Artritis veroorzaakt ogenblikkelijk degradatie van collageen type I en type II bij patiënten met vroege reumatoïde artritis: een longitudinale analyse / Annalen van de reumatische aandoeningen

methoden

patiënten

we hebben patiënten onderzocht die deelnamen aan de Cobra-studie. COBRA was een 56 weken durende multicenter klinische studie die willekeurig 155 patiënten toegewezen die voldoen aan de American College of Rheumatology criteria voor reumatoïde artritis.Alle patiënten hadden een vroege actieve ziekte (minder dan twee jaar, mediaan vier maanden). Geen van de patiënten was eerder behandeld met disease modifying anti-reumatische geneesmiddelen (DMARD ‘ s). Eén groep werd behandeld met een combinatie van sulfasalazine, methotrexaat en, aanvankelijk, hoge dosis oraal prednisolon (Cobra-regime); de andere groep werd behandeld met alleen sulfasalazine. De dosis prednisolon was 60 mg / dag in de eerste twee weken en verminderde in wekelijkse stappen tot de onderhoudsdosering van 7,5 mg/dag in week 7. Prednisolon en methotrexaat werden geleidelijk afgebouwd en gestopt na respectievelijk week 28 en 40, terwijl sulfasalazine werd voortgezet.

niet-nuchtere tweede ochtend lege urinemonsters werden verkregen bij baseline, drie maanden, zes maanden, negen maanden en aan het einde van het onderzoek, en werden bevroren gehouden bij -20°C.

het huidige rapport is gebaseerd op de 110 patiënten die urine beschikbaar hadden bij zowel baseline als ten minste één follow-upbezoek, bestaande uit 52 met COBRA behandelde en 58 met sulfasalazine behandelde patiënten. Tijdens en na het onderzoek werden gezwollen en gevoelige gewrichtstellingen uitgevoerd, evenals een beoordeling van het globale welzijn (visuele analoge schaal) en de bezinkingssnelheid (ESR) van Westergren erytrocyten. De activiteit van de ziekte werd uitgedrukt als de 28 joint disease activity score (DAS28), een gevalideerde index die bestaat uit een 28 joint swelling en tederheid telling, een acute fase reactieve stof (ESR) en een maat voor globaal welzijn (10 cm visuele analoge schaal).

urinary C-terminal cross linking telopeptide van type I collageen (CTX-I) werd gemeten met de Crosslaps enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) (Nordic Biosciences, Herlev, Denemarken). Deze test maakt gebruik van een polyclonaal antiserum tegen β-isomerised ekah β DGGR sequentie van het C-telopeptide van α1 ketens van humaan type I collageen. Intra-assay en interassay variatiecoëfficiënten zijn respectievelijk minder dan 6% en 9%.

urinair C-terminaal cross-linking telopeptide van type II collageen (CTX-II) werd gemeten met een competitieve ELISA (kraakbeenderen, Nordic Biosciences) gebaseerd op een monoklonaal antilichaam van de muis dat werd verhoogd tegen de EKGPDP-sequentie van humaan type II collageen C-telopeptide. Deze opeenvolging, waarin het lysineresidu (K) in kruisverbinden tussen type II collageenmolecules deelneemt, is aanwezig in het rijpe gewrichtskollagennetwerk dat door chondrocyten wordt geproduceerd. Aldus wordt de opsporing van deze opeenvolging in urine beschouwd om specifiek de degradatie van rijpe type-II collageenmolecules te weerspiegelen.

variatiecoëfficiënten voor de Intra-assay en de interassay zijn respectievelijk minder dan 8% en 10%. De gemiddelde intra-individuele variatiecoëfficiënt gedurende 24 uur, die de dagelijkse variabiliteit weerspiegelt, was slechts 15%.

urinaire CTX-I-en CTX-II-spiegels werden gecorrigeerd door de urinaire creatinineconcentratie (CR) gemeten met een standaard colorimetrische methode. Alle metingen van CTX-I en CTX-II werden uitgevoerd in een centraal laboratorium (Synarc, Lyon, Frankrijk).

geen van de patiënten leed aan een duidelijke lever-of nierfunctiestoornis die de urinespiegels van CTX-I of CTX-II zou kunnen hebben beïnvloed.

statistische analyse

CTX-I en CTX-II spiegels werden logaritmisch getransformeerd, aangezien beide variabelen op alle tijdstippen een scheef verdeelde verdeling hadden.Longitudinale gegevensanalyse

longitudinale datasets worden gekarakteriseerd door waarnemingen met een hoge variabiliteit tussen patiënten en een vrij lage variabiliteit binnen patiënten. De hoge binnen-patiënt correlatie betekent dat longitudinale relaties niet kunnen worden geanalyseerd met behulp van gewone regressiemethoden. GEE (generalised estimating equations)is een regressietechniek om intervariabele relaties in longitudinale studies te bestuderen; het kost tijd, evenals tijdonafhankelijke en tijdafhankelijke covariaten.10 de voordelen van GEE ten opzichte van gewone methoden zijn dat GEE alle beschikbare longitudinale gegevens gebruikt, ongelijke aantallen herhaalde metingen en ongelijke tijdsintervallen toestaat en geen multivariate normaliteit van de resultaatvariabele vereist. GEE heeft wel een a priori “werkende” correlatiestructuur nodig om zich aan te passen aan de correlatie binnen het onderwerp die in herhaalde meetontwerpen werkt. Een correlatiestructuur moet worden gekozen op basis van de feitelijke dataset. In deze studie was de “uitwisselbare” correlatiestructuur geschikt voor alle uitkomstmetingen, omdat in de correlatiematrix alle correlaties op verschillende tijdstippen ongeveer gelijk waren (Spearman correlatiecoëfficiënten voor CTX-I en CTX-II verschilden tussen 0,45 en 0,60).

Modelbouw

het effect van tijd op CTX-I en CTX-II

we hebben eerst geprobeerd het verloop van CTX-I en CTX-II wiskundig te beschrijven, door de relatie tussen CTX-I/CTX-II en tijd te onderzoeken en vervolgens tijd2 en tijd3 toe te voegen om de pasvorm van het model te vergroten (model 1).

uitgangsfactoren (tijdonafhankelijk)

vervolgens hebben we onderzocht of variabelen waarvan bekend is dat ze de radiografische uitkomst voorspellen (behandeling, status van reumatoïde factor, schade bij aanvang) significant bijdroegen aan de verklaring van variantie (model 2).

longitudinale factoren (tijdsafhankelijk)

vervolgens hebben we variabelen toegevoegd die de mate van klinisch waarneembare artritis weergeven aan model 3, om de longitudinale relatie tussen artritis en CTX-I/CTX-II te onderzoeken (model 3). Dit model werd meerdere malen uitgevoerd, elke keer met een andere variabele als gevolg van artritis.

Autoregressieve analyse

vervolgens voegden we aan model 3 de niveaus van CTX-I/CTX-II toe die één keer eerder (drie maanden) werden gemeten (CTX-It-3 maanden, CTX-IIt-3 maanden) om te onderzoeken of de in model 3 gevonden relaties een longitudinale interpretatie rechtvaardigden.

Time lag analysis

deze analyse werd uitgevoerd om de temporele relatie tussen artritis en CTX-I/CTX-II te onderzoeken. in model 4 werden de gelijktijdige beoordelingen van artritis vervangen door beoordelingen van artritis drie maanden of zes maanden eerder. De correlaties tussen variabelen van artritis (ESR, gezwollen gewrichtsaantelling, tender gewrichtsaantelling, DAS28) en CTX-I of CTX-II werden vergeleken met behulp van gestandaardiseerde regressiecoëfficiënten. Een gestandaardiseerde regressiecoëfficiënt beschrijft de relatie tussen een gestandaardiseerde (genormaliseerde) onafhankelijke variabele (hier de variabelen die artritis weergeven) en de afhankelijke variabele (hier CTX-I of CTX-II), en kan worden gebruikt om correlaties tussen verschillende onafhankelijke variabelen en één afhankelijke variabele te wegen.