirowanie w celu zmniejszenia wskaźnika awaryjności Cobas.

podsumowując, Test Cobas 4800 HPV wykazał większy stopień czułości i swoistości w wykrywaniu genotypów hrHPV niż test Digene HC2 hrHPV. Test Cobas miał również niższy poziom reaktywności krzyżowej z genotypami lrHPV niż test HC2, o czym świadczy mniejsza liczba przypadków fałszywie dodatnich. Jednak różnica w ogólnej wydajności między tymi dwoma testami nie jest statystycznie istotna.