Análise Genética de um Vírus/Vírus da Hepatite C (VHC), Quimera: a Interação entre o Vírus da doença de Trevo e uma Seqüência de HCV 5′ não-convertida Região Resulta em uma Replicação de um Fenótipo

RESUMO

Interno ribossomal de entrada de sites (IRESs) pode funcionar no estrangeiro genomas virais ou artificial dicistronic mRNAs. Descrevemos uma interacção entre a sequência específica do vírus da hepatite C (VHC) de tipo selvagem e a cloverleaf terminal do poliovírus (PV) 5’num vírus quimérico PV/VHC (contendo os ares do VHC), resultando num fenótipo de replicação. Uma mutação pontual no nucleótido (nt) 29 ou uma eliminação até nt 40 na região não traduzida do VHC 5 aliviou o bloco de replicação, dando variantes PV/VHC replicando-se a títulos elevados. Interacções fortuitas mas incapacitantes entre um LRES e ARN heterólogo circundante devem ser consideradas quando vetores de expressão dicistrónica baseados em IRES estão a ser construídos.Todos os genomas do picornavírus contêm um elemento genético denominado “internal ribosomal entry site (IRES)” que permite a tradução de mRNAs genómicos virais de uma forma independente da PAC(5, 12, 13, 16, 20, 25). Elementos genéticos similares também foram descobertos em genomas do vírus da hepatite C (VHC) (24), Um Hepacivírus, e vírus da diarréia viral bovina (21), um Pestivírus, da família theFlaviviridae. O IRESs está localizado no segmento 5′-terminal dos genomas, onde controlam a iniciação da síntese da poliproteína. Alguns vírus de ARN de insetos, por exemplo, o vírus de Plautia staliintestino, no entanto, são excecionais na medida em que o seu LRES cognato mapeia vários milhares de nucleotídeos a jusante da extremidade 5′ do genoma, separando dois cistrons que codificam duas poliproteinas diferentes (23). É de interesse que tenhamos previamente criado um poliovírus dicistrónico (PV) inserindo o IRES do vírus da encefalomiocardite na região de codificação da poliproteína PV (16). A organização genética deste PV dicistrónico, que codifica duas poliproteínas separadas por um elemento IRES, assemelha-se muito ao vírus intestinal de P. stali.

os elementos do IRES são definidos pela função e não pela sequência nucleótida. Na verdade, a IRESs de PV, um picornavírus, e VHC, um flavivírus, têm pouco ou nenhuma sequência em comum, mas ambos funcionam como promotores da entrada ribossómica interna para a iniciação da tradução. Este fenómeno é mais evidente nos vírus quiméricos PV / VHC, nos quais o cognato PV IRES foi trocado com o VHC (15, 28). Inesperadamente, o ares de VHC inclui uma sequência a jusante do códão de Ago que inicia a sua poliproteína (15, 22). Na construção de um vírus quimérico PV/VHC viável, uma parte da sequência principal de codificação de proteínas foi necessária para obter um vírus viável (Fig.1, ΔCore) (15). A sequência ΔCore leva à formação de uma poliproteína de fusão ΔCore/PV que deve ser processada através da clivagem pela proteinase viral PV 2apro na junção ΔCore*1A (Fig. 1) (28). No entanto, a produção de peptídeos codificados por sequência principal resultantes da tradução da sequência ΔCore não é necessária para a função dos ares de VHC em p/H710-d17* (28). (In previous studies, P / H710-d17 was designated P / H701-2A because the chimeric genome contained the HCV-specific sequence from nucleotides 18 to 710 of the HCV genome . A numeração da região do VHC 5′ não traduzida no presente artigo está em conformidade com a numeração do VHC 5 ‘ NTR .)