Prevalência e Alguns Possíveis Mecanismos de Colistina Resistência Entre Tuberculose multi-Resistente e Extensivamente Resistente a Drogas Pseudomonas aeruginosa

Introdução

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) é um patógeno oportunista, comumente encontrados no meio ambiente, como solo, água, plantas e ambiente hospitalar, com o conhecido intrínseca resistência a diversos antimicrobianos e a capacidade de causar infecções letais. É considerada a segunda causa comum de septicemia em unidades de cuidados intensivos (ICUs) e pode causar pneumonia associada ao ventilador, infecções de feridas e infecções do tracto urinário (UTI). Muitos estudos relataram o aumento da mortalidade e morbilidade de infecções associadas a P. aeruginosa, especialmente aquelas que mostram padrões de Resistência a múltiplos fármacos.1-3

the emergence of multidrug-resistant (MDR) or extensively drug-resistant (XDR) or pandrug-resistant (PDR) P. a aeruginosa torna-se um problema de saúde pública significativo que pode levar a uma terapia antimicrobiana retardada ou à sua falência e ao aumento da taxa de mortalidade, especialmente com o aparecimento de P. aeruginosa resistente ao carbapenem. Por isso, é necessária atenção porque estas estirpes resistentes podem mostrar resistência a todos os antimicrobianos disponíveis ou mostraram susceptibilidade apenas a agentes tóxicos, tais como colistina ou polimixinas, não deixando escolha para a equipa de cuidados de saúde no tratamento de infecções graves associadas ao MDR P. Aeruginosa.4

Recentemente, o aparecimento de resistência aos polymyxins foi observado em algumas espécies de Enterobacteriaceae, como K. pneumoniae, E. coli, Enterobacter aerogenes e Enterobacter cloacae, devido à sua ampla utilização para o controle de infecções em medicina veterinária. A resistência à colistina tornou-se um grande desafio para o tratamento de infecções com risco de vida, especialmente com a co-existência de genes mcr-1 com outros genes de Resistência a múltiplas drogas como ESBL, MBL, NDM, com a possibilidade de emergência de Resistência a pan-drogas.5,6

colistina, conhecida como polimixina E, é um membro de uma família de polipeptídeo catiónico conhecido como polimixinas. Esta família de antibióticos é caracterizada pela presença de uma cadeia lateral lipofílica de acilo gordo. Atualmente, colistin é reintroduzido na terapia médica e considerado o último recurso para o tratamento de infecções graves causadas por manchas de MDR e XDR. Em geral, a ação das polimixinas em bactérias depende principalmente da interação eletrostática entre o antibiótico carregado positivamente e o grupo de fosfato de lípidos carregado negativamente localizado na membrana externa após sua ligação, ele se difunde através da membrana exterior, espaço periplásmico e interage com a membrana interna. As polimixinas causam desestabilização na membrana exterior, formação de poros, aumento da permeabilidade, fuga para o conteúdo citoplasmático seguido de lise celular.7

a resistência à colistina ocorre principalmente devido à modificação química pela adição enzimática de Fosfoetanolamina no grupo 4ʹ – fosfato da fracção lipídica A do lipopolissacárido, diminuindo a carga líquida negativa da membrana exterior, resultando na diminuição da afinidade da polimixina. A resistência à colistina pode resultar de mutações cromossómicas codificadas, tal como referido em K. pneumoniae, ou da transferência horizontal da resistência através de plasmídeos Portadores de gene resistente à colistina (mcr-1).8-11

o surgimento da resistência colistina em vários países Da Ásia, Europa e alguns países da África tornou-se uma das preocupações globais. Como, a disseminação da resistência à colistina indica a sua capacidade de transferir horizontalmente por plasmídeos conjugativos ou verticalmente por mutação cromossómica.12,13 também, sendo a colistina uma das últimas linhas de tratamento para infecções graves, tornando o surgimento de isolados de resistência à colistina ameaçando o mundo pelo aparecimento de doenças infecciosas não tratáveis.14 de Detecção de colistina resistência no Egito, que é um país conhecido por sua alta carga de doenças infecciosas e a presença de baixa ou nenhuma restrição sobre o uso de antimicrobianos em ambos os veterinária e medicina, indicando o surgimento de doenças intratáveis na nossa área, devido à possibilidade de transferência de colistina resistência altamente resistente a bactérias.15

neste estudo, investigamos a prevalência de resistência à colistina entre o MDR e o XDR P. aeruginosa isolada de pacientes que sofrem de uma variedade de infecções na unidade de cuidados intensivos (UCI) do Hospital Universitário Minia, no Egito.

materiais e métodos

recolha de isolados

cento e setenta e cinco amostras clínicas de diferentes fontes de infecções foram colhidas em doentes admitidos na UCI no Hospital Universitário Minia, Minia, Egipto, como parte de procedimentos de rotina hospital-laboratório. Todas as amostras clínicas foram cultivadas em ágar de soja com tripticase (Lab M, UK) a 37°C e 42°C durante 24 horas. Uma colônia foi sub-cultivada em placas de ágar MacConkey e ágar cetrimide. Foram ainda identificadas colónias isoladas de acordo com a morfologia das Colónias, a fermentação de lactose, as reacções bioquímicas (incluindo a motilidade sulfureto–indol, catalase, ferro triplo do açúcar, urease e oxidase), a capacidade de crescimento com ágar de cetrimida e de crescimento a 42°C. 16 P. as colónias de aeruginosa foram purificadas por estrias e as colónias puras foram armazenadas a 4 ° C.

testes de susceptibilidade a antibióticos

susceptibilidade a antibióticos pelo método de difusão de discos de Kirby-Bauer

a susceptibilidade a antibióticos contra diferentes classes de antibióticos foi testada pelo método de difusão de discos de Kirby-Bauer.17 Antibiótico discos utilizados foram a amoxicilina/clavulânico (AMC) (20/10 µg), ampicilina/sulbactam (SAM) (20 µg), meropenem (MEM) (10 µg), imipenem (IPM) (10 µg), cefepime (FEB) (30 µg), cefoperazone (CEP) (75 µg), polimixina B (PB) (300 µg), ciprofloxacina (CIP) (5 µg), levofloxacina (LV) (5 µg), gentamicina (CN) (10µg), ceftazidima (CAZ) (30 µg), tigecycline (TGC) (15 µg), amicacina (AK) (30 µg), tobramicina (CF) (10 µg), aztreonam (ATM) (30 µg), piperacilina (PRL) (30 µg), carbenicillin (CARRO) (100 µg) (Oxoid; Basingstoke, INGLATERRA). Os isolados foram classificados como sensível, intermediário e resistente, de acordo com zonas de inibição de’ padrões de interpretação do Clinical Laboratory standards Institute (CLSI) 2018.18

MIC Determinação de Antibiótico Colistina

método de diluição em Agar Muller-Hinton agar foi utilizada para determinar a colistina mínima concentração inibitória.Foi considerada resistência à colistina se a CMI for ≥4µg/mL de acordo com as normas orientadoras da CLSI.18

de acordo com os resultados da susceptibilidade aos antibióticos, os isolados foram classificados em MDR, XDR e PDR de acordo com os critérios previamente notificados.20

teste de difusão combinada do disco (CDT)

todos os isolados resistentes à colistina (MIC ≥4) foram testados utilizando EDTA de 100 mM (Sigma-Aldrich; St.268 Louis, MO, USA) para inibir a actividade mcr-1, uma vez que esta concentração não demonstrou actividade antimicrobiana. As estirpes bacterianas foram cultivadas em ágar Muller-Hinton (Lab m, UK), onde foram utilizados três discos. Um disco estava saturado com 10 µL de EDTA de 100 mM para assegurar que não houvesse inibição do crescimento bacteriano pela concentração utilizada de EDTA. Os outros dois discos eram de 10 µg de colistina e 10 µg de colistina mais 10 µL de EDTA de 100 mM. Os isolados foram observados para um aumento ≥3 mm no diâmetro da zona de inibição do disco de colistina/EDTA, comparando com o disco de colistina.21

Alteração do potencial de Zeta

os genes mcr codificam as enzimas Fosfoetanolamina transferases que ligam enzimaticamente uma fracção de Fosfoetanolamina (PEtN) aos lípidos A da membrana exterior das bactérias gram-negativas, o que conduz a uma redução da sua carga líquida negativa que confere a resistência à colistina.22

as células bacterianas foram autorizadas a crescer na presença e ausência de 80 µg / mL EDTA. Em seguida, a suspensão bacteriana foi centrifugada a 5000 rpm durante 5 minutos a 5°C e, em seguida, os pellets foram lavados duas vezes, depois de os pellets terem sido suspensos em 2 mL de solução NaCl estéril de 1 mM, ajustada para 0,5 McFarland de turbidez padrão da solução. As amostras foram diluídas para 1: 4 utilizando NaCl de 1mM. O potencial Zeta foi determinado em 2 mL da amostra diluída. As alterações do potencial Zeta induzidas pelo EDTA foram calculadas a partir da razão potencial Zeta (RZP=ZP+EDTA/ZP-EDTA), em que ZP+EDTA e ZP-EDTA correspondem aos valores potenciais Zeta obtidos para as suspensões bacterianas cultivadas na presença ou ausência de EDTA de 80 µg/mL, respectivamente. RZP de ≥ 2, 5 valor considerado como critério para a identificação de estirpes mcr-1 positivas.21

extracção do ADN

o modelo de ADN foi extraído de uma cultura nocturna de P. aeruginosa, como descrito anteriormente.23 uma suspensão de sedimento bacteriano foi cozida durante 10 minutos, depois, centrifugada. O sobrenadante foi utilizado directamente no ensaio PCR.

a análise PCR dos Genes testados

a exotoxina A é um importante factor de virulência (um agente citotóxico) da P. aeruginosa em infecções clínicas. Este factor inibe a biossíntese proteica, causando grandes danos nos tecidos e nos órgãos. O gene toxA, uma sequência genética inerente localizada no cromossoma P. aeruginosa, é usado para confirmação de P. aeruginosa pela PCR.

PCR foi realizada num volume total de 25 µL contendo 1x tampão PCR, 1 µmol/L de cada primário, 1 µL de ADN genómico (aproximadamente 150 ng), 200 µmol/L de mistura dNTPs, 2 mmol/L de MgCl2 e 0,05 U / µL Taq ADN polimerase. Amplificações de PCR foram realizadas para toxA FW:CTGCGCGGGTCTATGTGCC, RV:GATGCTGGACGGGTCGAG automática, em termociclador (Eppendorf, Hamburg, Alemanha), sob as seguintes condições: 30 ciclos de 1 min a 94°C, 1,5 min de 63°C e 1 min a 72°C. 24

Os genes mcr-1 e mcr-2 foram analisadas pela técnica do PCR convencional utilizando os seguintes primers: mcr-1 FW (5′-AGTCCGTTTGTTCTTGTGGC-3′), RV (5′-AGATCCTTGGTCTCGGCTTG-3′) e mcr-2 Fw (5ʹ-ATGACATCACATCACTCTTGG-3ʹ), Rv (5ʹ-TTACTGGATAAATGCCGCGC-3ʹ).25,26 as condições de técnica foram 34 ciclos de 95 ° C para 1 min, 58°C para mcr-1 e 52°C para 30s, 72°C para 1min, seguido pela extensão final de 72°C para 5 mins.

determinação da inibição das bombas de efluxo através da redução da CMI utilizando inibidor da bomba de efluxo (CCCP)

o método de diluição com ágar foi utilizado para a determinação dos MICs utilizando caldo Mueller-Hinton ajustado à catião (Sigma-Aldrich, St Louis, EUA). Os CEI do CCCP (EPI) e da colistina foram determinados para os isolados testados. A sub-MIC do CCCP foi utilizada para determinar o seu efeito na mic de colistina; a concentração do CCCP (0,5× MIC) foi constantemente mantida nas concentrações da MIC acima indicadas, enquanto que a do antibiótico foi serialmente aumentada. Os MICs dos isolados à colistina na ausência e presença de CCCP foram determinados utilizando uma sub-MIC do CCCP (concentração final de 10 mg/L), tal como já descrito.27 as alterações resultantes da MIC após a adição do CCCP foram calculadas como a relação entre o nível de MIC do antibiótico livre do CCCP e o do antibiótico adicionado pelo CCCP. Como descrito anteriormente por Osei Sekyere, Amoako28, que relatou que o critério positivo para a presença de bombas de efluxo em isolados foi uma diminuição ≥8 vezes na MIC de colistina após a adição de CCCP.Padrão proteico da membrana exterior

uma única Colónia dos isolados de P. aeruginosa testados foi cultivada em 5 mL de caldo de LB a 37°C durante 2 dias, com agitação a 200 rpm. As células foram centrifugadas a 8000 rpm durante 5 minutos. Os pellets bacterianos foram suspensos em 1 mL de tampão de lise (0,05 M Tris HCL, 2% SDS, 10% glicerol), aquecidos a 95°C durante 10 minutos. Depois, as amostras foram centrifugadas por 10.000 rpm durante 30 minutos. Cerca de 50 µL de proteína extraída foi misturada com tampão de amostra (4 mL de água desionizada ou destilada, 1 mL de 0,5 M Tris HCL, de 1,6 mL de 10% SDS, 0,4 mL 2-mercaptoethanol, 0,2 mL de 1% (w/v) Bromophenol blue) (1:1) e separados por 12% de dodecil sulfato de sódio-gel de poliacrilamida (SDS-PAGE).29

perfil do Gel Lipopolissacárido SDS-poliacrilamida para Isolados sensíveis à colistina e resistentes à colistina

LPS dos isolados testados foram extraídos e purificados pelo método aquoso-fenol a quente utilizando o método Westphal, Jann30 e analisaram o material purificado utilizando a página SDS, seguido de coloração de prata específica para os hidratos de carbono.31

resultados

isolamento de Pseudomonas aeruginosa e susceptibilidade aos antibióticos

de 175 amostras colhidas em doentes com infecções diferentes, 75 amostras (42, 8%) foram fenotipicamente positivas para a P. aeruginosa e positivo para o gene toxA.

os testes de susceptibilidade antimicrobiana revelaram que a P. aeruginosa isolada era completamente resistente à amoxicilina/ácido clavulânico e foi observada alta resistência à ampicilina/sulbactam (68%), ceftazidima (63%) e azetreonam (60%). Observou-se resistência moderada à tobramicina e à tigeciclina (50% cada). Além disso, foi demonstrada baixa resistência ao imipenem (6%) e ao meropenem (5,3%) (Figura 1). De acordo com os resultados da susceptibilidade aos antibióticos, os isolados resistentes foram classificados em MDR (96%), XDR (87%) e nenhum isolado foi classificado como PDR. Além disso, verificou-se que de 75 isolados, 16 isolados (21, 3%) mostraram resistência ao antibiótico da colistina com CIM ≥ 4µg/mL (variou de 8 a 256 µg/mL).

Figura 1 padrão de resistência aos antibióticos de todos os isolados P. aeruginosa isolados.

Determinação de Mcr-1 e Mcr-2 Genes

Mcr-1 gene foi detectado fenotipicamente no colistina-resistentes isolados pelo CDT, onde as diferenças entre os diâmetros das Zonas de inibição de colistina/EDTA e colistina discos foram medidos para ser ≥ 3mm. Os resultados mostraram que 6 isolados (37.5%) mostraram um aumento no diâmetro da colistina/EDTA disco de 3 a 10 mm, em comparação com colistina disco sozinho (Figura 2).

Figura 2 detecção fenotípica de isolados mcr positivos por ensaio combinado de difusão de disco (CDT). A): a estirpe mcr-1 positiva revelou um aumento do diâmetro da zona dos discos com colistina e EDTA ≥ 3 mm em comparação com a estirpe colistina isolada. B): O isolado mcr-1 negativo apresentou uma ligeira alteração (1 mm) no diâmetro da zona de inibição da colistina e do disco EDTA, em comparação com a colistina isolada.

Alteração do potencial Zeta

por outro lado, a alteração do teste do potencial zeta foi realizada como uma detecção fenotípica para genes MCR, mas os resultados não mostraram alteração significativa no potencial zeta excepto em 2 isolados.

detecção de Genes de Resistência

a detecção genética de genes mcr utilizando técnica convencional de PCR revelou que 8 (50%) isolados foram positivos para mcr-1, 6 deles foram positivos para CDT, enquanto 100% (16 isolados) foram negativos para mcr-2.

Susceptibilidade a Antibióticos de Colistina-Resistentes Isolados

A susceptibilidade da colistina-resistente isolar contra outros antibióticos foi determinado por Kirby-Bauer método de difusão de disco, os resultados mostraram que 100% dos isolados foram resistentes à Amoxicilina/clavulânico, enquanto a resistência à Ampicilina/sulbactam, Cefepime e Tobramicina foi 78.12%, 71.87% e 68.75%, respectivamente. A maioria dos medicamentos eficazes foram meropenem, imipenem e a ciprofloxacina (Figura 3)

Figura 3 resistência a Antibióticos padrão de colistina-resistentes isolados.

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Determinação de Bombas de Efluxo Inibição pelo MIC de Redução Usando o CCCP

estudando o efeito de 0,5 MIC do CCCP no MICROFONE colistina, verificou-se que apenas 3/16 isolados (P6, P8 & P16) (18.75%) mostrou uma redução no MICs de colistina ≥ 8 vezes (Tabela 1), na presença do CCCP. De resultados anteriores, o isolado no. Verificou-se que 16 tinham mecanismo de efluxo e gene mcr-1.

Tabela 1 Colistina-Resistentes Isolados, Alguns Possíveis Mecanismos de Resistência à Colistina e a Sua Susceptibilidade a Outros Antibióticos

Membrana Externa ficha de dados de segurança PÁGINA de Perfil

a Tabela 2 e a Figura 4 mostram que cinco bandas com pesos moleculares de 66.7, 56.06, 47.8, 40.18 e 23.6 KDa foram estáveis em isolados sensíveis e resistentes, enquanto uma banda com um peso molecular de 21 KDa foi encontrada apenas em estirpes resistentes à colistina que eram P1 (mcr-1 positivo) e P12 (mcr-1 negativo).

Tabela 2 Pesos Moleculares e a Quantidade % do Extraído Exterior Proteínas de Membrana de Colistina Resistente e Colistina Sensíveis de P. Aeruginosa

Figura 4 membrana Externa SDS-PAGE de colistina resistentes e sensíveis cepas. Faixa 1: Marcador proteico, Faixa 2 e faixa 3: estirpes resistentes à colistina (P1 & P12), faixas 4-6: estirpes sensíveis à colistina.

Lipopolysaccharide (LPS) SDS-PAGE

Lipopolysaccharide de prata manchada de SDS-PAGE mostrou que colistina-resistente mcr-1 negativos isolados (P3, P6 e P10) não mostrou LPS de bandas padrão (O-antigen se repete ou LPS core), que revelou a possibilidade de sua perda e a resistência de tais isolados para colistina. Por outro lado, a estirpe positiva mcr-1 resistente à colistina mostrou repetições do antigénio O (Figura 5, Faixa 5) que difere do padrão de repetições do antigénio o da estirpe sensível à colistina (Figura 5, Faixa 4), enquanto ambos mostraram o núcleo da LPS. Estes resultados podem indicar a presença de LPS modificados na estirpe mcr-1 positiva.

Figura 5 Padrão de bandas LPS. Faixas 1, 2 & 3: estirpes negativas mcr-1 resistentes à colistina (P3, P6 & P10, respectivamente), Faixa 4: estirpes sensíveis à colistina e faixa 5: estirpe positiva mcr-1 resistente à colistina (P1). As repetições do antigénio-o São encaixotadas e a seta refere-se ao núcleo LPS.

discussão

recentemente, surgem estirpes bacterianas patogénicas multirresistentes onde a maioria dos antibióticos disponíveis não são eficazes contra elas.6,32-36 as polimixinas consideraram o último recurso para o tratamento de infecções bacterianas multi-resistentes, por isso estudar o aparecimento de colistin-resistente foi uma necessidade. As polimixinas mostraram a sua actividade através da sua interacção electrostática entre elas e as moléculas carregadas negativamente no lípido A de bactérias Gram-negativas, resultando na desestabilização da membrana exterior e na fuga do conteúdo citoplásmico e Lise.37,38

verificou-se que a causa mais comum de resistência à polimixina é a modificação da LPS pela adição de 4 – amino-4-desoxi-L-arabinose (Lara4N) e Fosfoetanolamina (codificada por genes do tipo mcr) ou galactosamina ao lípido A do núcleo da LPS. Como resultado, uma diminuição na carga líquida negativa de resíduos de fosfato afeta a afinidade da polimixina para a membrana ou devido ao efeito dos sistemas regulatórios de dois componentes (TCSs) pmrA/pmrB e phoP/phoQ.39

no nosso estudo, detectámos resistência à colistina de acordo com os resultados dos microfones seguidos pelos seus testes para detectar a presença de mcr-1 Fosfoetanolamina transferase utilizando métodos fenotípicos e a detecção de mcr-1geno. Os métodos fenotípicos dependem do facto de a Fosfoetanolamina mcr-1 Ser a metaloproteína zinco. Assim, qualquer diminuição no zinco diminuirá os MICs da colistina em isolados positivos para mcr-1. Sendo a enzima de codificação mcr-1, a metaloproteína zinco permite a utilização do EDTA como quelante metálico para diminuir o zinco nos meios e afectar os MICs da colistina e os potenciais zeta dos isolados positivos mcr-1.40

nosso estudo mostrou alta prevalência de P. aeruginosa (42,8%). MDR P. aeruginosa correspondeu a 96% do total de isolados e 87% foi XDR. Prevalência elevada de P. aeruginosa resistente à colistina (21.3%) Foi detectada, o que pode ser resultado de insuficientes medidas de controle de infecção e uso indevido de antibióticos bactericidas nas unidades de cuidados intensivos de nossos hospitais do país. Além disso, a colistina é amplamente utilizada nos nossos países na promoção do crescimento de animais produtores de alimentos, especialmente na indústria avícola, enquanto os carbapenemas utilizados em casos de emergência.15 Assim, os carbapenems mostraram actividade observável contra os organismos testados em comparação com a colistina. Por outro lado, nossos resultados foram observados superiores aos relatados por Liassine et al25, que informou que um isolado de 300 isolados de diferentes espécies bacterianas foi identificado como P aeruginosa, com resistência a colistina e abrigando mcr-1 gene.

o teste combinado de difusão do disco (CDT) e a alteração do potencial zeta induzido pelo EDTA foram utilizados como métodos fenotípicos 41,42 para a detecção do gene mcr-1. Os resultados mostraram que nenhum isolado foi positivo para os isolados mcr-2 e 8 (50%) dos isolados resistentes à colistina foram positivos mcr-1, enquanto 2 isolados destes isolados mostraram RZP > 2, 5. Dos 8 isolados mcr-1 Positivos, 6 isolados foram positivos para a CDT e dois mcr-1 Positivos (estirpe No. P15 e P16) foram negativos para a CDT, O que pode ser devido à co-produção de um mecanismo adicional de resistência à colistina que interfere com o efeito do EDTA.21 As, it was found that isolate no. P16 (mcr-1 positivo e CDT negativo) foi positivo para efluxo.21,43-45 além disso, isolados resistentes à colistina que eram negativos para mcr-1 podem apresentar mutações devido à utilização a longo prazo de agentes antimicrobianos.Além disso, testámos isolados resistentes à colistina para detecção da presença de mecanismos de efluxo utilizando o CCCP (um inibidor da bomba de efluxo) e a diferença no perfil da membrana exterior e da Página SDP entre isolados sensíveis e resistentes. Nossos resultados revelaram a presença de mecanismo de efluxo entre 3 isolados, enquanto um deles era mcr-1 positivo. O perfil das proteínas da membrana exterior mostrou uma banda com um peso molecular de 21 KDa nos isolados resistentes P1 (positivo mcr-1) e P12 (negativo mcr-1 resistente à colistina). Além disso, verificou-se que as estirpes negativas mcr-1 resistentes à colistina não apresentavam padrão de bandas LPS (repetições do antigénio O ou núcleo do LPS), mas os isolados sensíveis à mcr-1 (P1) e à colistina apresentavam um padrão de repetições do núcleo do LPS, mas um padrão de repetições do antigénio O diferente. Machado et al20 studied the role of efflux pump in colistin resistance in Acinetobacter baumanni and found that efflux activity contributes to the heteroresistance of A. baumanni na ausência de mutação. Marjani et al43 mostraram que 22,5% da P. aeruginosa isolada eram resistentes à colistina, que está perto dos nossos resultados, e que mais de 50% dos isolados resistentes à colistina eram positivos para bombas de efluxo.

embora o mecanismo exacto de occisão bacteriana por colistina ou polimixinas não seja claramente conhecido, sabe-se que a sua ligação aos péptidos positivamente carregados e aos lípidos a negativamente carregados é um passo crítico. Então, testamos seu perfil de página SDS-LPS e uma diferença significativa entre as estirpes testadas foi observada. Num estudo realizado por Moffatt et al, 46 foi relatado que a perda de LPS resultou no aparecimento de A. baumanii resistente à colistina, que ocorre devido à inactivação de genes de biossíntese lipídica a (lpxA, lpxC, ou lpxD). Membrana externa de proteína padrões mostrou a presença de uma banda de peso molecular, que é de 21 KDa de colistina-resistentes isolados, que podem corresponder a OprH de acordo com o relatado por Nicas e Hancock47, que informou que OprH expressão desempenha um papel na resistência de Pseudomonas para polymyxins e EDTA porque OprH substitui divalent especificações e o exterior da membrana, resultando no bloqueio do polycationic antibiótico absorção. A descoberta anterior pode explicar por que a estirpe no. P1 (mcr-1 positivo) foi negativo para a CDT.

conclusões

o presente estudo demonstrou uma elevada prevalência de MDR e XDR P. aeruginosa, mostrando resistência à colistina entre os doentes admitidos na UCI que sofriam de diferentes infecções. Além disso, mostrou a presença de diferentes mecanismos que podem resultar em resistência à colistina. Isto indica a necessidade urgente de alterar as estratégias de tratamento com antibióticos tanto para os seres humanos como para os animais.