anatomi och fysiologi

föreliggande studie genomfördes med regler och reglering för vård och användning av försöksdjur i djurhuset och respektive experiment godkändes av Central Animal Ethical Committee. 25 kvinnliga Schweiziska albinomöss med en genomsnittlig ålder 45dagar och 25 till 35gm vikt valdes slumpmässigt från djurhus, från olika avelskolonier. Dessa kvinnliga icke-gravida vuxna var avsiktligt copulated av manliga mus av samma sort med syfte att anskaffa 10 valpar av ytterligare generation. I plastpolykarbonatburet med rostfria pålägg placerades singel stark och kraftig heterozygot hane med singelhona i en atmosfär som kontinuerligt bibehölls vid 20-25c och 55 kcal 5% fuktighet, 12 timmar därefter ljus och mörk cykel. De kvinnliga mössen undersöktes för vaginal korsplugg och närvaro av välvisualiseringsplugg märktes som fastställd graviditet och tilldelad dag noll av gestational. På dag 7, 8 och 9 av graviditeten pluggade kvinnor för graviditet genom bukpalpation.

karakterisering av Agnps

Silver nanopartiklar från forskningsinköpskällor utvärderades för deras primära storlek genom TEM och för deras agglomerering i cellmedium genom fotonkorskorrelationsspektroskopi (PCC) och ultraviolett synlig (UV–Vis) spektroskopi, dynamisk ljusspridning och Zetapotential. Representativa tem-bilder av AgNps visades. TEM-bilderna av PVP-belagda AgNps dispergerades och suspenderades i 1.5M NaCl bekräftade den primära partikelstorleken som anges av tillverkarna. De obelagda silvernanopartiklarna fann heterogen fördelning inom intervallet 50 till 100 nm, de flesta av dem är runt 71 nm.

i fallet med suspenderat pulver AgNps visade TEM-bilder att i en vattenhaltig miljö klumpas silvernanopartiklarna och bildar stora aggregat, varav många är större än 50 nm. Detta resultat överensstämmer med resultaten av hydrodynamisk storleksfördelning som erhölls från den dynamiska ljusspridningsmetoden (zeta sizer). EDX-analyser bekräftades att endast elementärt silver presenterades i både kolloidala och torra pulverformiga AgNps. Enligt ICP – AES-resultaten var koncentrationerna av Ag-joner i de sura digererade bestånden av kolloidala och suspenderade pulver AgNps 1908,1 respektive 447,2 mgl-1. Även resultat av XRD-mönstret bekräftar kristalliniteten hos pulveriserad Typ AgNps och närvaro av elementärt kristallint silver, även andra faser, utom metalliskt silver, var inte närvarande i provet. Dessutom visade XRF-resultaten att renhet av pulveriserad Typ agnps var 97.86%.

exponering av agnps kolloidal lösning genom upprepade orala sondmatning

gravida möss administrerades dubbelt med normal saltlösning (Skamkontroll) som vehikel och i en dos av 5, 10, 15, 20 mg/kg b.w. gavs genom upprepade orala sondmatning, från 7 till 12 graviditetsdag med hjälp av en trubbig spetsböjd axelmatningsnål och skåpbil fäst. Skamkontrolldjur ingår i experiment med behandlade djur och obehandlade djur.

dissektion och urtagning

på GD 18 exterioriserades höger och vänster horn av livmodern hos gravid mamma efter ventral laparotomi under djup eter/kloroformbedövning och 250 färska uppsamlade dammar genom dissektion tvättades med kranvatten på petriskål för att avlägsna blod och fostervätska och torkades av filterpapper och dehydratiserades i 95% alkohol för 48hrs äntligen utsatt för 1% KOH för konsistensuttagning och Alizarinfärgningsprotokoll för korrekt visualisering av ben antingen normalt eller onormalt.13

metod (bedömning av skelettdysmorfologi med tekniken för urtagning och Alizarinfärgning)-:

Skelettdysmorfologistudie gjordes med tekniken för urtagning och Alizarinfärgning. Alla prover ( 50 valpar) från varje grupp dehydratiserades i 95% alkohol (rektifierad sprit) i 48 timmar och avlägsnades sedan och tvättades genom rinnande kranvatten och urtogs sedan med 1% KOH-lösning (KOH 1gm+100 ml d.w.). Efter att ha gjort ventral laparotomi avlägsnas vitala organ. Proverna doppades noggrant i massor av 1% kaliumhydroxid (KOH) – lösning i minst 2 till 4 dagar tills köttet, senan, musklerna och inälvorna var transparenta & klara och upplösa följt av kristallklar synlighet av ben och brosk. Varje dag ändrades lösningen när den blir missfärgad och avfall.

det kristallklara ben-och brosksynliga provet placerades sedan i samma 1% KOH och sedan tillsattes 6 till 8 droppar 1% Alizarinfläck för att färga den djupt lila röd. Lösningen skakades försiktigt några gånger i timmen. Sedan fortsatte samma procedur för ytterligare 2-3dagar för att ge djup lila röd färg till ben och brosk. För avlägsnande av eventuell överfärgning och utjämning av proverna passeras samma sedan genom 40%, 80% (40 ml glycerol+60 ml destillerat vatten, 80 ml glycerol+20 ml destillerat vatten) och 1 till 2 kristalltymol tillsatt för långsiktigt bevarande slutligen upprätthålls i 100% glycerol, serveras för fotografi & kraftfull handlinsobservation.

totalt samlades 250 foster från 25 mödrar från 1, 2, 3, 4 och 5 grupper av vilka alla prover exponerades för skelettdysmorfologiexperiment. 60 Foster observerades resorption.

statistik

procentuell skelettmissbildning utvärderades från varje grupp och bedömdes efter antal ben involverade i dysmorfologin och slutligen jämfördes procentsatserna mellan gruppen och inom gruppen för dosberoende teratogenitetsfaktor. Multi ANOVA och beskrivande statistik (post hoc-analys) test som används för detta ändamål.

Observation och fynd

andelen skelettdysmorfologi hittades högre och högst hos 15 mg agnps och 20 mg agnps/ kg kroppsvikt behandlade gruppvalpar (Tabell 1).

den lägre dosen agnps behandlade grupper (0,5 & 1 mg/kg kroppsvikt.) observerades mycket minimala procentandelar av skelettanomalier så dessa behandlade grupper betraktades nästan som kontrollgruppsfoster (Figur 1).

Figur 1 kontroll Foster Alizarin fläck dorsal vy (A) och lateral vy (B).

en av 5 mg agnps / kg kroppsvikt behandlad gruppvalp visade oossifierat 5: e sternalsegmentet från sternalstången och oossifierat Manumbriumsegment som diagnostiseras som sternalspalt. Andra foster visade maxillary och mandibular hypoplasi, oossifierad frontal, parietal och näsben, misslyckande av fusion av bakre segment av höftbenet, 10,11 och 12: e ribben sett rudimentär i vänster sida av ett av fostret. Frånvaro av mittaxel av 6 till 12: e ribben tillsammans med ökning av utrymmet mellan successiva revben betecknades i flera foster från olika grupper och diagnostiserades som ökat webbutrymme, frånvaro av kropp & spinous process ses från hela bröstkorgs vertebrala segment som diagnostiseras som neuralrörsdefekt av nära typ i 1% fall från denna behandlade gruppfoster. Andelen skelettdysmorfologi beräknad i denna grupp var 32% (Figur 2).

Figur 2 5 mg agnps-behandlad gruppfoster Alizarin fläck dorsalvy (A) och (B), sidovy (C) ventralvy (D) och dorsalvy (E)

de 10 mg agnps-behandlade gruppfostren visade skelettdysmorfologi i form av frånvaro av ländrygg och sakral Kota, frånvaro av höftben, allvarligt degenererade revben utan brosk, frontal och parietalben visade oossifierad och outvecklad, skolios observeras i bröstkorgs-och ländryggsregionen i ett av fostret, frånvaro av cervikal ryggkotor ses, maxillär hypoplasi, avslöjande av sagittal hyperplasi, vilket leder till en ökning av och koronala suturer ses också. Outvecklade ben i nedre extremiteterna ses på båda sidor av ett av fostret. Andelen skelettdysmorfologi beräknad i denna grupp var 44% (Figur 3).

Figur 3 10 mg agnps behandlad grupp Foster Alizarin fläck rygg vy (A, B).

bland 15 mg agnps behandlad Grupp 8 valpar observerades frånvaro av halskotor med frånvaro av 12 revben och resten av kotorna observerades outvecklade spinous process, Metatarsal kluven ses också på rygg vy av foten av en av fostret, oossifierat höftben på ventrala vy med frånvaro av segment & fibros ses också, oossifierat tinningbenet som finns fibrosed på sidovy av skallen, frånvaro av proximala segment av innominate ben, var ryggraden anomali ses med rudimentär 6: e och 9: e Rib och frånvaro av 10,11 och 12 observeras revben i ett av fostret, oossifierat parietalben sågs också, anencefali med skolios ryggkotor sågs i L1-L5 i ett av fostret, oossifierat höftben sågs, oossifierade scapulae på båda sidor sågs på dorsalvy av ett av fostret, frånvaro av brosk sågs från 6: e till 12: e ribben i ett av fostret. Andelen skelettdysmorfologi beräknad i denna grupp var 60% (Figur 4).

Figur 4 15 mg agnps-behandlad gruppfoster Alizarin fläck dorsalvy (A, B) och ventralvy (C)

den 20mg / kg b. w. Agnps-behandlade gruppfoster presenterades högsta procentandel av skelettdysmorfologi (76%). Skolios sågs i ländryggsregionen i ett av fostret, ett foster visade oossifierat occipitalt ben, oossifierat scapulae och höftben, stor fibros observeras i maxilla, frontal och parietal ben, samma observeras också i andra till sjätte segmentet av sternum. mellan 1: A och 2: a revben och 5: e till 8: e revben på vänster sida av en av fostret, även klyfta observeras i symfisis pubis led i ett av fostret , oossifierad mandibulär hypoplasi, frånvaro av spinös process med vågiga revben observeras också, i ett foster observerade vi fullständig fusion av 2: A till 8: e livmoderhalsen som tydligt skiljer sig från resten av 1: a livmoderhalsen. Vi observerade också mild skolios och oossifierad occipital och parietal ben och frånvaro av scapulae på höger sida av ett av fostret, hypo plastkotor ses också (Figur 5).

Figur 5 20 mg agnps behandlad grupp Foster Alizarin fläck rygg vy.