단백질/시르나의 안정한 약물 전달 시스템으로서 키토산 나노입자의 개발

3.2. 이 경우,상기 제 1 실시예에서,상기 제 2 실시예에서,상기 제 2 실시예는 상기 제 2 실시예에 의해 얻어진다. 그림 2(에이)과 2(비)언로드 된 연사 엔피 피스가 구형 구조를 나타냄을 보여줍니다. 그러나,로드 된 나노 입자 표시 길쭉한 형태학(그림 2(기음)및 2(디)).

(아)

(비)

(기음)

)

(이자형)

)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)

그림 2

이미지. (a)및(b)에 언로드 CS NPs0.5:1,1:1,(c)및(d)BSA 로드 CS NPs0.5:1 1 : 1(e)및(f)siRNA 로드 CS NPs0.5:1,1:1,각각합니다. 모든 이미지는 60 킬로 배율로 촬영되었습니다.

3.3. 0.05 와 0.10%의 나노 입자로 만들어진 두 나노 입자의 저장 안정성은 도 3(가)에 도시된 바와 같이 시간이 지남에 따라 크기가 증가하였다. 입자 크기의 유의 한 증가는 특히 0.05%의 저장 14 일 후에 관찰되었다. 이것은 집합체의 형성 때문이라고 생각되었다. 이 발견은 거의 중립 표면 전하의 감소를 보여 표면 전하의 결과와 확증. 대조적으로,이들이 4,000 제곱미터에 저장되었을 때,이들의 입자 크기 및 표면 전하량은 0.10%의 나노 입자에 대해 최대 14 일까지 변하지 않았다. 그 결과,이 수치는 2014 년 11 월 1 일(토)에 발표되었습니다. 한편,이들 나노입자가 7.4 에 현탁되었을 때,모든 제형은 0.5 이상의 값을 갖는 1 개 이상의 제형의 더 큰 크기로 응집되었다. 그들의 입자 표면 전하도+0 에 이르기까지 거의 중립적이었습니다.2 에+2.5 뮤직 비디오.

(에이)

)

(2)
(2))

그림 3

(1)나노입자의 표면전하를 0.05%와 0.01%로 제조하고 25%로 저장한 다.나노입자를 증류수(산도 6-7 의 범위에서 물)에 부유시켰다.

(a)

(b)

(a)
(b)

그 4

(a)입자 크기 그리고(b)지상의 책임 CS NPs 에서 준비 0.05 0.10%w/v 및 저장 4°C. 나노 입자의 중단에서 증류수 물(pH 범위에서 6-7),.

3.4. 도 5(가)는 시험관 내 방출 및 완전성 방출이 방출 속도에 기초하여 2 단계로 분할될 수 있음을 도시한다. 2015 년 12 월 15 일(토)~2015 년 12 월 15 일(일) 두 번째 단계에서는 6 시간에서 48 시간까지 천천히 방출되어 누적 된 60%이상의 방출을 초래했습니다. 본 발명의 실시예는 다음과 같다. 관찰 된 밴드는 1 일과 2 일 후 37 일 후에로드 및 릴리스 프로세스를 견뎌낸 비트 코인스가 갓 준비된 비트 코인스의 표준과 다르지 않다는 것을 확인했습니다. 따라서,그것은 결론 될 수 있습니다 BSA 에 남아있는 원래 양식에서 CS NPs 실험 조건 하에서.

(아)

)

(2)
(2))

그림 5

(이 경우,연사 비율은 1:1 입니다.4, . 또한,본 발명의 실시예에 따라,본 발명의 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른 실시예에 따른

3.5. 시르나 시험관 내 방출

도 6 은 시르나의 방출이 방출 속도에 기초하여 2 단계로 분할될 수 있음을 도시한다. 첫 번째 단계에서,시르나는 연사 핵융합에서 빠르게 방출되었고,처음 6 시간 동안 버스트 방출을 보였다. 그 결과 58%의 누적 릴리스가 발생했습니다. 두 번째 단계에서 시르 나는 6 시간에서 48 시간까지 천천히 방출되어 누적 된 85%이상의 방출을 초래했습니다.

그림 6

시르나 로드된 연사의 방출 프로파일은 산도 7.4 에서 1:1 의 연사 비율입니다.

4.

본 연구에서는 연사순소를 제조하는데 사용되는 방법은 순한 공정이며,첨가된 염의 농도,점도,비용매량,중합체의 분자량 등 특정 파라미터를 변화시켜 입도 조절을 가능하게 한다. 이 단계는 신뢰할 수 있고 재현 가능한 결과 얻기 위해 중요 하다. 얻어진 데이터는 안정적인 전자의 형성을 제안했다. 나노 입자 동안 준비는 교반을 중지 한 후 약간의 순간을 요구했다. 이 순간은 전해질이 입자 핵을 향해 침투하기 위해 필요했습니다. 따라서 40 분의 대기 시간을 정확하게 측정 할 수 있습니다. 이 발견은 동일한 대기 시간을 제안한 연사-트리폴리 포스페이트와 유사했다.

또한 입자 형성에 대한 중합체 농도의 영향을 결정하기 위한 연구가 수행되었다. 이 연구는 원하는 크기의 나노 입자를 생산하기 위해 고분자 전해질 농도의 범위를 확립하는 것을 목표로했습니다. 나노 입자의 형성에 대한 다양한 농도의 연사 및 디에스의 영향을 연구하기 위해 0.1,0.25 및 0.5%의 연사 및 디에스 용액을 제조 하였다. 변수 볼륨의 DS 솔루션(1, 2, 3, 4, 5, 5.8, 10mL)와 혼합되어 5mL 를 각 CS 농도(0.1–0.5%w/v). 최종 농도 연사 과 디에스 계산되었고,샘플의 크기는 100-500,501-1000 또는 1000 나노 미터 이상으로 분류되었습니다. 그것은 입자 크기가 디에스 농도에 의해 영향을 받았다는 것을 발견했다. 이 발견은 연사-티피 엔피 결과. 일반적으로,나노 입자의 원하는 크기는 100 내지 1000 나노 미터 사이에 국한. 그러나 이전의 연구에 따르면 적재 된 나노 입자는 일반적으로 빈 것보다 더 큰 크기를 생성합니다. 따라서 500 나노 미터 이하의 크기는 유리합니다.그 결과,표 1 과 같이 입자 크기가 500 나노 미터 미만인 나노 입자를 생성 할 수 있었다. 두 중합체가 낮은 농도에있을 때,연사에 디에스를 첨가하면 작은 코아세르베이트 핵이 생길 것으로 예상되었다. 그와는 반대로,크기가 1000 나노미터를 초과하는 큰 코아세르베이트는 두 중합체 농도가 0.25%이상으로 증가할 때 형성되는 경향이 있었다. 자발적으로 코아세르베이트를 형성하는 키토산의 능력은 반대로 하전된 고분자 전해질의 상호 작용으로 용해도가 감소된 고분자 전해질 복합체를 형성하기 때문입니다. 따라서 고농도의 디에스와 연사의 혼합은 연사 사슬의 얽힘과 결과 복합체의 용해도에 영향을 미칠 가능성이 더 큽니다. 결과적으로,높은 수준의 착화 및 코아 세르 베이트가 생성 될 것이다. 연사의 낮은 농도에서 감소 점도 또한 더 나은 용해도 결과. 이것은 양이온 연사와 반대로 하전 된 이온 사이의보다 효율적인 상호 작용을 가능하게했으며,따라서 더 작은 입자 크기가 생성되었다. 또한,사용 된 폴리아니온의 몰 질량의 증가 및 과잉은 고도로 중화 된 복합체가 형성되고 응집되는 경향이 있기 때문에 더 큰 입자를 초래했습니다. 본 연구에서는 나노입자 시스템의 입자 표면 전하의 무게 비율에 따라 달라 집니다. 입자 표면 전하 비율이 감소함에 따라 증가하는 것으로 밝혀졌다. 이 관계는 나노 입자의 접착 및 수송 특성을 용이하게하기 위해 원하는 입자 표면 전하 밀도를 얻는 데 유용 할 수 있습니다.

에서 본 연구의 결합 BSA CS NPs 달성되었으로 단순히 섞는 산성 CS 솔루션을 포함하는 녹 BSA 분자와 DS 솔루션이 실온에서의 추가 없이 안정제입니다. 그것은 다른 단백질의 일반적인 특성을 포용 하 고 인 간에 게 생체 적합 하기 때문에 모델 단백질로 자주 사용 됩니다. 그것은 발견 했다 그 연사 순발력 사이즈와 로드 후 비교적 큰 했다. 입자 크기는 나노 입자에 성공적으로 로드 될 때 증가할 것으로 예상 되었다. 이 추세는 추가 된 분자의 분자량 및 크기 때문일 수 있습니다. 이 큰 입자 크기는 단백질의 납품에 있는 그들의 사용을 제한할지도 모릅니다. 150-300 나노 나노 입자의 간 및 비장에서 주로 발견 된다. 게다가 일부 보고서에 따르면 암 치료를 위해 개발 된 나노 입자의”이상적인”크기 요구 사항은 70~200 나노 미터입니다. 나노 입자는 내피 장벽을 통과하기 위해 150 나노 미터 이상이어야하지만,문헌은 항상 창문의 한계보다 큰 입자의 침투를보고합니다. 실제로,창문과 혈관 구조는 다양한 병리학 적 조건 하에서 변형을 겪을 수 있습니다.

예를 들어,종양 성장은 200-780 나노 미터의 큰 창을 가진 불연속 내피를 특징으로하는 신생 혈관의 발달을 유도 할 것이다. 게다가,그것은 관찰 되었다 그 입자 표면 충전 비어있는 것 들 보다 높은 나노 입자 로드. 이것은 산성 상태에 존재할 때 비이온성에 의해 소유 된 양이온 특성 때문일 수 있습니다. 따라서 로드 된 나노 입자에 대 한 입자 표면 전하의 높은 값에 기여 했다.

양전하를 띤 양이온 중합체는 디나,올리고뉴클레오티드 및 시르나와 같은 핵산에 효과적으로 결합하고 보호할 수 있다. 본 연구에서는 산성 연사 용액과 시르나 용액을 실온에서 단순히 혼합하여 시르나를 연사순환에 결합시켰다. 그 결과,시르나와 함께 적재한 후 비교적 작은 크기의 연사순이익 입자 크기가 발견되었다. 시르나와 함께 로드 된 연사 나노 입자의 작은 크기 응축 작은 크기의 나노 입자의 결과로 양이온 성 고분자에 의해 핵 산의 음전하의 중화 때문일 수 있습니다. 또한,제타 전위는 빈 연사 전위보다 더 높았다.

이상적으로,성공적인 전달 시스템은 높은 수준의 연관 약물을 가져야합니다. 시르나 적재된 연사 순응도는 모든 연사:연사 중량비에 대해 더 높은 포획 효율(<90%)을 나타냈다. 나노 입자의 포획 효율:1:1,1.5 의 중량비 : 1 과 2:1 은 0.5:1 의 중량비보다 높았다. 이 현상은 아마도 나노 입자에 제시된 디에스의 비율이 더 높았 기 때문일 것입니다. 더 많은 나노 입자가 추가됨에 따라 더 많은 나노 입자가 나노 입자에 포획 될 수 있습니다. 이 경우,이 분자는 두 가지 유형으로 나눌 수 있습니다. 3.5-4.0 의 배합 매체의 산도에서,그것에 의해 소유 된 증가 된 양전하로 인해 비사이의 용해도가 매우 증가 될 수있다. 따라서,나노입자는 나노입자에 정전기적으로 부착되고 안정적으로 적재될 수 있을 것이다. 산성 용액에서,비산소방사는 양전하를 가질 수 있고,비산소방사와 경쟁하여 비산소방사와 정전기적으로 상호 작용할 수 있다. 이 발견은 언로드 된 것과 비교하여 로드 된 연사 순응도의 증가 된 양의 표면 전하로 확증되었습니다. 또한,다 이온 사이트,그리고 이 기능은 나노 입자에 결합 하는 것을 용이 하 게 수 있습니다. 이 발견은 연사-티피 엔피 발견과 다릅니다.

이 연구에서는 정전기 상호 작용이 비사 및 비사 대신 비사 및 비사 사이에 존재했다. 그것은 또한 음전하를 보유 하 고 양전하를 띤 연사 분자와 상호 작용 하기 위해서는 그것의 등전점 보다 높은 산도 용액에 녹여 야 제안 했다. 이 발견 따라서 정전기 상호 작용 중 연사-단백질 상호 작용 또는 단백질 상호 작용을 통해 나노 입자로 나노 입자의 결합을 촉진 하는 주요 기여 요인 이다 입증 했다.

템은 개별 나노입자의 나노스케일 시각화를 가능하게 하며,크기와 형태 둘 다의 정보를 제공한다. 입자 형태는 콜로이드 및 화학적 안정성뿐만 아니라 나노 입자의 생체 활성에 중요한 요소입니다. 시르 나로드 된 연사 엔피로는 불규칙한 형태를 보였으 나,로드 된 연사 엔피로는 길쭉한 형태를 보였다. 이 때문에 구조 내에서 연사의 전체 노출을 제한,얽히게 또는 연사에 방패처럼 행동 할 수있다.

저장시 연사 엔피스의 안정성 프로파일도 중요합니다. 이 정보는 서로 다른 매체 및 온도 하에서 나노 입자의 안정성에 대한 견해를 제공 할 수 있습니다. 나노 입자의 안정성 평균 입자 크기 및 표면 충전 시간에 그들의 변화를 평가 하 여 조사 했다. 먼저,나노 입자를 증류수에 재 주입 하였다 산도 6.6 이는 물 속에 존재하는 가능한 오염 물질을 제거하기 위해 0.2 물 필터를 여과 하였다. 이 연구에서는 0.05 및 0.10%의 나노 입자 만 테스트했습니다. 원심분리 후 입자 크기 증가로 인해 다른 디에스 농도가 결정되지 않았다. 그 결과,입자 크기는 각각 0.15%및 0.20%에 대해 최대 나노미노 및 나노미노미노였다. 의 증가는 입자 크기로 인해 수 있습니다 CS NPs 자신을 침식을 잃고 자신의 둥근 모양에서는 수성 환경에 따라서 평균 입자 직경의 상승으로 대응하는 이가 침식되는 것을 막을 수 있습니다. 또한,두 농도에서 만든 나노 입자에 대 한 입자 표면 요금 시간이 지남에 따라 감소 했다. 리소자임이 없더라도 수성 매질에서 연사가 분해 될 수 있다고 의심되었습니다. 그 결과,입자 크기와 표면 전하가 변하지 않았거나 14 일까지 약간 변화했기 때문에 연사순이 4,000,000,000 에 저장되었을 때 연사순이보다 안정하다는 것을 보여 주었다. 결과는 또한 제안하는 CS NPs 저장하지 않아야 합니다 주위 온도에서 그들이는 경향이 저하될 수 있습니다. 결과 따라서 권장하는 CS NPs 저장된 상온에서 더 많은 저하하는 경향이 그들 보다는 것에 저장되었습니다. 그것은 아마도 나노 입자의 운동 운동을 늦출 수있는 시원한 환경 때문일 것입니다. 따라서 나노 입자는 구형을 유지할 수 있으며 침식이 발생할 가능성이 적습니다. 또한,이러한 나노 입자 산도 7.4 에서 집계 했다 관찰 되었다. 이것은 중성 근처의 나노 입자의 표면 전하를 낮추는 속성 일 수 있습니다. 0 으로 떨어진 입자 표면 전하가 연사순환이 인산염 그룹에 의해 전하 취소를 겪었음을 나타낼 수 있습니다. 이러한 나노 입자의 중성 충전 상태는 나노 입자를 개별적으로 유지하는 데 중요한 분자간 및 분자간 힘의 손실을 유발할 수 있습니다. 그 결과,이러한 충전되지 않은 나노 입자는 콜로이드 시스템을 응집하고 불안정하게 만들 수 있습니다. 또한,증류수는 수소결합을 형성하기 위해 수많은 수소 이온을 제공할 수 있으며,이는 이온화 가능한 연사 물기들과 상호 작용하여 나노입자의 응집을 파괴하는데 도움을 줄 수 있다.

이 릴리스는 릴리스 속도에 따라 두 단계로 나눌 수 있습니다. 첫 번째 단계에서,이 약물은 연사 핵심에서 빠르게 방출되었습니다. 이 단계에서 비사/시르나의 방출은 입자 표면에 결합 된 비사/시르나의 확산을 포함 할 수 있습니다. 두 번째 단계에서,폴리머의 팽창 또는 분해로 인해 비사/시르나가 천천히 방출되었다. 입자가 완전히 침식되거나 방출 매질에 용해 될 때까지 완전히 방출되지 않습니다. 이것은 연사 세그먼트에 남아있는 비사/시르나와 유리 아미노 그룹 사이의 상호 작용 때문일 수 있습니다. 또한,이전에 온화한 조건 하에서 제형화 될 수 있는 것으로 기술 된 합성된 시스템 안심 하 고 단백질의 안정성에 로드 되었습니다.

5. 결론

요약하면,이 연구는 연사 및 연사 농도뿐만 아니라 산도가 연사의 입자 크기 및 표면 전하를 제어하는 매개 변수임을 보여줍니다. 500 나노 미터 미만의 나노 입자는 산도 4 에서 0.5:1 의 중량비로 얻을 수 있습니다. 나노입자 중량비는 88%이상의 높은 함정효율을 가지고 있다. 가장 높은 함정효율 비율은 0.10%(1:1 의 디에스:연사비)였다. 그러나,시르나가 탑재된 연사는 모든 연사 비율에 대해 높은 포획 효율(>90%)을 나타냈다. 보관 온도 및 현탁 매체는 연사순환순환의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 요인으로 밝혀졌다. 주변 온도에서 불안정하고 불안정하는 경향이 있지만 시원한 환경(2-4)이 제공되었을 때이 불안정한 행동을 보류합니다. 또한,물분자와 이온화 가능한 물분자 사이에 형성된 수소 결합으로 인해 발생하는 증류수의 안정성이 우수하였다.

이해 상충

저자는 현재 연구에서 개인적 또는 재정적 이해 상충이 없다고 선언합니다.

저자는 현재 연구 프로젝트에 자금을 지원하고 지원한 말레이시아 대학교의”다나 론자칸 페네르비탄”을 감사하게 인정합니다.