Citotoxicidade dependente do complemento

anti -odiesedit terapêutico

o desenvolvimento de anticorpos terapêuticos antitumorais envolve a análise in vitro das suas funções efectoras, incluindo a capacidade de induzir o CDC a matar as células alvo. A abordagem clássica consiste em incubar anticorpos com células-alvo e fonte de complemento (soro). Então a morte celular é determinada com várias abordagens:

• método radioactivo: as células alvo são rotuladas com 51C antes do ensaio CDC, o crómio é libertado durante a lise celular e a quantidade de radioactividade é medida.
• Medição da actividade metabólica das células vivas (coloração das células vivas): após incubação das células-alvo com anticorpos e complemento, adiciona-se um corante permeável à membrana plasmática (por exemplo, calcein-AM ou resazurina). As células vivas metabolizam – no em produto fluorescente impermeável que pode ser detectado por citometria de fluxo. Este produto não pode ser formado em células mortas metabolicamente inactivas.
• Medição da actividade das enzimas intracelulares libertadas: células mortas libertam enzimas (ex. LDH ou GAPDH) e a adição de seu substrato leva a mudança de cor, que é geralmente quantificada como mudança de absorvância ou Luminiscência.
• coloração de células mortas: um corante (fluorescente) entra dentro das células mortas através da sua membrana plasmática danificada. Por exemplo, o iodeto de propídio liga-se ao DNA de células mortas e o sinal fluorescente é medido por citometria de fluxo.

a tipagem HLA e o teste crossmatchedit

os testes CDC são utilizados para encontrar um dador adequado para transplante de órgãos ou de medula óssea, nomeadamente um dador com fenótipo correspondente do sistema de histocompatibilidade HLA. No início, a tipagem HLA é feita para o paciente e doador para determinar seus fenótipos HLA. Quando um casal potencialmente adequado é encontrado, o teste de crossmatch é feito para excluir que o paciente produz anticorpos anti-HLA específicos do doador, o que pode causar rejeição do enxerto.

CDC forma de tipagem HLA (por outras palavras, tipagem serológica) utiliza lotes de anticorpos anti-HLA de antissoros alogénicos caracterizados ou anticorpos monoclonais. Estes anticorpos são incubados um a um com linfócitos do paciente ou doador e fonte de complemento. A quantidade de células mortas (e, portanto, o resultado positivo) é medida pela coloração de células mortas ou vivas. Atualmente, a datilografia do CDC está sendo substituída pela datilografia molecular, que pode identificar sequências nucleotídicas de moléculas de HLA via PCR.

o ensaio CDC é normalmente utilizado para a realização de testes de crossmatch. A versão básica envolve incubação do soro do paciente com linfócitos do doador e segunda incubação após a adição do complemento do coelho. A presença de células mortas (teste positivo) significa que o doador não é adequado para este paciente em particular. Existem modificações disponíveis para aumentar a sensibilidade do teste, incluindo a extensão do tempo mínimo de incubação, adicionando globulina anti-humana (AHG), removendo anticorpos não ligados antes de adicionar complemento, separação de células T e subconjunto de células B. Além do crossmatch CDC existe crossmatch de fluxo-citometria disponível, que é mais sensível e pode detectar até mesmo complementar anticorpos não-ativantes.