関節炎は、早期関節リウマチ患者におけるコラーゲンI型およびII型分解を瞬間的に引き起こす：リウマチ性疾患の縦断的分析|年代記

方法

患者

我々は、COBRA研究に参加している患者を調査した。 コブラは、関節リウマチのためのリウマチ学の基準のアメリカの大学を満たした155人の患者をランダムに割り当てられた56週間の多施設臨床試験8,9すべての患者は早期活動性疾患（二年未満、中央値四ヶ月）を有していた。 患者のどれも以前に抗リウマチ薬（DMARDs）を変更する疾患で治療されていませんでした。 一つのグループはスルファサラジン、メトトレキサート、および最初は高用量経口プレドニゾロン（COBRAレジメン）の組み合わせで治療され、他のグループはスルファサラジン単独で治療された。 プレドニゾロンの用量は、最初の二週間で60mg/日であり、7.5週7mg/日の維持投与量に毎週のステップでテーパーされた。 プレドニゾロンおよびメトトレキサートは、それぞれ28週および40週後にテーパーされ、停止したが、スルファサラジンは継続した。

非絶食第二の朝ボイド尿サンプルは、ベースライン、三ヶ月、半年、九ヶ月、および試験の終了時に得られ、-20℃で凍結したままであった。

現在の報告は、ベースラインおよび少なくとも一つのフォローアップ訪問の両方で尿が利用可能な110人の患者に基づいており、COBRA治療52人とスルファサラジン治療58人の患者で構成されている。 試験中および試験後に、腫れた関節数および柔らかい関節数、ならびにglobal wellbeing（視覚アナログスケール）およびWestergren赤血球沈降速度（ESR）の評価を実施した。 疾患活性は、28関節疾患活性スコア（DAS28）、28関節腫脹と圧痛カウント、急性期反応物質（ESR）、およびグローバル幸福の尺度（10cm視覚アナログスケール）で構成される検証された指数として表現された。＜４ ０ ０ ９＞＜９ ６ ７ ６＞尿中ｃ末端架橋テロペプチドｉ型コラーゲン（ＣＴＸ−ｉ）を、Ｃｒｏｓｓｌａｐｓ ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）（Ｎｏｒｄｉｃｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｒｌｅｖ，Ｄｅｎｍａｒｋ）により測定した。 このアッセイは、ヒトI型コラーゲンのα1鎖のc-テロペプチドのβ-異性化EKAH β DGGR配列に対して発生したポリクローナル抗血清を使用しています。 変動のイントラアッセイおよびインターアッセイ係数は、それぞれ6％および9％未満である。＜４ ０ ０ ９＞＜９ ６ ７ ６＞尿中Ｃ末端架橋テロペプチドＩ Ｉ型コラーゲン（ＣＴＸ-Ｉ Ｉ）をヒトＩ Ｉ型コラーゲンＣ-テロペプチドのＥＫＧＰＤＰ配列に対して産生させたマウスモノクローナル抗体に基づく競合ＥＬＩＳＡ（Ｃａｒｔｉｌａｐｓ，Ｎｏｒｄｉｃｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により測定した。 リジン残基（Ｋ）がＩＩ型コラーゲン分子間の架橋に関与するこの配列は，軟骨細胞によって産生される成熟関節コラーゲンネットワークに存在する。 従って尿のこの順序の検出はとりわけ成長したタイプIIのコラーゲンの分子の低下を反映すると考慮されます。

変動のイントラアッセイおよびインターアッセイ係数は、それぞれ8％および10％未満である。 日内変動を反映した24時間にわたる平均個体内変動係数はわずか15％であった。

尿中CTX-IおよびCTX-IIレベルは、標準比色法によって測定された尿中クレアチニン（Cr）濃度によって補正された。 ＣＴＸ−ｉおよびＣＴＸ−ＩＩの全ての測定は、中央研究所（Ｓｙｎａｒｃ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）で実施した。

ctx-IまたはCTX-IIの尿中レベルに影響を与えた可能性のある顕著な肝臓または腎機能障害を患った患者はいなかった。

統計分析

CTX-IおよびCTX-IIレベ

縦方向データ分析

縦方向データセットは、患者間の変動性が高く、患者内の変動性がかなり低い観測によって特徴付けられます。 患者内相関が高いことは、通常の回帰法を使用して縦方向の関係を分析できないことを意味します。 GEE(generalised estimating equations)は、縦方向の研究における変数間の関係を研究するための回帰手法であり、時間に依存しない共変量と時間に依存する共変量を考慮に入れる。10通常の方法よりもGEEの利点は、GEEが利用可能なすべての縦断データを使用し、不等な数の反復測定と不等な時間間隔を可能にし、結果変数の多変量正規性を必要としないことである。 GEEは、反復測定設計で動作する被験者内相関を調整するために、先験的な”作業”相関構造を必要とします。 相関構造は、実際のデータセットに基づいて選択する必要があります。 この研究では、相関行列では、異なる時点でのすべての相関がほぼ等しい（Ctx-IとCTX-IIのスピアマン相関係数は0.45と0.60の間で異なっていた）ため、”交換可能な”相関構造は、すべてのアウトカム測定に適していた。

モデル構築

ctx-IとCTX-IIに及ぼす時間の影響

まず、CTX-I/CTX-IIと時間の関係を調べ、続いてtime2とtime3を追加して、モデル（モデル1）の適合性を高めるこ

ベースライン要因（時間に依存しない）

我々は、その後、放射線転帰（治療、リウマチ因子の状態、ベースライン損傷）を予測することが知られている変数が有意に分散（モデル2）を説明するのに貢献したかどうかを調べた。

縦方向因子（時間依存）

関節炎とCTX-I/CTX-II（モデル3）との縦方向の関係を調べるために、臨床的に知覚可能な関節炎の程度を反映する変数をモデル3に追 このモデルは、関節炎を反映した異なる変数で毎回数回実行されました。

自己回帰分析

我々は、モデル3で見つかった関係が縦方向の解釈を正当化するかどうかを調べるために、モデル3に一時点（三ヶ月）（CTX-It-3ヶ月、CTX-IIt-3ヶ月）を測定したCTX-I/CTX-IIのレベルを追加した。

タイムラグ分析

この分析は、関節炎とCTX-I/CTX-IIの時間的関係を調べるために実行されました。 関節炎の変数（ESR、腫れ関節数、入札関節数、DAS28）とCTX-IまたはCTX-IIの間の相関は、標準化された回帰係数を使用して比較されました。 標準化回帰係数は、標準化された（正規化された）独立変数（ここでは、関節炎を反映する変数）と従属変数（ここでは、CTX-IまたはCTX-II）との間の関係を記述し、異なる独立変数と一つの従属変数との間の相関を重み付けするために使用することができる。