quantificar os níveis de ROS utilizando CM-H2DCFDA e HyPer

a baixos níveis, as espécies reactivas de oxigénio (ROS) podem actuar como moléculas sinalizadoras dentro das células. Quando a produção de ROS excede grandemente a capacidade dos sistemas antioxidantes endógenos, ou os níveis de antioxidantes são reduzidos, os níveis de ROS aumentam ainda mais. Este último está associado à indução de stress oxidativo e à transdução de sinais associada e caracteriza-se por alterações induzidas pela ROS na homeostase do redox celular e/ou efeitos prejudiciais nas biomoléculas (ex. ADN, proteínas e lípidos). Dada a complexidade dos mecanismos envolvidos na produção e remoção de ROS, em combinação com a falta de moléculas reporter que são verdadeiramente específicas para um tipo particular de ROS, quantificação de (sub)níveis celulares ROS é uma tarefa desafiadora. Neste capítulo descrevemos duas estratégias para medir ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).