Cytokeratin 5/6 e cytokeratin 8/18 expressão em câncer de mama triplo negativo: clinicopathologic significado do Sul-população Asiática

Métodos de

> Total de 150 casos de TNBC foram selecionados a partir de registros do departamento de patologia arquivos. As amostras cirúrgicas incluíam mastectomias radicais modificadas, mastectomias simples e amplas excisões locais com dissecção de linfonodos sentinela. Todos os pacientes foram submetidos a cirurgias no Hospital Nacional de Liaquat, Karachi, de janeiro de 2008 a dezembro de 2013, durante um período de 6 anos. O estudo foi aprovado pelo Comitê de pesquisa e revisão ética da instituição e foi obtido consentimento informado de todos os pacientes no momento da cirurgia. Foram recuperadas as lâminas manchadas de hematoxilina e eosina e os blocos de parafina dos casos, tendo sido cortadas novas secções sempre que necessário. Foram avaliadas as lâminas de todos os casos por dois histopatologistas seniores e características patológicas como tipo histológico, grau tumoral, estágio T, estágio N, invasão linfovascular, necrose, fibrose, infiltração linfocítica (linfócitos infiltrados por tumor), presença de componente insitu, propagação pagetóide e invasão linfática dérmica. Os registros clínicos de todos os pacientes também foram revistos a partir de registros institucionais para avaliar a idade do paciente, história de radiação e quimioterapia e estado de recorrência. Além disso, foram seleccionados blocos representativos de cada caso e foram realizadas imunohistoquímica ER, PR e Her2neu para reconfirmar o estatuto triplo negativo.

ER, PR, Her2neu e Ki67 IHC foram realizados usando anticorpos DAKO como em, com EnVision™ FLEX, high pH DAKO kit de acordo com o protocolo do fabricante.

1. coelho monoclonal FLEX receptor anti-humano de estrogénio Alfa, clone EP1.

2. clone do receptor da progesterona Anti-humano do rato monoclonal FLEX PgR 636.

3. oncoproteína C-erbB-2 anti-humana de coelho policlonal.

4. clone do antigénio Ki67 anti-humano do rato monoclonal FLEX MIB-1.

a coloração Nuclear das ER e PR em > 1% das células cancerígenas foi considerada positiva. Para her2neu, os casos foram marcados 1+, 2+ e 3+ de acordo com as diretrizes da PAC. Em casos equívocos (2+), O FISH foi realizado utilizando o Kit de sonda Path Vysion Her2neu, de acordo com os protocolos do fabricante. Os resultados foram expressos em relação aos sinais her2neu em comparação com os sinais CEP17, de acordo com as orientações ASCO/CAP.

Ki67 imunossupressão foi registada como variáveis contínuas com base na proporção de células cancerígenas coradas positivas. Além disso, com base no índice Ki67, os casos foram classificados em categorias de índice < 15, 16-24, 25-44 e > 44% ki67.

CK5/6 IHC foi realizado utilizando Citoqueratina anti-humana do rato FLEX Monoclonal 5/6, clone D5 / 16 B4 pelo método envision DAKO de acordo com o protocolo do fabricante. Foi considerada positiva a coloração intermédia a forte citoplásmica e membranosa em mais de 10% das células. A coloração fraca a intermédia em < 10% foi considerada como focal positiva, enquanto que nenhuma coloração foi considerada negativa (ficheiro adicional 1: Figura S1).

CK 8/8 IHC foi realizado utilizando citoqueratina monoclonal anti-humana do rato 5/6, clone D5 / 16 B4, de acordo com o método envision DAKO. Foi considerada positiva a coloração intermédia a forte citoplásmica e membranosa em mais de 50% das células. A coloração fraca a intermédia (citoplásmica, com perda de reactividade das membranas) em 10-50% foi considerada como focal positiva, enquanto que nenhuma coloração ou coloração fraca em < 10% foi considerada negativa (ficheiro adicional 1: Figura S1).

Estado de recorrência e seguimento foram avaliados através da revisão dos registos médicos hospitalares. A sobrevivência global foi tomada como tempo desde a excisão cirúrgica até à morte ou último seguimento e a sobrevivência livre de doença foi definida como tempo entre a excisão cirúrgica e a recorrência local ou metástases distantes, morte ou último seguimento.

pacote estatístico para Ciências Sociais (SPSS 21) foi utilizado para a compilação e análise de dados. O desvio médio e padrão foram calculados para variáveis quantitativas. A frequência e a percentagem foram calculadas para variáveis qualitativas. A Praça Chi foi aplicada para determinar a associação. Student t test ou Mann whitney test foram aplicados para comparar a diferença de meios entre os grupos. Valor de P ≤ 0, 05 Como significativo. As curvas de sobrevivência foram desenhadas usando o método Kaplan–Meier e o significado da diferença entre as curvas de sobrevivência foi determinado usando a razão log-rank. Valor de P ≤ 0.O 05 foi considerado significativo.

resultados

a Idade Média dos doentes envolvidos no estudo foi de 48, 9 anos e o grupo etário mais comum foi de 31-50 anos. A maioria dos pacientes apresentou na fase T2 com um índice médio elevado de ki67, ou seja, 46, 9%. 42,7% dos casos tinham metástases nodais. Embora 84% dos casos fossem de carcinoma ductal invasivo convencional, NST; no entanto, uma proporção significativa dos casos foi de histologia metaplástica (9, 3%). A maioria dos casos foram de grau elevado (86,7% grau III). A maioria dos tumores mostra infiltração linfocítica e necrose. A maioria dos tumores não tem componente insitu (61%). Observou-se uma recorrência Local ou metástases distantes tardias em 17, 8% dos casos (Tabela 1).

Positivo (> 10%) CK5/6 expressão foi observada em 8% (12 casos) de TNBC enquanto a 2,4% (4 casos) mostrou focal positiva (< 10%) e 89.3% (134) foram negativas com CK5/6. A perda completa da expressão CK8/18 foi observada em 4,7% (7 casos), enquanto 32,7% (49 casos) revelaram perda focal de CK8/18 e 62,7% (94 casos) mostraram expressão normal intacta de CK8/18. Não foi observada associação significativa de CK5/6 e CK8/18 com vários parâmetros clinicopatológicos (Tabelas 2 e 3). Do mesmo modo, não foi observada qualquer associação significativa de CK 5/6 e CK8/18 com o estado de recorrência dos doentes (ficheiro adicional 2: Figura S2).

Discussão

No presente estudo avaliou-se a expressão de um basais (CK5/6) e um luminal marcador (CK8/18) em TNBC em nossa população e descobriu que; 8 e 2,7% de TNBC mostrou positivo e focal positiva expressão de CK5/6, respectivamente, e 4.7 e 32.7% do TNBC revelou perda completa e perda focal da expressão CK 8/18, respectivamente. Em todos os casos em que se observou perda focal CK8/18, verificou-se perda de reactividade da membrana enquanto se conservou coloração citoplásmica em poucas células. No entanto, não foi observada qualquer associação significativa entre estes padrões anormais de expressão de citoqueratinas com vários parâmetros clínicos e prognósticos do TNBC na nossa população. O cancro da mama é uma das doenças malignas mais comuns na população do Sul Da Ásia, especialmente em crianças .

o perfil da expressão genética define cancros basais da mama como aqueles que exibem aglomerados basais de genes que incluem EGFR, citoqueratina basal 5/6, C–kit, aglomerado de proliferação e baixa expressão de genes relacionados com Her2neu e receptores hormonais . No entanto, o câncer de mama basal não é uma entidade única e inclui vários subtipos, incluindo dois subtipos basais semelhantes (BL1 e BL2), mesenchymal, mesenchymal, imunomodulatório e subtipos androgênicos luminais . Além disso, foram também definidos subtipos ricos em interferão e subtipos baixos de claudin . O subtipo de cancros basais da mama não é recomendado pela ASCO/CAP. A expressão CK 5/6 varia de 24 a 72% no TNBC, conforme relatado em estudos anteriores . Outros pesquisadores também propuseram significância prognóstica de CK 5/6 em cancros da mama negativos nos nós . Nielson et al. sugeriu que o câncer de mama CK5/6 positivo tem pior prognóstico independente do grau tumoral, estágio T e estado hormonal/Her2neu . Da mesma forma, em outro estudo foi proposto que o CK5/6 é Marcador de menor sobrevivência livre de doença, independente de outros fatores de prognóstico do câncer de mama . Inanc et al. reportou 50.5% de expressão de CK5 / 6 com correlação positiva de CK5 / 6 TNBC com metástase nodal e tamanho do tumor . No entanto, em contraste com esses estudos, encontramos uma expressão baixa de CK5 / 6 no TNBC em nossa população estudada, que pode representar um perfil genômico diferente do TNBC em nossa população, que precisa ser explorado em estudos adicionais. Foi proposto o papel prognóstico de CK5/6 em outros cancros do corpo .

CK8/18 é uma citoqueratina luminal principalmente expressa em epitélio mamário em um padrão membranoso e citoplasmático. Cimean et al. definiu estes diferentes padrões de CK8 / 18 no cancro da mama; citoplásmico difuso, membranoso e combinado citoplásmico e membranoso .Alguns pesquisadores têm proposto que a perda da expressão CK8 / 18/CK8 / 18 baixa está associada com pior prognóstico e alto risco de metástase . No entanto, não encontramos nenhum significado prognóstico de perda de expressão CK8/18 com vários fatores de prognóstico e recorrência no TNBC.

descobrimos que 32,7% do TNBC mostram perda focal de expressão CK8/18. Em todos estes casos houve perda de reactividade membranosa de CK8 / 18 enquanto a coloração citoplasmática foi mantida em poucas células. Aiad et al. em um estudo envolvendo 70 casos de câncer de mama encontrou expressão anormal de CK8/18 (citoplasmática) em 70% do câncer de mama Egípcio, o que sugere uma grande heterogeneidade na expressão de citoqueratina do câncer de mama em diferentes partes do mundo .