Cytokeratin 5/6 och cytokeratin 8/18 uttryck i trippelnegativa bröstcancer: clinicopathologic betydelse i sydasiatiska befolkningen

metoder

totalt 150 fall av TNBC valdes från register över patologiavdelningsarkiv. De kirurgiska proverna inkluderade modifierade radikala mastektomier, enkla mastektomier och breda lokala excisioner med sentinel lymfkörtel dissektion. Alla patienter genomgick operationer på Liaquat National hospital, Karachi från januari 2008 till December 2013 under en period av 6 år. Studien godkändes av institutionens forsknings-och etikprövningsutskott och informerat samtycke togs från alla patienter vid operationen. Hematoxylin-och eosin-färgade diabilder och paraffinblock av fall hämtades och nya sektioner skars vid behov. Slides av alla fall granskades av två ledande histopatologer och patologiska egenskaper som histologisk typ, tumörkvalitet, T-steg, N-steg, lymfovaskulär invasion, nekros, fibros, lymfocytisk infiltration (tumörinfiltrerande lymfocyter), närvaro av insitu-komponent, pagetoid spridning och dermal lymfatisk invasion utvärderades. Kliniska register över alla patienter granskades också från institutionella register för att utvärdera patientens ålder, historia av strålning och kemoterapi och återkommande status. Dessutom valdes representativa block i varje fall och ER, PR och Her2neu immunohistokemi utfördes för att bekräfta trippel negativ status.

ER, PR, Her2neu och Ki67 IHC utfördes med användning av DAKO-antikroppar som under, med EnVision Kazaki FLEX, högt pH DAKO-kit enligt tillverkarens protokoll.

1. FLEX monoklonal kanin anti-human östrogenreceptor alfa, klon EP1.

2. FLEX monoklonal mus anti-human progesteronreceptor klon PgR 636.

3. polyklonal kanin anti-humant c-erbB-2 onkoprotein.

4. FLEX monoklonal mus anti-human Ki67 antigen klon MIB-1.

Kärnfärgning av ER och PR i > 1% av cancercellerna ansågs vara positiva. För her2neu fick fall 1+, 2+ och 3 + enligt Cap-riktlinjerna. För tvetydiga fall (2+) utfördes FISH med hjälp av Path Vysion Her2neu probe kit enligt tillverkarens protokoll. Resultaten uttrycktes som förhållandet mellan her2neu-signaler jämfört med CEP17-signaler enligt ASCO / CAP-riktlinjerna.

Ki67 immunfärgning registrerades som kontinuerliga variabler baserat på andelen positiva färgade cancerceller. Vidare på grundval av Ki67 index, fall kategoriserades i < 15, 16-24, 25-44 och > 44% Ki67 index kategorier.

CK5 / 6 IHC utfördes med användning av FLEX monoklonal mus anti-human Cytokeratin 5/6, klon D5/16 B4 av DAKO envision metod enligt tillverkarens protokoll. Mellanliggande till stark cytoplasmatisk och membranfärgning i mer än 10% celler ansågs vara positiv. Svag till mellanliggande färgning i < 10% togs som fokal positiv, medan ingen färgning ansågs vara negativ (ytterligare fil 1: figur S1).

CK 8/8 IHC utfördes med användning av monoklonal mus anti-human Cytokeratin 5/6, klon D5 / 16 B4, enligt dako envision-metoden. Mellanliggande till stark cytoplasmatisk och membranfärgning i mer än 50% celler ansågs vara positiv. Svag till mellanliggande färgning (cytoplasmatisk, med förlust av membranreaktivitet) i 10-50% togs som fokal positiv, medan ingen färgning eller svag färgning i < 10% ansågs vara negativ (ytterligare fil 1: figur S1).

Återfallsstatus och uppföljning utvärderades genom att granska sjukhusjournalen. Total överlevnad togs som tid från kirurgisk excision till död eller sista uppföljning och sjukdomsfri överlevnad definierades som tid mellan kirurgisk excision och lokal återfall eller avlägsen metastas, död eller sista uppföljning.

statistiskt paket för samhällsvetenskap (SPSS 21) användes för datasamling och analys. Medel – och standardavvikelse beräknades för kvantitativa variabler. Frekvens och procentandel beräknades för kvalitativa variabler. Chi square applicerades för att bestämma association. Student t-test eller Mann whitney-test tillämpades för att jämföra skillnad i medel mellan grupper. P-värde 0,05 som signifikant. Överlevnadskurvor plottades med Kaplan-Meier-metoden och betydelsen av skillnaden mellan överlevnadskurvor bestämdes med log-rank-förhållande. P-värde 0.05 togs som betydande.

resultat

medelåldern för patienterna som deltog i studien var 48, 9 år och den vanligaste åldersgruppen var 31-50 år. De flesta av patienterna presenterades vid steg T2 med ett högt genomsnittligt ki67-index, dvs 46,9%. 42,7% av fallen hade nodal metastas. Även om 84% fall var av konventionellt invasivt duktalt karcinom, NST; emellertid var en betydande del av fallen av metaplastisk histologi (9,3%). Majoriteten av fallen var av hög grad (86,7% grad III). De flesta tumörer visar lymfocytisk infiltration och nekros. De flesta tumörerna saknar insitu-komponent (61%). Lokal återfall eller sen avlägsen metastas noterades i 17,8% av fallen (Tabell 1).

positivt (> 10%) CK5/6-uttryck noterades i 8% (12 fall) av TNBC medan 2, 4% (4 fall) visade fokalpositiv (< 10%) och 89, 3% (134) var negativa med CK5/6. Total förlust av CK8 / 18 uttryck sågs i 4,7% (7 fall) medan 32,7% (49 fall) avslöjade fokal förlust av CK8/18 och 62,7% (94 fall) visade intakt normalt uttryck av CK8/18. Ingen signifikant association av CK5/6 och CK8 / 18 med olika klinikopatologiska parametrar observerades (Tabell 2 och 3). På samma sätt noterades ingen signifikant association av CK 5/6 och CK8/18 med återkommande status hos patienterna (ytterligare Fil 2: Figur S2).

diskussion

i den aktuella studien bedömde vi uttryck av en basal (CK5/6) och en luminal markör (CK8/18) i TNBC i vår befolkning och fann att; 8 och 2,7% av TNBC visade positivt och fokalt positivt uttryck av CK5/6 respektive 4,7 och 32.7% av TNBC avslöjade fullständig förlust och fokal förlust av CK 8/18 uttryck respektive. I alla de fall där fokalförlust CK8 / 18 noterades var det förlust av membranreaktivitet medan cytoplasmatisk färgning behölls i få celler. Emellertid observerades ingen signifikant samband mellan dessa onormala uttrycksmönster av cytokeratiner med olika kliniska och prognostiska parametrar för TNBC i vår population. Bröstcancer är en av de vanligaste maligniteterna i sydasiatiska befolkningen, särskilt i ung ålder .

genuttrycksprofilering definierar basala bröstcancer som de som uppvisar basala kluster av gener som inkluderar EGFR, basal cytokeratin 5/6, C-kit, proliferationskluster och lågt uttryck av Her2neu och hormonreceptorrelaterade gener . Men basal bröstcancer är inte en enda enhet och den innehåller flera subtyper inklusive två basala liknande subtyper (BL1 och BL2), mesenkymala, mesenkymala stamliknande, immunmodulerande och luminala androgen subtyper . Dessutom har interferonrika och claudin-låga subtyper också definierats . Subtyping av basal bröstcancer rekommenderas inte av ASCO/CAP. CK 5/6-uttryck varierar från 24 till 72% i TNBC som rapporterats i tidigare studier . Andra forskare har också föreslagit prognostisk betydelse av CK 5/6 i nodnegativa bröstcancer . Nielson et al. föreslog att CK5 / 6 positiv bröstcancer har sämre prognos oberoende av tumörkvalitet, T-Stadium och hormonell/Her2neu-status . På samma sätt i en annan studie föreslogs att CK5/6 är markör för kortare sjukdomsfri överlevnad, oberoende av andra prognostiska faktorer för bröstcancer . Inanc et al. rapporterade 50.5% uttryck av CK5 / 6 med positiv korrelation av CK5/6 TNBC med nodal metastas och tumörstorlek . I motsats till dessa studier fann vi emellertid ett lågt uttryck av CK5/6-uttryck i TNBC i vår studerade population, vilket kan representera en annan genomisk profil av TNBC i vår population, som måste undersökas i ytterligare studier. Prognostisk roll för CK5 / 6 har föreslagits i andra cancerformer i kroppen .

CK8 / 18 är ett luminalt cytokeratin som huvudsakligen uttrycks i bröstepitel i ett membranöst och cytoplasmiskt mönster. Cimpean et al. definierade dessa olika mönster av CK8 / 18 i bröstcancer; diffus cytoplasmatisk, membranös och kombinerad cytoplasmatisk och membranös .Vissa forskare har föreslagit att förlust av CK8/18-uttryck/låg CK8 / 18 är förknippad med sämre prognos och hög risk för metastasering . Men vi hittade ingen prognostisk betydelse för förlust av CK8/18-uttryck med olika prognostiska faktorer och återfall i TNBC.

vi fann att 32,7% av TNBC visar fokal förlust av uttryck CK8 / 18. I alla dessa fall var det förlust av membranreaktivitet av CK8/18 medan cytoplasmatisk färgning behölls i få celler. Aiad et al. i en studie med 70 fall av bröstcancer fann onormalt uttryck av CK8 / 18 (cytoplasmatisk) hos 70% av egyptisk bröstcancer, vilket tyder på mycket heterogenitet i cytokeratinuttryck av bröstcancer i olika delar av världen .