Komplementberoende cytotoxicitet

terapeutiska antikropparredigera

utveckling av antitumörterapeutiska antikroppar innefattar in vitro-analys av deras effektorfunktioner inklusive förmåga att utlösa CDC att döda målceller. Klassisk metod är att inkubera antikroppar med målceller och komplementkälla (serum). Då bestäms celldöd med flera tillvägagångssätt:

• radioaktiv metod: målceller är märkta med 51Cr före CDC-analys, krom frigörs under celllys och mängden radioaktivitet mäts.
• mätning av den metaboliska aktiviteten hos levande celler( färgning av levande celler): efter inkubation av målceller med antikroppar och komplement tillsätts plasmamembrangenomsläppligt färgämne (t.ex. kalcein-AM eller resazurin). Levande celler metaboliserar den till ogenomtränglig fluorescerande produkt som kan detekteras genom flödescytometri. Denna produkt kan inte bildas i metaboliskt inaktiva döda celler.
• mätning av aktiviteten hos frisatta intracellulära enzymer: döda celler frigör enzym (t. ex. LDH eller GAPDH) och tillsats av dess substrat leder till färgförändring, som vanligtvis kvantifieras som förändring av absorbans eller luminiscens.
• döda celler färgning: ett (fluorescerande) färgämne kommer in i de döda cellerna genom deras skadade plasmamembran. Till exempel binder propidiumjodid till DNA från döda celler och fluorescerande signal mäts med flödescytometri.

HLA typing and crossmatch testEdit

CDC-analyser används för att hitta en lämplig givare för organ-eller benmärgstransplantation, nämligen givare med matchande fenotyp av histokompatibilitetssystem HLA. Först görs HLA-typning för patient och givare för att bestämma deras HLA-fenotyper. När potentiellt lämpligt par hittas görs korsmatchningstest för att utesluta att patienten producerar givarspecifika anti-HLA-antikroppar, vilket kan orsaka transplantatavstötning.

CDC-form av HLA-typning (andra ord serologisk typning) använder sats av anti-HLA-antikroppar från karakteriserade allogena antisera eller monoklonala antikroppar. Dessa antikroppar inkuberas en efter en med patientens eller givarens lymfocyter och komplementkälla. Mängden döda celler (och därmed positivt resultat) mäts genom döda eller levande celler färgning. Numera ersätts CDC-typning med molekylär typning, som kan identifiera nukleotidsekvenser av HLA-molekyler via PCR.

CDC-analys används vanligtvis för att utföra crossmatch-test. Den grundläggande versionen innefattar inkubation av patientens serum med givarens lymfocyter och andra inkubation efter tillsats av kaninkomplement. Närvaro av döda celler (positivt test) innebär att donatorn inte är lämplig för just denna patient. Det finns modifieringar tillgängliga för att öka testkänsligheten inklusive förlängning av minimal inkubationstid, tillsats av antihuman globulin (AHG), avlägsnande av obundna antikroppar innan tillsats av komplement, separation av T-cell och B-cell delmängd. Förutom CDC crossmatch finns flödescytometrisk crossmatch tillgänglig, som är känsligare och kan detektera även komplement icke-aktiverande antikroppar.