Radikalfänger-Aktivitäten von Cnidium officinale Makino und Ligusticum chuanxiong Hort. methanolische Extrakte | Jiotower

ERGEBNISSE UND DISKUSSION

Mehrere pathologische Ereignisse, wie der Entzündungsprozess, die koronare arterielle Erkrankung und Alterungsphänomene, sind mit der Erzeugung von ROS verbunden. So haben wir in dieser Studie gezeigt, dass Extrakte von C. officinale und L. chuanxiong auch antioxidative Eigenschaften besitzen, da sie die Zellen vor oxidativen Schäden schützen und auch die Bildung von ROS hemmen konnten.

Für den TEAC-Assay zeigt Tabelle 1 die antiradikale Kapazität von C. officinale und L. chuanxiong in einem wässrigen System, gemessen durch Assay der ABTS-Radikale. Der ABTS-Assay wurde verwendet, um die gesamte antioxidative Aktivität in Pflanzenmaterialien zu messen. Wie von Rice-Evans und Miller verwendet, spiegelt TEAC die relative Fähigkeit von Wasserstoff- oder elektronenspendenden Antioxidantien wider, das ABTS-Radikalkation im Vergleich zu dem von Trolox abzufangen. In dieser Studie, C. officinale und L. chuanxiong im Bereich von 0-150 µg / ml zeigte eine antiradikale Aktivität, und die antiradikale Aktivität dieser Proben nahm mit zunehmender Konzentration der Extrakte zu, was darauf hinweist, dass C. officinale und L. chuanxiong eine Abfangaktivität von freien Radikalen zeigten. Wie in Tabelle 1 zu sehen ist, wurde die Spülfähigkeit von C. officinale und L. chuanxiong an ABTS-Radikalkation mit der von Ascorbinsäure verglichen. Darüber hinaus zeigte C. officinale eine deutliche Abfangwirkung auf ABTS-Kationenradikale im Vergleich zu dem durch TEAC bestimmten Standard Ascorbinsäure.

Auch Tabelle 1 zeigt die ORAC von Proben. Das hoch fluoreszierende Protein Beta-Phycoerythrin (PE), das aus zahlreichen Rotalgenarten stammt, wurde als Ziel für Schäden durch freie Radikale verwendet. Peroxylradikale, die durch die thermische Zersetzung eines Katalysators erzeugt werden, löschen die Fluoreszenz von Phycoerythrin, während die Zugabe eines Antioxidans, das schnell mit Peroxylradikalen reagiert, den Verlust der Fluoreszenzintensität hemmt und diese Hemmung proportional zur antioxidativen Aktivität ist. Die Endergebnisse können unter Verwendung der Unterschiede in den Bereichen unter den Phycoerythrin-Zerfallskurven zwischen dem Rohling und einer Probe berechnet werden und werden in Trolox-Äquivalenten ausgedrückt. In dieser Studie zeigten die Ergebnisse, dass C. officinale und L. chuanxiong eine antioxidative Kapazität mit einem ähnlichen Profil aufweisen. Darüber hinaus zeigte der ORAC-Assay eine deutliche Steigerung des Gehalts an Antioxidantien im C. officinale-Extrakt im Vergleich zur standardmäßigen Ascorbinsäure.

Das stabile DPPH-Radikalmodell ist eine weit verbreitete, relativ schnelle Methode zur Bewertung der Radikalfängeraktivität. Es wird angenommen, dass die Wirkung von pflanzlichen Antioxidantien auf DPPH-Radikalfänger auf ihre Wasserstoffspendefähigkeit zurückzuführen ist. Die Abnahme der Absorption von DPPH-Radikalen, die durch Antioxidantien aufgrund der Reaktion zwischen Antioxidansmolekülen und Radikalen verursacht wird, schreitet voran, was zum Auffangen des Radikals durch Wasserstoffspende führt. Tabelle 1 zeigt eine signifikante Abnahme der Konzentration von DPPH-Radikalen aufgrund der Spülfähigkeit der beiden C. officinale und L. chuanxiong Extrakte und Standard. Die Radikalfänger-Aktivität nahm ebenfalls mit zunehmender Konzentration zu. Diese Ergebnisse zeigten, dass beide Extrakte eine spürbare Wirkung auf das Abfangen freier Radikale haben. Der Methanolextrakt von L. chuanxiong zeigte im Vergleich zum Standard eine stärkere DPPH-Spülaktivität als der C. officinale-Methanolextrakt. Wir haben Ascorbinsäure als Standard verwendet.

Darüber hinaus kann die Fähigkeit, bestimmte Radikale abzufangen, gezielt sein. Da verschiedene ROS unterschiedliche Reaktionsmechanismen haben, um die antioxidative Aktivität gegen eine Vielzahl von ROS vollständig zu bestimmen, muss ein umfassenderer Satz von Assays durchgeführt werden. Superoxid-Anion (O2 · –) Radikal ist ein wichtiger Faktor in biologischen Systemen. Um festzustellen, ob die Hemmung der NBT-Reduktion auf die Superoxid-Scavenger-Aktivität zurückzuführen ist, wurde ein nicht-enzymatisches System der Superoxid-Erzeugung verwendet. Im PMS-NADH-NBT-System reduziert das Superoxidanion, das aus gelöstem Sauerstoff aus der Kupplungsreaktion von PMS-NADH stammt, NBT. Die Abnahme der Extinktion bei 560 nm mit Antioxidantien zeigt den Verbrauch von Superoxidanion in der Reaktionsmischung an. Tabelle 2 zeigt die prozentuale Hemmung der Erzeugung von Superoxidradikalen durch 0-150 µg / ml Methanolextrakte von C. officinale und L. chuanxiong im Vergleich zu Ascorbinsäure. C. officinale und L. chuanxiong Methanol Extrakte zeigten eine dosisabhängige Hemmung von Superoxidradikalen. Sowohl die Extrakte von C. officinale als auch von L. chuanxiong haben eine starke Superoxid-Radikalfänger-Aktivität (IC50 = 96,30 und 93,85 µg/ml). In Anbetracht der erhaltenen Ergebnisse ist zu erwarten, dass die Methanolextrakte von C. officinale und L. chuanxiong eine antioxidative Aktivität aufweisen, die hier durch das Abfangen von Superoxidradikalen gezeigt wird. IC50-Werte aller dieser Extrakte waren größer als die von Ascorbinsäure, in der IC50 bei einer Konzentration von 8,76 µg erreicht wurde.

Das Auffangen von H2O2 durch beide Extrakte kann auf ihre Phenole zurückgeführt werden, die Elektronen an H2O2 abgeben und es so zu Wasser neutralisieren können. Die H2O2-Auffangkapazitäten zwischen den beiden Extrakten können auf ihre Elektronenspendefähigkeiten zurückgeführt werden. Die Fähigkeit der beiden Extrakte, H2O2 effektiv abzufangen, ist in Tabelle 2 dargestellt, in der sie mit der von Ascorbinsäure als Standard verglichen wird. Die Extrakte waren in der Lage, H2O2 konzentrationsabhängig abzufangen. C. officinale und L. chuanxiong-Extrakte (0-150 µg / ml) zeigten IC50 von 136,28 bzw. 136,32 µg / ml, während Ascorbinsäure 8,05 µg / ml zeigte. Die Korrelation zwischen den Werten von C. officinale und L. chuanxiong war statistisch nicht signifikant. Obwohl H2O2 selbst nicht sehr reaktiv ist, kann es manchmal Zytotoxizität verursachen, indem Hydroxylradikale in der Zelle entstehen. Daher ist die Entfernung von H2O2 in allen Lebensmittelsystemen sehr wichtig.

Die C. officinale und L. chuanxiong-Methanolextrakte wurden auch auf ihre Fähigkeit untersucht, Hydroxylradikale unter Verwendung des Desoxyribose-Abbautests abzufangen. In dieser Studie zeigten die Ergebnisse, dass alle Proben in der Lage waren, den Desoxyribose-Abbau (0-150 µg / ml) mit einem ähnlichen Profil zu hemmen. Die biochemischen Untersuchungen ergaben, dass C. officinale und L. chuanxiong eine konzentrationsabhängige Hemmung des Desoxyribose-Abbaus bewirkten. Auf dem IC50-Wertniveau zeigten C. officinale (119,44 µg / ml) und L. chuanxiong (113,11 µg / ml) die gleiche Wirksamkeit . Die gesamten OH-Radikalfänger-Kapazitäten jedes Extrakts wurden mit denen von Ascorbinsäure verglichen.

Pflanzenextrakte wurden gemessen und auf ihre Radikalfängeraktivitäten gegen Stickoxidradikale verglichen. Die NO·-scavenging-Aktivität von C. officinale und L. chuanxiong Methanol-Extrakten wurde mit SNP als NO·-Donor untersucht. Aus SNP freigesetztes NO reagiert mit Sauerstoff zu Nitrit. NO Scavenger konkurriert mit Sauerstoff bei der Reaktion mit NO *, das aus SNP-Lösung in PBS freigesetzt wird. In dieser Studie wurden Auszüge aus C. officinale und L. chuanxiong zeigte KEINE * Spülkapazität , obwohl einige Unterschiede festgestellt wurden. Die NO*-scavenging-Aktivität von C. officinale war signifikanter als die von L. chuanxiong. Diese Hemmung kann auch eine Folge des direkten Abfangens von NO· durch Extrakte sein. C. officinale hatte die größte Aktivität, um KEIN Radikal zu löschen. Die IC50-Werte betrugen 57,25 bzw. 76,50 µg/ml für C. officinale und L. chuanxiong.

Die Chelation von Eisenionen durch C. officinale- und L. chuanxiong-Extrakte wurde geschätzt, wobei Ferrozin quantitativ Komplexe mit Fe2 + bildet. In Gegenwart von Chelatbildnern wird die Bildung dieses Komplexes gestört, wodurch auch die Bildung der durch den Komplex verliehenen roten Farbe behindert wird. Die Messung dieser Farbänderung erlaubt daher die Abschätzung der chelatisierenden Aktivität des koexistierenden Chelators. In diesem Test störten sowohl die Extrakte als auch die Standard–Antioxidans-Verbindung die Bildung des Eisen-Ferrozin-Komplexes, was darauf hindeutet, dass sie chelatisierende Aktivität aufweisen und das Eisenion einfangen, bevor es einen Komplex mit Ferrozin bilden kann. Wie in Tabelle 2 gezeigt, ist die Bildung des Fe2 + -Ferrozinkomplexes in Gegenwart der Methanolextrakte von C. officinale und L. chuanxiong nicht vollständig, was darauf hinweist, dass beide Extrakte das Eisen chelatisieren. Die Absorption des Fe2+ -Ferrozinkomplexes nahm dosisabhängig linear ab (0-150 µg/ml). Der Unterschied zwischen den Extrakten von C. officinale und L. chuanxiong und der Kontrolle war statistisch signifikant. Die Metallchelatierungskapazitäten von Methanolextrakten von C. officinale und L. chuanxiong und Ascorbinsäure (alle bei IC50 µg / ml) betrugen 138,43, 17,45 und 43.24, was sich als signifikanter Unterschied zwischen den Extrakten und den Kontrollen erwies.

Um die Auswirkungen von C. officinale und L. chuanxiong auf die Zellviabilität zu bestimmen, wurden die N2a-Zellen C. officinale und L. chuanxiong (50-500 µg / ml) für eine Inkubationszeit von 1 h ausgesetzt. In Abbildung 1 zeigt der MTT-Test nach 1 h Inkubation mit C. officinale keinen signifikanten Viabilitätsunterschied in behandelten N2a-Zellkulturen im Vergleich zur Kontrolle. Durch MTT-Test nach 1 h mit L. chuanxiong wurde eine signifikante Erhöhung der Lebensfähigkeit in L beobachtet. chuanxiong 500 µg/ml behandelten N2a-Zellen im Vergleich zur Kontrolle. Wie in Abbildung 2 gezeigt, wurde nach 1 h Inkubation in Gegenwart von C. officinale und L. chuanxiong (50-500 µg /ml) KEINE Bestimmung durchgeführt. Die Behandlung mit L. chuanxiong verringerte die Freisetzung von NO im Vergleich zur Kontrolle nicht signifikant, aber 500 µg / ml C. officinale verringerte signifikant die NO-Freisetzung. Aus diesem Ergebnis kann geschlossen werden, dass die methanolischen Extrakte von C. officinale und L. chuanxiong in den verwendeten Dosen keine toxischen Wirkungen haben.

Wirkung von C. officinale und L. chuanxiong methanolischen Extrakten auf die Zelllebensfähigkeit in N2a-Zellen. Die Werte sind Mittelwerte ± SD von drei Messungen. *P < 0,05 verglichen mit unbehandeltem Normalwert (ANOVA/Tukey)

Wirkung von C. officinale und L. chuanxiong methanolische Extrakte auf Stickoxid-Freisetzung in N2a-Zellen. Die Werte sind Mittelwerte ± SD von drei Messungen. * P < 0,05 im Vergleich zum unbehandelten Normalwert. (ANOVA/Tukey)