Desempenho clínico do teste de Roche Cobas 4800 HPV | Jiotower

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o papilomavírus humano (HPV) é um dos vírus sexualmente transmissíveis mais comuns em todo o mundo e um dos principais contribuintes para o cancro, causando quase 60 000 novos casos de cancro por ano na Europa (1) e levando ao desenvolvimento do cancro do colo do útero em mulheres. Os HPV16 e HPV18 são os mais carcinogénicos (2, 3), Uma vez que cerca de 70% de todos os cancros cervicais presentes com infecções HPV16 ou HPV18 (4). Quase 30% dos cancros do colo do útero são esquecidos pelo rastreio inicial da citologia cervical (5), pelo que são necessários testes precisos e objetivos para o cancro do colo do útero associado ao HPV que utilizem técnicas moleculares mais sensíveis para proporcionar prevenção e tratamento eficazes para reduzir os riscos futuros e a incidência do cancro do colo do útero.O teste COBAS 4800 HPV (Cobas) é um novo método molecular baseado no PCR em tempo real (RT-PCR) (6, 7), com um sistema totalmente automatizado que permite processamento rápido e eficiente de amostras. Cobas pode detectar o HPV 16, HPV 18, de 12 de alto risco de Hpv (hrHPVs) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, e -68, como um pool de um resultado), e o β-globina de controle de forma independente, na mesma PCR. O principal objetivo do nosso estudo foi avaliar as características de desempenho técnico e clínico da Cobas. Cervical amostras de 6,056 mulheres encaminhadas para o Departamento de Patologia, no Icahn Escola de Medicina Monte Sinai, em exame de rotina de lesões cervicais entre novembro de 2011 e fevereiro de 2012 foram coletados em um líquido citologia médio (PreservCyt; Halologic, Marlborough, MA) e conservada a 4 ° C até à sua utilização.Foram testadas cento e oitenta amostras de genótipos de hrHPV tanto no teste de HPV Roche Cobas 4800 como no teste de ADN Hrhpv híbrido Capture 2 (HC2) do Digene Hybrid Capture 2 (HC2) (Quadro 1), tendo sido resolvidas quaisquer discrepâncias utilizando o teste de genotipagem Linear (LA) do HPV (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). De acordo com o teste Qui-quadrado de Pearson, houve uma diferença significativa no número de amostras positivas e negativas identificadas pelos dois testes de HPV (P < 0, 001). No entanto, a concordância entre os dois testes foi estatisticamente forte, com um acordo de nível de 88.33% (P = 0.0218) e kappa de Cohen coeficiente de 0.767 (95% de intervalo de confiança , 0.674 para 0.860; P < 0.001), onde 95% de intervalos de confiança dos valores de kappa foram deduzidas a partir de uma distribuição binomial.

No discordantes amostras, o LA do teste de HPV detectado HPV de baixo risco (lrHPV) genótipos em 50% (2/4) das amostras que foram HC2 positivo e Cobas negativo e em 13,33% (2/15) de amostras que eram HC2 negativo e Cobas positivo. HPV53 foi encontrado em duas amostras que eram HC2 positivas e Cobas negativas, sugerindo que as sondas no kit Digeno reagiram com este genótipo de HPV. Esta observação não é surpreendente, uma vez que a reactividade cruzada do teste HC2 com genótipos lrHPV, especificamente HPV53, foi observada anteriormente (9). A consequência da reactividade cruzada do genótipo lrHPV no teste do HPV é um aumento do número de resultados falsos-positivos. Isto pode levar a uma investigação excessiva e a um tratamento excessivo através de testes de acompanhamento de mulheres que possuem apenas genótipos lrHPV e que estão, na verdade, em baixo risco de desenvolver cancro do colo do útero. Em dois HC2-negativo/Cobas-amostras positivas, HPV62 e HPV89 (CP6108) foram detectados em ambas as amostras e HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70, e HPV84 foram detectados em uma das amostras, sugerindo que misturado a infecção pelo HPV leva a resultados falso-positivos pelo Cobas do teste de HPV.

o teste de la HPV detectou genótipos de hrHPV em nenhuma das amostras que eram HC2 positivas e Cobas negativas (0/4) e em 80% (12/15) das amostras que eram HC2 negativas e Cobas positivas. O teste HC2 não detectou hrHPV nestas amostras, o que indica que o teste HC2 falhou mais genótipos de hrHPV do que o teste Cobas, o que implica que o Cobas é um teste de rastreio potencialmente mais eficaz devido a uma melhor sensibilidade e precisão. Em contraste, o HPV não foi detectado pelo teste de HPV LA em 6, 67% (1/15) das amostras HC2-negativas / Cobas-positivas. Globalmente, no entanto, a diferença na detecção de hrHPV entre os testes HC2 e Cobas foi ainda estatisticamente insignificante (χ2 = 2.901, P = 0.0885).Foram então utilizadas 68 amostras

para determinar a reprodutibilidade do teste Cobas HPV. A reprodutibilidade entre a inicial e repetir os testes, como calculado com um padrão de 2-por-2 tabela de contingência, foi 93.55%; o coeficiente de kappa de resultados entre a primeira e a segunda rodadas de teste Cobas foi 0.869 (95% CI, 0.744 para 0.993; P < 0.001). A força deste acordo é considerada muito boa, sugerindo que o ensaio é altamente confiável.

cento e oitenta e sete amostras foram testadas pelo teste Cobas HPV para determinar a diferença na detecção do HPV entre as amostras pré-aliquotadas e pós-aliquotadas. Apenas 7 amostras foram incompatíveis, para uma taxa de 3, 74% (IC 95%, 1, 02% a 6, 46%). A análise estatística revelou que a diferença entre as amostras prealiquotadas e postaliquotadas não era significativa (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Uma vez que não se observou aumento na taxa positiva para o HPV antes e depois do processo citológico (prealiquot versus postaliquot), a contaminação cruzada das amostras durante o processamento da citologia é extremamente rara. O teste de HPV após a citologia pode melhorar significativamente o fluxo de trabalho e reduzir alíquotas desnecessárias quando se pretende um teste de HPV reflexo para citologia anómala.

finalmente, 5.621 amostras foram testadas usando o teste Cobas HPV para determinar os efeitos do vortexing e swirling (antes do teste Cobas) nas taxas de insucesso. Entre 1.380 amostras processadas por vórtice, a taxa de falha foi de 4.57% (IC 95%, 3, 65% a 5, 91%). Em contraste, entre 4.241 amostras processadas por rotação, a taxa de falha foi de 1, 16% (IC 95%, 0, 84% a 1, 48%). O teste Qui-quadrado de Pearson revelou que as diferenças das taxas de falha entre as amostras de vortexadas e balançadas suavemente eram extremamente significativas (χ2 = 59.983, P < 0.0001), sendo recomendado um giro suave para diminuir a taxa de falha de Cobas.

em conclusão, o teste Cobas 4800 HPV demonstrou um maior grau de sensibilidade e especificidade na detecção de genótipos de hrHPV do que o teste Digene HC2 hrHPV. O teste Cobas também teve um nível menor de reactividade cruzada com genótipos lrHPV do que o teste HC2, como evidenciado pelos menos casos falsos positivos. No entanto, a diferença de desempenho global entre estes dois testes não é estatisticamente significativa.