Virgin Kokosolja förhindrar blodtryckshöjning och förbättrar endotelfunktioner hos råttor som matas med upprepade gånger uppvärmd palmolja

Abstrakt

denna studie utfördes för att undersöka effekterna av virgin kokosolja (VCO) hos hanrotter som matades med upprepade gånger uppvärmd palmolja på blodtryck, plasma kväveoxidnivå och vaskulär reaktivitet. Trettiotvå manliga Sprague-Dawley råttor delades in i fyra grupper: (i) kontroll (basal diet), (ii) VCO (1,42 mL/kg, oral), (iii) fem gånger uppvärmd palmolja (15%) (5HPO) och (iv) fem gånger uppvärmd palmolja (15%) och VCO (1.42 mL/kg, oralt) (5HPO + VCO). Blodtrycket ökade signifikant i gruppen som fick 5hpo-kosten jämfört med kontrollgruppen. Blodtrycket i 5hpo + VCO-gruppen var signifikant lägre än 5hpo-gruppen. Plasma kväveoxid (NO) nivå i 5hpo-gruppen var signifikant lägre jämfört med kontrollgruppen, medan i 5hpo + VCO-gruppen var plasma NO-nivån signifikant högre jämfört med 5hpo-gruppen. Aorta ringar från 5hpo-gruppen uppvisade försvagad avslappning som svar på acetylkolin och natriumnitroprussid samt ökad vasokonstriktion mot fenylefrin jämfört med kontrollgruppen. Aorta ringar från 5hpo + VCO-gruppen visade endast försvagad vasokonstriktion mot fenylefrin jämfört med 5hpo-gruppen. Sammanfattningsvis förhindrar VCO blodtryckshöjning och förbättrar endotelfunktionerna hos råttor som matas med upprepade gånger uppvärmd palmolja.

1. Inledning

kardiovaskulär sjukdom har blivit den främsta dödsorsaken över hela världen . Hypertoni eller en ökning av blodtrycket är bland faktorer som orsakar kardiovaskulära komplikationer såsom kranskärlssjukdom, åderförkalkning och stroke . En ohälsosam livsstil är dock den främsta bidragsgivaren till ökningen av förekomsten av högt blodtryck .

tidigare forskning har visat att uppvärmd palmolja orsakar en signifikant ökning av blodtrycket . Hypertoni är relaterad till överproduktion av fria radikaler och lägre antioxidantmekanismer i kroppen . Upprepad uppvärmd palmolja vid hög temperatur ger fria radikaler . Närvaron av antioxidanter som E-vitamin förstörs under uppvärmningen . När palmoljan värms upp upprepade gånger genererar den inte bara fria radikaler utan minskar också antioxidant-och vitamininnehållet, vilket kan leda till oxidativ stress. Oxidativ stress uppstår på grund av en obalans mellan produktionen av fria radikaler och en minskning av antioxidantaktiviteten i kroppen. Oxidativ stress leder också till lågdensitetslipoprotein (LDL) oxidation .

olja som värms upp vid hög temperatur kommer att genomgå en oxidationsprocess, vilket orsakar förändringar i fettsyrakonfigurationen från cis-isomeren till trans. Intag av transfett korrelerar med en ökning av kardiovaskulära sjukdomsrisker . Fettsyror som oxideras på grund av upprepade gånger uppvärmd olja orsakar förändringar i endotelfunktionen vilket leder till en försämring av vasodilatationsreaktionen, ökad risk för inflammation och hypertoni och totalt serumkolesterol och LDL . Tidigare forskning har visat att stekt matintag korrelerar med minskningen av HDL-nivå (high-density lipoprotein).

i denna studie används upprepade gånger uppvärmd palmolja för att efterlikna situationen som händer där människor steker mat med samma olja flera gånger. Denna praxis är vanlig bland Malaysiska, som ett sätt att minska kostnaderna. Tidigare forskning gjord av Azman et al. visade att även om nattmarknaden leverantörer överens om att upprepade gånger uppvärmd matolja är skadligt för hälsan, fortsatte de fortfarande praxis att använda samma matolja upprepade gånger.

numera har virgin coconut oil (VCO) blivit populär på grund av dess fördelaktiga effekter. VCO har visat sig ha antiinflammatoriska, analgetiska och antipyretiska egenskaper . VCO har visat sig minska lipidnivåerna i serum och vävnad samt LDL-lipidperoxidation . Konsumtion av VCO ökar antitrombotiska effekter relaterade till hämning av trombocytkoagulation och låg kolesterolnivå . VCO har varit känt för att ha högre antioxidantaktivitet jämfört med raffinerad kokosnötolja . Det har också bevisats att VCO ökar antioxidantaktiviteten och hämmar lipidperoxidation hos råttor . Därför är det av stort intresse för oss att undersöka om VCO kan förhindra högt blodtryck hos hanrotter som ges upprepade gånger uppvärmd palmolja.

2. Material och metoder

2.1. Djur och experimentell Design

trettiotvå manliga Sprague-Dawley-råttor, som väger mellan 200 och 250 g, erhölls från Laboratoriedjurresursenheten, Universiti Kebangsaan Malaysia. De delades slumpmässigt lika i fyra grupper bestående av åtta djur vardera. Det etiska godkännandet för denna studie erhölls från Universiti Kebangsaan Malaysia Animal Ethics Committee (PP/FAR/2010/QODRIYAH/14-juli/309-augusti-2010-augusti-2011). All djurhantering och alla förfaranden utfördes i enlighet med de rekommenderade riktlinjerna.

råttorna hölls i burar av rostfritt stål vid rumstemperatur 27 C C 2 C C med en 12-timmars ljus-mörk cykel. Alla råttor hade fri tillgång till mat och vatten under hela experimentet. Efter 1 veckas acklimatisering matades varje grupp råttor på följande dieter: (i) basal diet (commercial rat chow) (kontroll), (ii) basal diet tillsammans med 1,42 mL/kg VCO Oralt (VCO), (iii) basal diet berikad med 15% vikt/vikt (w/w) fem gånger uppvärmd palmolja (5hpo) och (iv) basal diet berikad med 15% vikt/vikt (w/w) fem gånger uppvärmd palmolja tillsammans med 1,42 mL/kg VCO Oralt (5HPO + VCO) i 16 veckor. Kroppsvikt och matintag mättes varje vecka. Blodtrycket mättes vid baslinjen och i intervaller om 4 veckor under en total varaktighet av 16 veckor. Blodprover samlades in via tillgång till orbital sinus före behandling och i slutet av denna studie. I slutet av studien offrades djuren och thorax aortas isolerades för mätning av vaskulär reaktivitet.

2.2. Virgin Kokosolja

VCO som användes i denna studie köptes från Organic Gain Sdn. Bhd., Bandar Baru Bangi, Selangor, Malaysia. Det administrerades genom oral sondmatning i en dos av 1, 42 mL/kg enligt den minsta rekommenderade dosen på 10 mL per dag hos människor .

2.3. Beredning av Diet

palmoljan (Cap Buruh, Lam Soon ätbara oljor, Kuala Lumpur, Malaysia) som användes köptes från en lokal butik. I denna studie upphettades palmoljan fem gånger enligt den metod som beskrivits av Owu et al. . Uppvärmningsprocessen innebar att man använde 2,5 L av oljan för att steka 1 kg sötpotatis i en rostfri wok. Temperaturen på den uppvärmda oljan nådde 180 kcal C i 10 minuter. För att värma oljan fem gånger kyldes oljan i 5 timmar mellan uppvärmning, och sedan upprepades hela stekningsprocessen med en ny sats sötpotatis utan tillsats av färsk olja. Detta protokoll var i enlighet med tidigare experimentella procedurer som användes i vårt laboratorium . Standard rat chow (guldmynt, Kepong, Malaysia) användes. Råttchow maldes och blandades med 15% (vikt/vikt) fem gånger uppvärmd palmolja. Blandningen gjordes till pellets som torkades över natten vid rumstemperatur.

2.4. Mätning av blodtryck

systoliskt blodtryck hos de förvärmda medvetna råttorna mättes med svansmanschettmetoden med hjälp av PowerLab-datainsamlingssystem (Adinstrument, Castle Hill, NSW, Australien).

2.5. Mätning av kväveoxid i Plasma

kväveoxidhalten mättes indirekt med dess metabolit nitrit. Blodprover som togs centrifugerades för att erhålla dess plasma och hölls vid -70 kcal C. plasmaprover på 50 kg sattes i en 96-brunns mikrotiterplatta och blandades med 50 kg modifierat Griess-reagens (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA). Efter 15 minuters inkubation vid rumstemperatur i en mörk miljö mättes nitritkoncentrationen vid 540 nm våglängd på en Emax ELISA-mikroplattläsare med SoftMax Pro-programvara (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Nitritkoncentrationen bestämdes sedan genom att plotta en standardkurva med ökande koncentration av natriumnitrit (Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, USA).

2.6. Mätning av vaskulär reaktivitet

aortaringarna bereddes enligt beskrivningen av Ajay och Mustafa . Thorax aorta dissekerades och överskott av fett och bindväv avlägsnades. Aorta skars i ring segment med en bredd av 3-5 mm och suspenderades i en 5 mL organ bad innehållande Krebs lösning av följande sammansättning (mM): NaCl 118,0, 2 KCl 4,7, CaCl2·2H2O 2,5, KH2PO4 1,2, MgSO4 1,2, glukos 11,7, NaHCO3 25,0, och EDTA 0,026. Badlösningen tillhandahölls kontinuerligt med en blandning av syre och koldioxid. Vävnadsisometrisk spänning (g) registrerades med hjälp av en kraftförskjutningsgivare (FT03E, Grass Instruments, west Warwick, RI, USA) fäst vid ett MacLab-inspelningssystem (MacLab model 8 S, Adinstrument, Castle Hill, NSW, Australien). Aortaringarna justerades om till en basal spänning på 1 g och fick jämvikt under 30 till 45 minuter. Under denna period ersattes badlösningarna var 15: e minut efter behov.

efter jämviktsperioden fick aortaringarna uppnå kontraktilt svar på isotonisk KCl-lösning (hög K+, 60 mM). Efter utspädningen av svar på hög K + trängdes ringarna som svar på fenylefrin (PE, 10-7 M) inducerad genom tillsats av acetylkolin (Ach, 10-5 M) för att bedöma endotelintegriteten. Endast endotel intakta ringar med mer än 50% avkoppling till Ach bedömdes ytterligare. Dessutom testades dessa aortaringar för avslappningssvar på ökande koncentrationer av Ach (10-10 m till 10-5 M) och natriumnitroprussid (SNP 10-10 m till 10-5 M) och registrerades i PE (10-5 M) förkontrakterade aortaringar. De kontraktila svaren på ökande koncentration av PE (10-10 m till 10-5 M) registrerades också i ringarna. Olika aorta ringar med intakt endotel användes i varje experiment.

2.7. Läkemedel

läkemedlen som användes för vaskulär reaktivitetsstudie inkluderade acetylkolinklorid, fenylefrin-HCI (Sigma Chemical Co.(BDH Limited och BDH Laboratory Supplies, Poole, England).

2.8. Statistisk analys

resultaten presenterades som medel för sem. Normaliteten av data bestämdes med hjälp av Shapiro-Wilk-testet. Statistiska skillnader bestämdes med hjälp av det parade studentens test eller envägs ANOVA följt av Tukeys HSD post hoc-test för att identifiera skillnaderna med SPSS version 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Värden av ansågs vara signifikanta.

3. Resultat

3.1. Kroppsvikt

det var en signifikant ökning av kroppsvikt för alla grupper vid vecka 16 jämfört med baslinjen. Det fanns ingen signifikant skillnad i kroppsvikt för 5hpo-gruppen () jämfört med kontrollgruppen (). Kroppsvikt i grupperna VCO () och 5HPO + VCO () var dock signifikant lägre jämfört med kontrollgruppen vid vecka 16 (Figur 1).

Figur 1

förändringar i kroppsvikt under studiebehandlingen. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. VCO, virgin Kokosolja; fem gånger-uppvärmd palmolja, 5HPO. * Signifikant skillnad () vid vecka 16 jämfört med vecka 0 för varje grupp. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll vid vecka 16.

3.2. Matintag

grupperna 5HPO () och 5HPO + VCO () visade signifikant lägre genomsnittligt matintag jämfört med kontrollgruppen (). Det fanns ingen signifikant skillnad i matintag i VCO () jämfört med kontrollgruppen. Det fanns inte heller någon signifikant skillnad i matintag i 5HPO + VCO jämfört med 5hpo-gruppen (Figur 2).

Figur 2

matintag under studiebehandlingen. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. VCO, virgin Kokosolja; fem gånger-uppvärmd palmolja, 5HPO. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll.

3.3. Blodtryck

från och med Vecka 8 till Vecka 16 visade 5hpo-gruppen en signifikant ökning av blodtrycket jämfört med kontrollgruppen. Blodtrycket i 5hpo + VCO-gruppen är signifikant lägre jämfört med 5hpo-gruppen från vecka 8 till Vecka 16. Blodtrycket i VCO-gruppen () är signifikant lägre jämfört med kontrollgruppen () endast vid vecka 8 (figur 3).

Figur 3

förändringar i blodtrycket under studiebehandlingen. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. VCO, virgin Kokosolja; fem gånger-uppvärmd palmolja, 5HPO. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll. * Signifikant skillnad () 5HPO + VCO jämfört med grupp 5hpo.

3.4. Förändringar i plasmanivå av Kväveoxidmetaboliter

5hpo-gruppen () visade en signifikant minskning av kväveoxidnivån jämfört med kontrollgruppen (). Grupperna VCO () och 5HPO + VCO () visade en ökning av kväveoxidnivån jämfört med kontrollgruppen. För 5hpo + VCO-gruppen var det en signifikant ökning av kväveoxidnivån jämfört med 5hpo-gruppen (Figur 4).

Figur 4

förändringar i plasma kväveoxidmetaboliter under studiebehandlingen. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. VCO, virgin Kokosolja; fem gånger-uppvärmd palmolja, 5HPO. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll. * Signifikant skillnad () 5HPO + VCO jämfört med grupp 5hpo.

3.5. Vaskulärt Svar

3.5.1. Avkoppling som svar på acetylkolin (Ach)

andelen avslappning vid 10-5 m och 10-6 m koncentration för 5hpo-gruppen var signifikant lägre jämfört med kontrollgruppen. Det fanns ingen signifikant skillnad i andelen avkoppling i 5hpo + VCO-gruppen jämfört med 5hpo-gruppen vid alla koncentrationer (Figur 5).

Figur 5

endotelberoende avslappning som svar på acetylkolin i aortaringar isolerade från råttor som matas med basal diet (kontroll), jungfru kokosnötolja (VCO), fem gånger uppvärmd palmolja (5HPO) och fem gånger uppvärmd palmolja tillsammans med VCO (5HPO + VCO) vid olika koncentrationer. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll.

3.5.2. Avslappning som svar på natriumnitroprussid (SNP)

Vasodilatation som svar på den högsta testade koncentrationen (10-5 M) dämpades signifikant i aortaringen erhållen från 5hpo () – gruppen jämfört med kontrollgruppen (). Det fanns ingen signifikant skillnad i vaskulärt avslappningssvar i 5hpo + VCO-gruppen () jämfört med 5hpo-gruppen (Figur 6).

Figur 6

Endotelioberoende avslappning som svar på natriumnitroprussid i aortaringar isolerade från råttor som matas med basal diet (kontroll), jungfru kokosnötolja (VCO), fem gånger uppvärmd palmolja (5HPO) och fem gånger uppvärmd palmolja tillsammans med VCO (5HPO + VCO) vid olika koncentrationer. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll.

3.5.3. Kontraktilt svar på fenylefrin (PE)

vasokonstriktionen som svar mot PE förstärktes signifikant i aortaringarna från 5hpo-gruppen jämfört med kontrollgruppen vid en koncentration av 10-6 till 10-5 M. aortaringarna från 5hpo + VCO-gruppen visade en signifikant minskning av vasokonstriktion jämfört med 5hpo-gruppen vid en koncentration av 10-6 till 10-5 M (Figur 7).

Figur 7

Kontraktilt svar inducerat av fenylepinefrin i aortaringar isolerade från råttor som matas med basal diet (kontroll), jungfru kokosnötolja (VCO), fem gånger uppvärmd palmolja (5HPO) och fem gånger uppvärmd palmolja tillsammans med VCO (5HPO + VCO) vid olika koncentrationer. Uppgifterna uttrycks som medelvärde för sem i enlighet med detta. # Signifikant skillnad () jämfört med kontroll. * Signifikant skillnad () 5HPO + VCO jämfört med grupp 5hpo.

4. Diskussion

i denna studie fann man att matintaget i den upprepade uppvärmda oljedieten var lägre jämfört med kontrollgruppen. Vi observerade emellertid att det inte fanns någon signifikant skillnad i kroppsvikt mellan 5hpo-kosten och kontrollgruppen vid vecka 16. Liknande resultat erhölls också från en studie gjord av Leong et al. , med upprepad uppvärmd olja. Även om matintaget för VCO-och kontrolldieten var likartat, visade sig VCO-dietgruppen ha en minskad kroppsvikt jämfört med kontrollgruppen vid vecka 16. Matintaget i 5hpo + VCO-dieten var detsamma som 5hpo-dieten, men råttor från 5hpo + VCO-dietgruppen upplevde en minskning av kroppsvikt jämfört med kontrollgruppen vid vecka 16. Detta visar att VCO-tillskott orsakar en minskning av kroppsvikt. Tidigare studier på människor har visat att VCO verkar främja en minskning av bukfetma . Enligt en studie utförd av St-Onge ökar medelkedjiga fettsyror (MCFA) jämfört med långkedjiga fettsyror energiförbrukningen och resulterade i snabbare mättnad. MCFA som finns i VCO kan hjälpa till som en fördelaktig ersättning för andra fetter i kosten för att främja fullhet och också öka kaloriförbrukningen. Fettinnehållet hjälper till att sakta ner tömningen av magen. Bortsett från det bryts MCFA också direkt ner och transporteras till levern som bränsle. Därför används VCO för energi och är mindre benägna att lagras som fett, och detta förklarar förmodligen varför det kan minska bukfetma hos människor och kroppsvikt hos studiedjur.

olja som upphettas upprepade gånger innehåller mer mättade fettsyror än omättade fettsyror . Kroppsviktsökningen hos råttor i 5hpo-kosten är inte signifikant annorlunda jämfört med kontrollgruppen trots att deras matintag är lägre eftersom mättat fettsyraintag kan öka vävnadsfettheten. Den involverade mekanismen beror på minskningen av hormonkänsligt lipas och sympatisk aktivitet i fettvävnad. Peroxisomproliferatoraktiverad receptor (PPAR), som är en transkriptionsuttrycksfaktor, spelar en roll i proliferation och adipositetsdifferentiering som orsakar adipositetsapoptos. Det påverkas sedan av mättade fettsyror som leder till ökad adipositet (fettvävnadstillväxt) som orsakar kroppsviktsökning .

5hpo-kosten orsakar blodtryckshöjning. Denna studie visar att utfodring med upprepade gånger uppvärmd palmolja orsakar hälsorisker hos råttor genom att öka risken för högt blodtryck. Tidigare forskning visade också att en ökning av blodtrycket uppträder hos råttor som administreras oxiderad olja . Detta beror förmodligen på ökningen av oxidativ stress, vilket orsakar förändringar i kväveoxidnivån . Reaktiva syrearter (ROS) spelar en viktig roll vid bildandet av högt blodtryck , och ROS bildas under uppvärmningen. Överproduktion av ROS kan försämra celler och orsaka blodtryckshöjning. Cellmembranet är en struktur som är känslig mot oxidativ attack på grund av det höga innehållet av fleromättad fettsyra (PUFA). Blodtryckshöjd beror på produktionen av fria radikaler som minskar NO-nivån .

VCO-tillskott förhindrar blodtryckshöjande effekt av 5HPO. Den blodtryckssänkande effekten av VCO kan hänföras till dess höga polyfenolkomponent . Tidigare studier har också visat att polyfenol kunde sänka blodtrycket hos hypertensiva patienter . Råttor på VCO-kosten ensam hade en övergående minskning av blodtrycket endast vid vecka 8 jämfört med kontroll. En studie av Diebolt et al. visade att kortvarig administrering av polyfenoliska föreningar minskade blodtrycket hos normotensiva råttor. De antog att polyfenol kunde stimulera NO som släpptes från endotelet, vilket gav upphov till vasodilation och blodtryckssänkning. Orsaken till den kortsiktiga effekten är oklar eftersom kväveoxidnivån i plasma togs i början och slutet av studien, inte varje månad som med blodtrycksmätningarna. Polyfenolkomponenten har också visat sig förhindra LDL-oxidation, och en diet som innehåller VCO-tillskott ökar antioxidantstatus hos råttor . Kolesterolnivån och andra lipidparametrar i vävnad och serum bibehålls inom det normala intervallet samt ökning av HDL-koncentration på grund av polyfenolinnehåll i VCO .

intag av 5hpo-kosten har visat sig minska plasma NO-nivån signifikant. Överproduktion av fria radikaler ökar inaktiveringen av NO vilket leder till minskning av NO biotillgänglighet. Därför orsakar en minskning av NO blodtryckshöjning. Intag av VCO-diet visar plasma ingen nivå högre än kontrollgruppen. Det ökar också plasma inga nivåer hos råttor som matas med 5hpo-kosten. Detta tros bero på antioxidantkomponenten polyfenol, som finns i VCO som är ansvarig för att öka ingen biotillgänglighet. Antioxidantinnehållet i VCO kan eventuellt ge skyddseffekter genom att minska oxidativ stress och därmed bibehålla ingen biotillgänglighet .

i denna studie fann man att avslappningen inducerad av acetylkolinberoende endotel dämpades hos råttor som matades med 5hpo-dieten. Frisättning av NO spelar en roll för att bestämma balansen mellan vaskulär glatt muskelavslappning och vasokonstriktion. Om ingen biotillgänglighet minskar leder detta till dämpning av vaskulär glatt muskelavslappning och vasokonstriktion . De antioxidantskyddande effekterna i olja försämras förmodligen när palmolja upphettas upprepade gånger.

SNP är ett endotelvaskulärt vasodilatationsmedel. SNP inducerar avslappning genom att frigöra NO i vävnaden, medan nedbrytningen av SNP-molekylen producerar NO som aktiverar guanylatcyklas för att öka bildningen av cykliskt diguanylatmonofosfat, vilket orsakar vaskulär glatt muskelavslappning. Emellertid dämpades avslappning inducerad av SNP-oberoende endotel hos råttor som fick 5hpo-dieten jämfört med kontrollgruppen vid den högsta koncentrationen av 10-5 M. Detta beror kanske på den minskade biotillgängligheten av NO som är involverad i vasodilatation .

råttorna på 5hpo + VCO-dieten visade försvagad vasokonstriktion inducerad av fenylefrinberoende endotel jämfört med 5hpo-dieten. Fria radikaler såsom anjonsuperoxid är relaterade till ökningen av vaskulär reaktivitet inklusive vasokonstriktion . Den blodtryckshöjande effekten av denna studie liknade tidigare forskning som visade att upprepade gånger uppvärmd olja orsakar dämpning i vaskulär reaktivitet . Upprepad uppvärmd olja producerar också giftiga produkter som kan öka blodtrycket och därmed avbryta endotelbalansen. Vitaminer och livsmedel som innehåller antioxidanter kan förbättra vaskulär reaktivitet och minska de dåliga effekterna på blodkärlen som kan förhindra högt blodtryck och därmed upprätthålla endotelbalansen. VCO-tillskott kan förbättra endotelfunktionen eftersom den är rik på antioxidanter.

5. Slutsats

denna studie visade att VCO-tillskott kan förhindra höjning av blodtrycket och också minska deaktivering av kväveoxid hos hanråttor som matas med upprepade gånger uppvärmd palmolja. Dessutom påverkar VCO inte avslappning utan minskar vasokonstriktion av endotelet.

bekräftelser

denna studie finansierades av Grant UKM-FF-03-FRGS0031-2010. Författarna vill tacka Fröken Juliana Abdul Hamid, Fadhlullah Zuhair, Sinar Suriya Muhammad och anställda vid Farmakologiavdelningen i Universiti Kebangsaan Malaysia och Universiti Malaya för deras tekniska hjälp.