kvantifiera ROS-nivåer med CM-H2DCFDA och HyPer

vid låga nivåer kan reaktiva syrearter (ROS) fungera som signalmolekyler i celler. När ROS-produktionen överstiger kapaciteten hos endogena antioxidantsystem, eller antioxidantnivåerna reduceras, ökar ROS-nivåerna ytterligare. Den senare är associerad med induktion av oxidativ stress och associerad signaltransduktion och kännetecknas av ROS-inducerade förändringar i cellulär redoxhomeostas och/eller skadliga effekter på biomolekyler (t. ex. DNA, proteiner och lipider). Med tanke på de komplexa mekanismerna som är involverade i ROS-produktion och borttagning, i kombination med bristen på reportermolekyler som verkligen är specifika för en viss typ av ROS, är kvantifiering av (sub)cellulära ROS-nivåer en utmanande uppgift. I detta kapitel beskriver vi två strategier för att mäta ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).