Anatomia & Fisiologia

O presente estudo foi realizado, com regras e regulamento para o cuidado e uso de animais de laboratório do animal, a casa e o respectivo experimento foram aprovados pela Central Animal Comitê de Ética. 25 fêmeas de camundongos albinos Suíços com uma idade média de 45 dias e 25 a 35gm de peso foram escolhidas aleatoriamente de uma casa de animais, de diferentes colónias reprodutoras. Estas fêmeas não grávidas foram intencionalmente copuladas por ratos machos da mesma variedade, com o objetivo de obter 10 filhotes de geração posterior. Na gaiola de policarbonato de plástico com coberturas de aço inoxidável, um macho heterozigótico forte e robusto foi colocado com uma única fêmea numa atmosfera continuamente mantida a 20-25C e 55±5% de umidade, 12hrs subsequentemente ciclo claro e escuro. Os ratos fêmea foram examinados para o plug vaginal e a presença de plug bem visualize foi marcada como gravidez confirmada e dia zero de gestacional. No dia 7, 8 e 9 de gestação as fêmeas plugadas foram chequadas para a gravidez por palpação abdominal.As nanopartículas de prata provenientes de fontes de aquisição de pesquisa foram avaliadas para o seu tamanho primário pela Met e para a sua aglomeração em meio celular por espectroscopia de correlação cruzada de fotões (PCCS) e espectroscopia de ultravioleta (UV–Vis), dispersão dinâmica de luz e potencial Zeta. Foram mostradas fotos representativas dos AGNPS. As imagens met dos AgNps revestidos de PVP dispersaram e suspenderam em 1.NaCl 5M confirmou o tamanho primário das partículas indicado pelos fabricantes. As nanopartículas de prata não revestidas encontraram uma distribuição heterogênea dentro da faixa de 50 a 100 nm, sendo a maioria em torno de 71nm.

no caso de AgNps em pó suspenso, as imagens met mostraram que em um ambiente aquoso as nanopartículas de prata se aglomeram e formam grandes agregados, muitos dos quais são maiores que 50 nm. Este resultado é consistente com os resultados da distribuição de tamanho hidrodinâmico que foi obtido a partir do método de dispersão de luz dinâmica (Zeta sizer). As análises de EDX foram confirmadas que apenas a prata elementar foi apresentada em AgNps em pó coloidais e secos. De acordo com os resultados do ICP-AES, as concentrações de iões Ag nas existências digeridas ácidas de AgNps em pó coloidais e em suspensão foram de 1908,1 e 447,2 mgl-1, respectivamente. Também os resultados do padrão XRD confirmam a cristalinidade dos AgNps do tipo em pó e a presença de prata cristalina elementar, além de outras fases, exceto prata metálica, não estavam presentes na amostra. Além disso, os resultados do XRF mostraram que a pureza dos AgNps do tipo em pó era de 97,86%.

Exposição de AgNps solução coloidal através de repetidas oral gavages

ratas Grávidas foram administradas duas vezes com solução salina normal (Sham (controle) como veículo e em uma dose de 5, 10, 15, 20mg/kg b.w. foram dadas através de repetidas oral gavages, de 7 a 12 gestacional dia, com a ajuda de uma ponta grossa eixo curvo alimentação agulha e van anexado. Os animais de controlo do Sham estão incluídos em experiências com animais tratados e com animais não tratados.

Dissecção e evisceração

No GD 18, direita e esquerda cornos do útero da mãe grávida foram exteriorizado seguinte laparotomia ventral sob profunda éter/etanol anestesia e 250 frescas coletadas de barragens por meio de dissecção foram lavadas com água de torneira em placa de Petri para remover o sangue e líquido amniótico e secas pelo papel de filtro e desidratado em 95% de álcool 48hrs no último expostos a 1% de KOH para a consistência evisceração e Alizarin protocolo de coloração para a correta visualização dos ossos normal ou anormal.13

método (avaliação da dismorfologia esquelética pela técnica de evisceração e coloração da alizarina)-:

o estudo de dismorfologia esquelética foi realizado pela técnica de evisceração e coloração da alizarina. Todos os espécimes (50 crias) de cada grupo foram desidratados em 95% do álcool ( álcool rectificado) durante 48 horas e depois removidos e lavados com água corrente da torneira e depois eviscerados por uma solução de KOH a 1% (KOH 1gm+100 ml de peso corporal). Depois de fazer laparotomia ventral os órgãos vitais são removidos. Os espécimes foram cuidadosamente mergulhados em abundância de solução de hidróxido de potássio (KOH) a 1% durante, pelo menos, 2 a 4 dias, até que a carne, o tendão, os músculos e as vísceras fossem transparentes & claros e dissolvidos, seguidos de uma visibilidade cristalina dos ossos e das cartilagens. Todos os dias a solução foi alterada quando se torna descolorada e resíduos.

o osso cristalino e a cartilagem visível da amostra foram então colocados em 1% de KOH e, em seguida, 6 a 8 gotas de coloração de 1% de alizarina foram adicionadas para colorir o seu Vermelho purplish profundo. A solução foi sacudida suavemente algumas vezes por hora. Em seguida, o mesmo procedimento foi continuado para outros 2-3 dias, a fim de dar a cor vermelha purplish profundo para o osso e cartilagens. Para a remoção de eventuais manchas e suavizar das amostras, as mesmas são, então, transferidos através de 40%, 80% (40 ml glicerol+60ml de água destilada, 80 ml de glicerol+20ml de água destilada) e de 1 a 2 de cristal timol adicionado para preservação a longo prazo, finalmente, mantida em 100% de glicerol, serviu para a fotografia & mão poderosa lente de observação.

no total, 250 fetos foram recolhidos de 25 mães de 1, 2, 3, 4 e 5 grupos, dos quais todas as amostras foram expostas a experiências de dismorfologia esquelética. Foram observados 60 fetos de reabsorção.

as Estatísticas

a percentagem de malformações esqueléticas foi avaliada a partir de cada grupo e avaliada pelo número de ossos envolvidos na dismorfologia e, finalmente, as percentagens foram comparadas entre o grupo e no grupo para o factor de teratogenicidade dependente da dose. Teste de estatística MULTIANOVA e Descritiva (análise post hoc) utilizado para este efeito.

observação e resultados

a percentagem de dismorfologia esquelética foi mais elevada e mais elevada em 15 mg de AgNps e 20 mg de AgNps/ kg de P.C. tratados (Quadro 1).

A menor dose AgNps grupos tratados (0.5 & 1mg/kg b.w.) foram observadas percentagens muito mínimas de anomalias esqueléticas, pelo que estes grupos tratados foram quase considerados como fetos do grupo de controlo (Figura 1).

Figura 1: Controlo da vista dorsal da mancha de alizarina do feto (a) e da vista lateral (B).

uma das crias do grupo tratado com 5 mg de AgNps/ kg de P.C., demonstrou um quinto segmento esterno não ossificado a partir da barra esternal e do segmento Manumbrium não ossificado, diagnosticado como fissura esternal. Outros fetos demonstraram hipoplasia maxilar e mandibular, osso frontal, parietal e osso nasal não ossificado, falha na fusão do segmento posterior do osso da anca, 10, 11 e 12 costelas vistas rudimentares no lado esquerdo de um dos fetos. Ausência de eixo médio de 6 a 12ª costela, juntamente com o aumento do espaço entre as costelas sucessivas foram denotadas em múltiplos fetos de diferentes grupos e diagnosticados como maior espaço web, ausência de corpo & processo Espinoso é visto a partir de segmentos vertebrais torácicos inteiros que é diagnosticado como defeito do tubo neural de tipo próximo em 1% de casos deste grupo tratado fetos. A percentagem de dismorfologia esquelética calculada neste grupo foi de 32% (Figura 2).

Figura 2 5 mg AgNps grupo tratado feto Alizarin mancha vista dorsal (A) e (B), vista lateral (C) vista ventral (D) e dorsal vista(E)

A 10mg AgNps grupo tratado com fetos demonstrado esquelético dysmorphology na forma de ausência de lombar e sacral, vértebra por vértebra, a ausência dos ossos do quadril, a ser gravemente degenerou costelas sem cartilagens, frontal e parietal óssea mostrou unossified e subdesenvolvido, escoliose é observado no tórax e região lombar, em um dos feto, ausência de vértebra cervical é visto, hipoplasia maxilar, a divulgação dos sagital e suturas coronais também são vistas. Ossos dos Membros inferiores não desenvolvidos são vistos em ambos os lados de um feto. A percentagem de dismorfologia esquelética calculada neste grupo foi de 44% (Figura 3).

Figura 3 10 mg Vista dorsal do feto de alizarina tratada com AgNps (A, B).

Entre 15mg AgNps grupo tratado com 8 filhotes foram observados ausência de vértebras cervicais com a ausência da 12ª costela e o resto das vértebras foram observados subdesenvolvido processo espinhoso, Metatarso fenda também é visto em vista dorsal do pé de uma das feto, unossified osso do quadril em vista ventral, com ausência de segmento & fibrose também é visto, unossified osso temporal, que é encontrado fibrosed na vista lateral do crânio, a ausência do segmento proximal, de innominate osso, coluna vertebral anomalia foi visto com rudimentar, 6ª e 9ª costela e a ausência de 10º,11º e 12º é observado costelas em um dos feto, unossified osso parietal também foi visto, Anencefalia com escoliose vértebras foi visto em L1-L5 em um dos feto, unossified osso do quadril foi visto, unossified escápulas de ambos os lados foi visto na dorsal com vista para o feto, Ausência de cartilagem foi visto entre os dias 6 e 12 de costela, um dos feto. A percentagem de dismorfologia esquelética calculada neste grupo foi de 60% (Figura 4).

Figura 4 15 mg visão dorsal (A, B) e visão ventral (C)

20mg / kg de P. C. Os fetos de grupo tratados com AgNps apresentaram a maior percentagem de dismorfologia esquelética (76%). A escoliose foi observada na região lombar de um feto, um feto demonstrou osso occipital não ossificado, escápula não ossificada e osso da anca, é observada uma grande fibrose nos ossos maxilar, frontal e parietal, o mesmo é observado no segundo a sexto segmento do esterno., fissuras é observada na articulação do tornozelo, do aumento do espaço é observada entre a 1ª e a 2ª costela e 5ª a 8ª costelas do lado esquerdo de um dos feto, também fissura é observado em symphisis púbis, articulação de um feto , unossified hipoplasia mandibular, a ausência do processo espinhoso com costelas onduladas também é observada, em um feto observamos fusão completa o 2º e o 8º vértebras cervicais, que é claramente diferenciado do resto da 1ª vértebra cervical. Observamos também escoliose leve e osso occipital e parietal não ossificados e ausência de escápulas no lado direito de um dos fetos, também se observam vértebras plásticas hipo (Figura 5).

Figura 5 vista dorsal do feto de alizarina, tratada com 20 mg de AgNps.