Klinische Leistung des Roche Cobas 4800 HPV-Tests | Jiotower

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Das humane Papillomavirus (HPV) ist eines der weltweit häufigsten sexuell übertragbaren Viren und trägt maßgeblich zur Entstehung von Krebs bei, verursacht in Europa fast 60.000 neue Krebsfälle pro Jahr (1) und führt bei Frauen zur Entwicklung von Gebärmutterhalskrebs. HPV16 und HPV18 sind am stärksten krebserregend (2, 3), da etwa 70% aller Gebärmutterhalskrebserkrankungen mit HPV16- oder HPV18-Infektionen einhergehen (4). Fast 30% der Gebärmutterhalskrebserkrankungen werden durch das anfängliche zervikale Zytologie-Screening übersehen (5), so dass genaue und objektive Tests für HPV-assoziierten Gebärmutterhalskrebs, die empfindlichere molekulare Techniken verwenden, notwendig sind, um eine wirksame Prävention und Behandlung zu bieten, um zukünftige Risiken und Inzidenz von Gebärmutterhalskrebs zu reduzieren.

Der Roche Cobas 4800 HPV Test (Cobas) ist eine neuartige molekulare Methode, die auf Real-Time PCR (RT-PCR) basiert (6, 7), mit einem vollautomatischen System, das eine schnelle und effiziente Probenverarbeitung ermöglicht. Cobas können erkennen HPV16, HPV18, 12 andere hohe-risiko HPV (hrHPVs) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, und -68, als gepooltes Ergebnis) und die β-Globin-Kontrolle unabhängig voneinander in derselben PCR. Der Hauptzweck unserer Studie war es, die technischen und klinischen Leistungsmerkmale von Cobas zu bewerten. Zervikale Proben von 6.056 Frauen, die zwischen November 2011 und Februar 2012 zur Routineuntersuchung von Zervixläsionen an die Abteilung für Pathologie der Icahn School of Medicine am Mount Sinai überwiesen wurden, wurden in einem flüssigkeitsbasierten Zytologiemedium (PreservCyt) entnommen; Hologic, Marlborough, MA) und bis zur Verwendung bei 4°C gelagert.

Einhundertachtzig Proben wurden sowohl mit dem Roche Cobas 4800 HPV-Test als auch mit dem Digene Hybrid Capture 2 (HC2) hrHPV-DNA-Test auf hrHPV-Genotypen getestet (Tabelle 1), wobei etwaige Diskrepanzen mit dem Linear Array (LA) HPV-Genotypisierungstest (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Nach Pearsons Chi-Quadrat-Test gab es einen signifikanten Unterschied in der Anzahl der positiven und negativen Proben, die durch die beiden HPV-Tests identifiziert wurden (P < 0,001). Die Übereinstimmung zwischen den beiden Tests war jedoch statistisch stark, mit einem Übereinstimmungsgrad von 88,33% (P = 0,0218) und Cohens Kappa-Koeffizient von 0,767 (95% -Konfidenzintervall , 0,674 bis 0,860; P < 0,001), wobei 95% -Konfidenzintervalle der Kappa-Werte aus einer Binomialverteilung abgeleitet wurden.

In den diskordanten Proben detektierte der LA-HPV-Test in 50% (2/4) der Proben, die HC2-positiv waren, HPV-Genotypen mit niedrigem Risiko (lrHPV) und Cobas-negativ und in 13,33% (2/15) der Proben, die HC2-negativ und Cobas-positiv waren. HPV53 wurde in zwei Proben gefunden, die HC2-positiv und Cobas-negativ waren, was darauf hindeutet, dass die Sonden im Digene-Kit mit diesem HPV-Genotyp kreuzreagierten. Diese Beobachtung ist nicht überraschend, da die Kreuzreaktivität des HC2-Tests mit lrHPV-Genotypen, insbesondere HPV53, zuvor beobachtet wurde (9). Die Folge der Kreuzreaktivität des lrHPV-Genotyps in einem HPV-Test ist eine erhöhte Anzahl falsch positiver Ergebnisse. Dies könnte zu einer Überuntersuchung und Überbehandlung durch Follow-up-Tests von Frauen führen, die nur lrHPV-Genotypen besitzen und tatsächlich ein geringes Risiko haben, an Gebärmutterhalskrebs zu erkranken. In zwei HC2-negativen / Cobas-positiven Proben wurden HPV62 und HPV89 (CP6108) in beiden Proben und HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 und HPV84 in einer der Proben nachgewiesen, was darauf hindeutet, dass eine gemischte HPV-Infektion durch den Cobas-HPV-Test zu falsch positiven Ergebnissen führt.

Der LA-HPV-Test ergab hrHPV-Genotypen in keiner der Proben, die HC2-positiv und Cobas-negativ (0/4) waren, und in 80% (12/15) der Proben, die HC2-negativ und Cobas-positiv waren. Der HC2-Test konnte hrHPV in diesen Proben nicht nachweisen, was darauf hindeutet, dass dem HC2-Test mehr hrHPV-Genotypen fehlten als dem Cobas-Test, was bedeutet, dass Cobas aufgrund seiner besseren Empfindlichkeit und Genauigkeit ein potenziell effektiverer Screening-Assay ist. Im Gegensatz dazu wurde HPV durch den LA-HPV-Test in 6,67% (1/15) der HC2-negativen / Cobas-positiven Proben nicht nachgewiesen. Insgesamt war der Unterschied beim Nachweis von hrHPV zwischen HC2- und Cobas-Tests jedoch immer noch statistisch unbedeutend (χ2 = 2,901, P = 0,0885).

Achtundsechzig Proben wurden dann verwendet, um die Reproduzierbarkeit des Cobas-HPV-Tests zu bestimmen. Die Reproduzierbarkeit zwischen den Anfangs- und Wiederholungstests, berechnet mit einer standardmäßigen 2-mal-2-Kontingenztabelle, betrug 93,55%; der Kappa-Koeffizient zwischen den Ergebnissen der ersten und zweiten Runde des Cobas-Tests betrug 0,869 (95% CI, 0,744 bis 0,993; P < 0,001). Die Stärke dieser Vereinbarung wird als sehr gut angesehen, was darauf hindeutet, dass der Test sehr zuverlässig ist.

Einhundertsiebenundachtzig Proben wurden mit dem Cobas-HPV-Test getestet, um den Unterschied beim HPV-Nachweis zwischen präaliquotierten und postaliquotierten Proben zu bestimmen. Nur 7 Proben stimmten nicht überein, was einer Rate von 3,74% entsprach (95%-KI, 1,02% bis 6,46%). Die statistische Analyse ergab, dass der Unterschied zwischen präaliquotierten und postaliquotierten Proben nicht signifikant war (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Da vor und nach dem Zytologieprozess kein Anstieg der HPV-positiven Rate beobachtet wurde (präaliquot versus postaliquot), ist eine Kreuzkontamination von Proben während der Zytologieverarbeitung äußerst selten. HPV-Tests nach der Zytologie können den Arbeitsablauf erheblich verbessern und unnötige Aliquoten reduzieren, wenn ein Reflex-HPV-Test auf abnormale Zytologie vorgesehen ist.

Schließlich wurden 5.621 Proben mit dem Cobas-HPV-Test getestet, um die Auswirkungen von Vortexing und Swirling (vor dem Cobas-Test) auf die Ausfallraten zu bestimmen. Unter 1.380 Proben, die durch Vortexen verarbeitet wurden, betrug die Ausfallrate 4.57% (95%-KI, 3,65% bis 5,91%). Im Gegensatz dazu betrug die Ausfallrate bei 4.241 Proben, die durch Wirbelung verarbeitet wurden, 1,16% (95% CI, 0,84% bis 1,48%). Pearsons Chi-Quadrat-Test ergab, dass die Unterschiede der Ausfallraten zwischen verwirbelten und sanft verwirbelten Proben äußerst signifikant waren (χ2 = 59,983, P < 0,0001), wobei ein sanftes Verwirbeln empfohlen wird, um die Ausfallrate von Cobas zu verringern.

Zusammenfassend zeigte der Cobas 4800 HPV-Test eine höhere Sensitivität und Spezifität beim Nachweis von hrHPV-Genotypen als der Digene HC2 hrHPV-Test. Der Cobas-Test hatte auch eine geringere Kreuzreaktivität mit lrHPV-Genotypen als der HC2-Test, wie die weniger falsch positiven Fälle belegen. Der Unterschied in der Gesamtleistung zwischen diesen beiden Tests ist jedoch statistisch nicht signifikant.