Klastogen aktivitet av 2-klorodeoxyadenosin i somatiska däggdjursceller

mutagenes
forskningsartikel

Klastogen aktivitet av 2-klorodeoxyadenosin i somatiska däggdjursceller

Gilmara Ausech AntonucciI; Katarina han TakahashiI; II

Iuniversitetet i S. S. Paulo, Faculdade de Medicina de Ribeir U. S. Preto, Departamento de Gen U. S., Ribeir U. S. Preto, SP, Brasilien.
IIUniversidade av S Jacobo Paulo, fakulteten för filosofi, vetenskap och bokstäver i Ribeir Jacobo Preto, Institutionen för biologi, Ribeir Jacobo Preto, SP, Brasilien.

korrespondens

abstrakt

av basanalogen 2-klorodeoxiadenosin (2-CdA) som används för behandling vid kronisk resistent, och de avancerade lymfoproliferativa störningarna, är cytotoxisk för både delande och icke-delande lymfocyter. Det nuvarande arbetet utvärderade den klastogena potentialen för detta läkemedel in vitro i humana lymfocyter i kultur och in vivo i BALB/c-möss benmärgsceller. I humana lymfocyter studerades den klastogena effekten av 2-CdA i G1 -, S-och G2-faser i cellcykeln med användning av tre olika koncentrationer (10, 20 och 40 mg/mL). De analyserade slutpunkterna inkluderade mitotiskt index (MI), proliferationsindex (PI), systerkromatidutbyte (SCE) och kromosomavvikelse (CA). Statistisk analys med ett varians (ANOVA) – test visade en signifikant ökning (p < 0.05) i ca-frekvenser för celler behandlade under S-fasen, men MI varierade inte. De testade koncentrationerna gav inte en signifikant ökning av medelfrekvensen för SCEs, och de förändrade inte heller cellpi i G1-och S-faserna. De testade koncentrationerna in vivo var 0,25, 0,375 och 0,5 mg/kg kroppsvikt. I denna analys observerades inte förändringar i CA-frekvenser och MI vid de testade dosnivåerna. Därför indikerar resultaten en klastogen effekt av 2-CdA i humana lymfocytkulturer.

nyckelord: humana lymfocyter, 2-CdA, kromosomavvikelser, SCE, cellcykel.

introduktion

Purinanaloger är mycket aktiva vid behandling av lymfoproliferativa störningar (Pott-Hoeck och Hiddemann, 1995). Kladribin, 2-klorodeoxyadenosin (2-CdA), är en nukleosidanalog med en halogenatom ersatt vid position 2 i sin purinring, vilket ger resistens mot deaminering med adenosindeaminas (ADA). 2-CdA är ett läkemedel av val vid behandling av hårig cell leukemi, men det är också mycket effektivt vid andra lågkvalitativa lymfoida maligniteter, inklusive kronisk lymfocytisk leukemi (CLL). Rapporterna i litteraturen har visat att 2-CdA ger liknande complete response (CR) – hastighet och total responsfrekvens (OR) för fludarabin, men påverkan av båda agenterna på överlevnadsgraden för patienter med KLL är fortfarande osäker. CR-hastigheten inducerad av 2-CdA är signifikant högre än hos patienter som behandlas med konventionell kemoterapi (Robak, 2001). 2-CdA är en annan ny kemoterapeutisk purinanalog med specifik toxicitet för lymfocyter (Schrimer et al., 1997). Cytotoxiciteten förekommer i prolifererande och vilande celler, vilket resulterar i händelser såsom hämning av DNA och proteinsyntes, såväl som induktion av apoptos (Robertsson et al., 1993). Trots toxiciteten har goda resultat i terapeutiskt svar erhållits, och detta läkemedel är huvudalternativet vid tricoleukemibehandling där patienter visar hårig cell leukemi (HCL) (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993).

Adenindeoxynukleosider inducerar apoptos i vilande lymfocyter och är användbara läkemedel för behandling av indolenta lymfoproliferativa sjukdomar. Flera mekanismer har föreslagits för att förklara toxiciteten hos deoxyadenosin och dess analoger i vilande celler, inklusive den direkta bindningen av dATP till den pro-apoptotiska faktorn Apaf-1 och aktiveringen av caspase-9 och -3 vägar (Genini et al., 2000).

en patient med akut myeloid leukemi behandlad med 2-CdA och Ara-C presenterade försenad märgåterhämtning, bihåleinflammation och Candida tropicalis sepsis. Hon utvecklade multisystem organsvikt och dog 1 månad efter initiering av AML-behandling. Obduktion, begränsad till bröstet och buken, avslöjade spridd candidiasis som involverade lungorna, hjärtat, levern, njurarna och mjälten (Mathew et al., 2000).

Zwaan et al. (2002) observerade att patienter med t (9: 11) verkade vara signifikant känsligare än andra AML-patienter för följande läkemedel: cytarabin (median: 2, 9 gånger), doxorubicin (4, 5 gånger), mitoxantron (8, 0 gånger), 2-klorodeoxyadenosin (10, 0 gånger).

nukleosidanaloger (NA) såsom cytosinarabinosid, fludarabin, kladribin och gemcitabin är väsentliga komponenter i AML (akut Myeloid leukemi) induktionsterapi; de är också effektiva för att behandla lymfoproliferativa störningar och har använts vid behandling av vissa fasta tumörer. Dessa viktiga föreningar delar några gemensamma egenskaper, nämligen när det gäller att kräva transport av specifika membrantransportörer och metabolism och interaktion med intracellulära mål. De skiljer sig emellertid med avseende på typerna av transportörer och deras preferensinteraktion med vissa mål som kan förklara effektiviteten mot snabba prolifererande tumörer (Galmarini et al., 2001).

med tanke på denna information är det viktigt att bedöma den klastogena potentialen hos 2-CdA, på grundval av rapporter om att detta läkemedel inducerar cytotoxicitet (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993) och DNA-enkelsträngsbrott (Liliemark och Juliusson, 1994). Syftet med denna studie var att utvärdera kapaciteten hos detta kemoterapeutiska medel för att inducera kromosomskador i humana lymfocyter och benmärgsceller från BALB/c-möss.

material och metoder

kemiskt medel

antitumoral 2-klorodeoxyadenosin tillhandahölls vänligt av Kemoterapicentret för Hospital de cl Askornicas från Ribeir Bisexo Preto School of Medicine (Faculdade de Medicina de Ribeir Exceptiono Preto – USP) för in vitro-och in vivo-experimenten.

humana perifera blodlymfocyter

blodprover erhölls från sex icke-rökare friska frivilliga (tre kvinnor och tre män) i åldern 25 till 35 år och lämnades till behandling under G1 -, S-och G2-faserna i cellcykeln, för analys av kromosomavvikelse (CA) och mitotiskt index (MI). Dessutom användes lymfocyter från tre individer (två kvinnor och två män) för systerkromatidbyte (SCE) och proliferationsindex (PI) analys. Lymfocyter odlades i 78% rpmi-1640 medium (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) kompletterat med 20% fetalt kalvserum (Cultilab, Brasilien) och tillsatt med penicillin (5 mg/mL) och streptomycin (10 mg/mL). Celler stimulerades med 2% fytohemagglutinin (Life Technologies, Grand Island, NY). För varje 5 mL odlingsmedium tillsattes 1 mL plasma, och kulturerna inkuberades vid 37 C i 52 timmar för ca-analys. 2-CdA-lösningar späddes i avjoniserat vatten vid följande koncentrationer: 10, 20 och 40 mg/mL odlingsmedium, enligt Preston et al. (1987). En negativ kontroll inkluderades i alla experiment. Glidberedning och färgning utfördes med standardtekniker (Moorhead et al., 1960). Diabilder för analys av systerkromatidutbyte (SCE) och proliferationsindex (PI) erhölls från parallella kulturer till vilka 5-Bromo-2′-deoxyuridin (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg / mL) tillsattes förutom 2-CdA. Differentiell syster-kromatidfärgning erhölls genom fluorescens plus Giemsa-tekniken med användning av Hoechst 33258 (Calbiochem – Behring Corp.; 0,05 mg/mL Hanks lösning) och 5% Giemsa (Merck). Denna metod är en modifiering av de som publicerats av Korenberg och Freedlender (1974) och Perry and Wolff (1974). Slides utsattes för vitt ljus över natten. Metafaspreparat med 46 kromosom i 1-kromosomer analyserades i ett blindtest. Kromosomerna ritades schematiskt för SCE-poäng, liksom för CA-analys.

behandlingsprotokoll

2-CdA-behandling av lymfocytkulturer i olika faser av cellcykeln

kromosomavvikelser (CAS)

efter sju timmar initiering av odling (G1-fas) behandlades lymfocytkulturerna med 2-CdA i 1 timme vid 37 kg C i odlingsmedium utan serum. Cellerna fixerades 52 h efter initiering av kultur. Efter behandling med 2-CdA tvättades cellerna två gånger i serumfritt medium och reinkuberades i fullständigt medium. För behandling vid S-fas behandlades 24 h-kulturer med 2-CdA i 6 timmar. Cellerna tvättades två gånger i serumfritt medium, reinkuberades i fullständigt medium och fixerades efter 52 timmars inkubation. För G2fasbehandling behandlades 69 h-kulturer med 2-CdA för 3 h och cellerna fixerades efter 72 h inkubation. Kolchicin (Merck 0,016%) tillsattes 1,5 h före fixering. För att bestämma MI fick 1000 celler poäng per kultur och 100 metafaser från varje kultur analyserades för CA, totalt 6000 celler respektive 600 metafaser för varje behandling.

Systerkromatidutbyten (SCEs)

Lymfocytkulturer från 4 friska donatorer (två honor och två män) behandlades med 5-BrdU (10 kg/mL) i början av inkubationen, och när celler nådde G1-fasen (7 timmar efter initiering av odling) tillsattes 2-CdA plus 5-BrdU för 1 timme vid 37 kg C i odlingsmedium utan serum. Efter behandling tvättades cellerna två gånger i serumfritt medium, 5-BrdU tillsattes igen och sedan återfördes cellerna i fullständigt medium. För behandling i S-fasen behandlades 24 h-kulturer med 2-CdA plus 5-BrdU i serumfritt medium för 6 h. efter behandlingen tvättades cellerna två gånger i serumfritt medium och reinkuberades i fullständigt medium med 5-BrdU. För SCE-och PI-analys fixades cellerna (G1-och S-faser) 72 h efter initiering av odling. Femtio andra divisionsmetafaser per kultur fick poäng för SCE, och hundra metafaser från varje kultur fick poäng för första, andra och tredje celldelning, totalt 200 metafaser respektive 400 celler per behandling. PI erhölls med användning av följande ekvation:

PI =

där M1 och M3 är siffrorna för första respektive tredje Divisionens metafaser (Degrassi et al., 1989).

djur

de djur som användes var BALB/c-möss (Mus musculus), erhållna från Animal House of School of Medicine i Ribeir Sacorico Preto.

In vivo-test på BALB / c-möss benmärgsceller

möss som väger cirka 30 g (5-6 veckor) delades in i grupper om 8 djur (4 män och 4 kvinnor) och behandlades genom intraperitoneal injektion med 0.5 mL / slutlig volym 2-CdA-lösning utspädd med destillerat vatten i följande koncentrationer: 0,25, 0,375 och 0,5 mg/kg kroppsvikt. Tjugotvå timmar efter behandling (dvs två timmar före offer) injicerades mössen med 0,3 mL/slutlig volym av en 1% kolchicinlösning (Sigma) och dödades genom eterinhalation 2 timmar senare. Den negativa kontrollgruppen fick destillerat vatten 0,5 mL/slutlig volym/djur och den positiva kontrollgruppen fick cyklofosfamid (CP), 25 mg / kg kroppsvikt. Benmärgspreparat för metafasceller erhölls med standardtekniken (Ford och Hamerton, 1956). Slides analyserades i ett blindtest och 100 metafaser per djur ritades schematiskt. MI erhölls genom att räkna antalet mitotiska celler i 1000 celler analyserade per djur och 100 celler fick poäng för CA.

statistisk analys

Envägsanalys av varians (ANOVA) utfördes på antalet onormala metafaser och totalt antal CA, MI, SCEs och PI, med beräkningar av P-värdena för varje fas i cellcykeln. Närhelst p < 0.05 hittades, medelvärdena för varje behandling jämfördes med Student-Newman Keuls-testet. Den statistiska analysen utfördes med hjälp av Sigma Stat (Jandel Corporation) mjukvarupaket.

resultat

humana lymfocyter

perifera blodlymfocyter behandlades med olika koncentrationer (10, 20 och 40 mg/mL) av 2-CdA i G1 -, S-och G2-faserna i cellcykeln. Kromosomavvikelser (CA) och mitotiskt index (MI) analyserades i behandlade lymfocyter från sex friska individer (tre kvinnor och tre män) (Tabell 1). För de celler som behandlades under S-fasen observerades en signifikant ökning av CA-frekvenser (p < 0,05) vid alla koncentrationer, jämfört med kontrollfrekvenserna. De vanligaste typerna av kromosomavvikelse som observerades var kromatid-och isokromatidgap (data visas inte) och raster, följt av dubbla minuter, dubbla fragment och enstaka fragment. För celler som behandlades under G1-och G2-faserna visade CA-frekvenserna ingen statistiskt signifikant skillnad mellan de behandlade kulturerna och kontrollvärdena. Även om det fanns en liten variation för MI, observerades ingen statistiskt signifikant skillnad (p < 0, 05) i någon av behandlingarna i förhållande till kontrollindexen.

medelfrekvenserna för systerkromatidbyte (SCE) och proliferationsindex (PI) bestämdes i fyra kontroller och i lymfocytkulturer behandlade med 2-CdA under G1-och S-faserna i kulturer skördade efter 72 timmar (Tabell 2). De testade koncentrationerna (10, 20 och 40 mg/mL) orsakade ingen signifikant ökning av medelfrekvensen för SCEs, och de förändrade inte heller cellpi under G1-och S-faserna (Tabell 2).

Balb / c mus benmärgssystem

CA-och MI-frekvenser analyserades i benmärgsceller från 8 Balb/c-Möss (4 kvinnor och 4 män) efter intraperitoneal behandling med 0, 25, 0, 37 och 0, 50 mg/kg kroppsvikt av 2-CdA (tabell 3). I in vivo-analysen visade 2-CdA inte cytotoxiska effekter för någon av de testade doserna avseende CA-frekvenser såväl som MI-värden när alla behandlingsgrupper jämfördes. De flesta avvikelser var raster av kromatidtyp. Ingen signifikant skillnad (p < 0,05) hittades antingen bland djuren eller mellan män och kvinnor för de analyserade parametrarna.

diskussion

under de senaste åren har flera studier visat den antiproliferativa effekten av de läkemedel som används vid behandling av lymfoida maligniteter. 2-CdA är en basanalog som används vid kemoterapi för en viss typ av leukemi, den håriga cellleukemi. Det finns också vissa data som visar att 2-CdA kan användas i kombination med andra läkemedel vid behandling av eldfasta och återkommande lågkvalitativa icke-Hodgkins lymfom (NHL) (Laurencet et al., 1999; Robak et al., 1999). I föreliggande arbete utfördes en cytogenetisk studie in vitro för att utvärdera den klastogena potentialen hos 2-CdA i humana lymfocyter avseende induktion av CA och SCE. Enligt Moore och Bender (1993) kan strukturella CAs leda till förlust av kromosomalt material. Den typ av ca som bildas beror på arten av lesionen som induceras i DNA och cellcykelfasen under vilken cellerna exponerades (Natarajan et al., 1996).

Lymfocytkulturer behandlades med tre koncentrationer av 2-CdA (10, 20 och 40 mg/mL) under olika faser av cellcykeln. Den klastogena effekten av läkemedlet demonstrerades av den signifikanta ökningen (p < 0,05) i CA-frekvenserna för alla koncentrationer som testades under S-fasen av cellcykeln. För behandling under denna fas lämnades 2-CdA i 6 timmar i kulturerna. För medel som verkar under en specifik fas av cellcykeln kan administreringssekvensen bestämma effekten och toxiciteten hos en kombinationsterapi (Smorenburg et al., 2001).

dessa resultat överensstämmer med de som rapporterats av andra författare (Carson et al., 1983), vilket tyder på att 2-CdA införlivas i DNA-producerande enkelsträngbrott (SSBs). SSB kan uppstå både direkt, från sönderdelning av skadade sockerarter, eller indirekt, via enzymatisk klyvning av fosfodiester-ryggraden. Direkta SSB: er uppstår främst från en attack av fria radikaler såsom reaktiva syrearter, medan indirekta SSB: er huvudsakligen är normala mellanprodukter av DNA-bas excisionsreparation (BER). SSB är också de vanligaste lesionerna som induceras av exogena genotoxiner, såsom joniserande strålning, alkyleringsmedel och topo1-giftet camptotecin och dess anticancerderivat (Caldecott, 2004).

vissa rapporter visar att basanalogen behöver en längre tid för fosforylering att inträffa (Gandhi et al., 1997). Denna mekanism kan förklara den ökade frekvensen av totala kromosomavvikelser under S-fasen av cellcykeln. Samma mekanism förekommer i celler behandlade med mitomycin C, en S-beroende förening, som kräver DNA-replikation för att omvandla DNA-skador till kromosomavvikelser (Evans och Scott, 1964; Traganos et al., 1980). Andra antitumorala medel representerar samma mekanism och verkan av 2-CdA, såsom fludarabin och 1-b-D-arabinosylcitosin (ara-C).

cytotoxiska nukleosidanaloger har en bred klinisk användning. De var bland de första kemoterapeutiska medlen som användes vid behandling av maligna sjukdomar. Anticancernukleosiderna innefattar analoger av fysiologiska pyrimidin och purinnukleosider. Dessa medel fungerar som antimetaboliter, konkurrerar med naturliga nukleosider under DNA-eller RNA-syntes och som hämmare av nyckelcellenzymer (Szafraniec et al., 2004), är S-specifika och måste fosforyleras för att aktivera trifosfater (Plunkett et al., 1980). Under S-fasen av cellcykeln, när det genetiska materialet dupliceras av DNA-replikationsmaskinen, är celler särskilt sårbara för genotoxisk förolämpning. Medan G1-och G2/M-kontrollpunkter arresterar cellcykelprogression vid väldefinierade punkter genom hämning av cyklinberoende kinaser, intra-S-fas kontrollpunkter är kända för att inträffa när som helst inom S-fasen och involverar flera signalvägar (Sidorova och Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)

det är mycket viktigt att analysera mekanismen för läkemedelssvar under olika faser av cellcykeln. Den höga nivån av kromosomal lesion kan bero på cytotoxiciteten hos 2-CdA orsakad av dess omvandling till 2-CdATP, vilket inducerar hämning av DNA-syntes och DNA-reparation, vilket involverar enzymerna ribonukleotidreduktas och DNA-polymeraser. Denna förening visar resistens mot adenosindeaminas (ADA) aktivitet, som tilldelas av en kloratom och ersättning av väte vid position 2 i purinringen adenosin (Baltz och Montello, 1993).

SCE anses ofta vara en parameter för att bedöma Genotoxicitet, eftersom deras frekvens tydligt ökas genom exponering för många mutagena och cancerframkallande kemikalier. I föreliggande experiment, frekvenserna av SCEs i kulturer behandlade med 2-CdA presenterade en liten ökning i förhållande till kontrollkulturer. Ökningen som observerades under båda faserna varierade inte signifikant.

eftersom många läkemedel aktiveras efter att de metaboliserats rekommenderas in vivo mutagenicitetstester för att bedöma den klastogena aktiviteten hos de föreningar som kräver metabolisk aktivering. Ett sådant tillvägagångssätt ger också liknande förhållanden som de som finns hos människor (Legator och Ward Jr., 1991). Även om det finns skillnader mellan gnagare och människor, rekommenderas att någon bedömning bör baseras på både in vitro-och in vivo-studier, och inte bara på någon av dem (Huggett et al., 1996).

i den aktuella studien analyserades den klastogena effekten av 2-CdA också i BALB/c-möss benmärgsceller vid koncentrationer av 0, 25, 0, 375 och 0, 5 mg/kg kroppsvikt. Resultaten visade att 2-CdA inte var effektivt för att inducera kromosomavvikelser. Bristen på effekt in vivo kan bero på den begränsade mängden 2-CdA tillgänglig, eftersom den donerades under utspädda förhållanden. Genotoxiska effekter av basanalogen gemcitabin har rapporterats i benmärgsceller från mus med hjälp av testsystemen för mikrokärnor och kromosomavvikelser. Aydemir och Bilaloglu (2003) visade att gemcitabin inte inducerade någon signifikant CAs och varken orsakar minskning av MI med en 6-timmars behandlingsperiod vid doser av 2, 0, 4, 0 och 8, 0 mg / kg kroppsvikt, jämfört med den negativa kontrollen; däremot ökade frekvensen av totala CAs signifikant med gemcitabin (p < 0, 0001) med en 24-timmars behandlingsperiod med samma doser.

Sammanfattningsvis visade 2-CdA en klastogen effekt i humana lymfocytkulturer behandlade in vitro under cellcykelns S-fas, men ingen signifikant klastogen effekt observerades i celler behandlade under G1-och G2-faserna. I in vivo-analysen på möss visade 2-CdA ingen klastogen effekt vid de testade dosnivåerna.

bekräftelser

vi är tacksamma för Prof. Dr. A. T. Natarajan, Dr. Elza T. Sakamoto Hojo och Dr. Lusania G. Antunes för värdefulla kommentarer om manuskriptet och till Luiz Augusto da Costa Jr., Silvio A. dos Santos och Sueli A. Neves för värdefull teknisk hjälp. CAPES och FAPESP process n. 99/10643-7 stödde denna forskning. Forskningsetiska Utskottet godkände projektet (Process: CONEP n. 25000.074430 / 2001-88).

Andreassen PR, Lohez OD och Margolis RL (2003) G2 och spindelmontering checkpoint anpassning, och tetraploidi gripande: konsekvenser för inneboende och kemiskt inducerad genomisk instabilitet. Mutat Res 532: 245-53.

Aydemir N och Bilaloglu R (2003) Genotoxicitet av två cancerläkemedel, gemcitabin och topotekan, i benmärg i mus in vivo. Mutat Res 537: 43-51.

Baltz JK och Montello MJ (1993) Kladribin för behandling av hematologiska maligniteter. Kliniskt Apotek 12: 805-813.

Caldecott KW (2004) DNA-enkelsträngsbrott och neurodegeneration. DNA-reparation (Amst) 3:875-82.

Carson DA, Wasson DB, Taetle R och Yu A (1983) specifik toxicitet för 2-klorodeoxyadenosin mot vilande och prolifererande humana lymfocyter. Blod 62: 737-743.

Degrassi F, de Salvia R, Tanzarella C och Palitti F (1989) induktion av kromosomavvikelser och SCE av camptothecin, en hämmare av däggdjurstopoisomeras I. Mutat Res 211:125-130.

Evans HJ och Scott D (1964) påverkan av DNA-syntes på produktionen av kromatidavvikelser med röntgenstrålar och maleinhydrazid i Vicia faba Genetics 49:17-38.

Ford CE och Hamerton JL (1956) en kolchicin hypotonisk citratkvashsekvens för däggdjurskromosomer. Teknik 3: 247-251.

Galmarini CM, Mackey JR och Dumontet C (2001) nukleosidanaloger: Mekanismer för läkemedelsresistens och reverseringsstrategier. Leukemi 15: 875-890.

Gandhi V, Huang P, Chapman AJ, Chen F och Plunkett W (1997) införlivande av fludarabin och 1-beta-D-arabinofuranosylcytosin 5 ‘ trifosfater genom DNA-polymeras alfa: affinitet, interaktion och konsekvenser. Clin Cancer Res 3: 1347-1355.

Genini D, Adachi S, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA och Leoni LM (2000) deoxyadenosinanaloger inducerar programmerad celldöd i kroniska lymfocytiska leukemiceller genom att skada DNA och genom att direkt påverka mitokondrierna. Blood 96:3537-3543.

Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E och Koeman JH (1996) jämförande metoder för toxicitetstestning. Mat Chem Toxicol 34: 183-92.

Korenberg JR och Freedlender EF (1974) Giemsa-teknik för detektering av systerkromatidutbyten. Kromosom 48: 355-360.

Laurencet FM, Zulian GB, Guetty-Alberto M, Iten PA, Betticher DC och Alberto P (1999) Kladribin med cyklofosfamid och prednison vid hantering av lågkvalitativa lymfoproliferativa maligniteter. Br J Hematol 79: 1215-1219.

Legator MS och Ward Jr JB (1991) användning av in vivo genetiska toxicitetsdata för riskbedömning. Mutat Res 250: 457-465.

Liliemark J och Juliusson G (1994) 2-kloro-2′-deoxyadenosin-kliniska, biokemiska och farmakokinetiska överväganden. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 42: 7-10.

Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT och Raimondi SC (2000) dubbelminutkromosomer och c-MYC-förstärkning hos ett barn med sekundärt myelodysplastiskt syndrom efter behandling för akut lymfoblastisk leukemi. Leukemi 14: 1314-5.

Moore RC och Bender MA (1993) tidssekvens av händelser som leder till kromosomavvikelsebildning. Miljö Mol Mutagen 22: 208-213.

Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battipps DM och Hungerford DA (1960) Kromosomberedning av leukocyter odlade från perifert blod. Exp Cell Res 20: 613-616.

Natarajan AT, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez i, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen S och Xiao Y (1996) mekanismer för induktion av kromosomavvikelser och deras detektion genom in situ hybridisering. Mutat Res 372:247-58.

Perry PE och Wolff S (1974) Ny Giemsa-metod för differentiell färgning av systerkromatider. Natur 251: 156-158.

Plunkett W, Chubb S, Alexander L och Montgomery JA (1980) jämförelse av toxicitet och metabolism av 9-b-d-arabinofuranosyl-2-fluoroadenin och 9-b-d-arabinofuranosyladenin i humana lymfoblastoidceller. Cancer Res 40: 2349-55.

Pott-Hoeck C och Hiddemann W (1995) Purinanaloger vid behandling av lågkvalitativa lymfom och kroniska lymfocytiska leukemier. Ann Oncol 6:421-433.

Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee AF och Shelby M (1987) Däggdjur in vivo cytogenetiska analyser. Analys av kromosomavvikelser i benmärgsceller. Mutat Res 189: 157-65.

Robak T (2001) Kladribin vid behandling av kronisk lymfocytisk leukemi. Leuk Lymfom 40:551-564.

Robak t, g except-Tybor J, Urbanska h och Krikowski E (1999) Kombinationsregim av 2-klorodeoxiadenosin (kladribin), mitoxantron och dexametason (cmd) vid behandling av eldfast och återkommande låggradigt icke-Hodgkin-lymfom. Leuk Lymfo 32: 359-363.

Robertsson LE, Chubb S, Meyn RE, Story M, Ford R, Hitelman WN och Plunkett W (1993) induktion av apoptoscelldöd vid kronisk lymfocytisk leukemi med 2-kloro-2′-deoxyadenosin och 9-b-d-arabinosyl-2-fluoradenin. Blod 81:143-150.

Schrimer M, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J och Konwalinka G (1997) säkerhetsprofilen för lågdos kladribin vid eldfast reumatoid artrit. En pilot rättegång. Scand J Rhematol 26:376-379.

Sidorova JM och Breeden LL (2003) äldre G1/S-övergångar och genomisk instabilitet: ursprungsanslutningen. Mutat Res 532: 5-19.

Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M och Verweij J (2001) kombinationskemoterapi av taxaner och antimetaboliter: dess användning och begränsningar. Eur J Cancer 37: 2310-23.

Szafraniec SI, Stachnik KJ och Skierski JS (2004) nya nukleosidanaloger vid behandling av hematologiska störningar. Acta Pol Pharm 61:223-32.

Tallman MS, Hakimian D, Hogan D och Petersen L (1993) 2-Klorodeoxyadenosin vid behandling av hårcellsleukemi (HCL): detektion av minimal restsjukdom (MRD) genom immunfärgning (IS). Presenterades vid 8: e symposiet om molekylärbiologi av Hematopoiesis i Basel, 9-13 juli.

Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E och Kaul K (1992) en enda cykel med 2-klorodeoxyadenosin resulterar i fullständig remission hos majoriteten av patienterna med hårig cell leukemi. Blod 80: 2203-2209.

Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz Z och Melamed MR (1980) effekter av ellipticin på cellöverlevnad och cellcykelprogression i odlade däggdjursceller. Cancer Res 40: 2390-2399.

Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, h Usbi Hlen K, Huismans DR, Zimmermann M, Harbott J, Slater RM, Creutzig U och Veerman AJP (2002) cellulär läkemedelsresistens i barndomen akut myeloid leukemi är relaterad till kromosomavvikelser. Blod 100: 3352-3360.