La artritis causa instantáneamente la degradación del colágeno tipo I y tipo II en pacientes con artritis reumatoide temprana: un análisis longitudinal | Anales de las Enfermedades reumáticas

MÉTODOS

Pacientes

Investigamos a los pacientes que participaron en el estudio COBRA. COBRA fue un ensayo clínico multicéntrico de 56 semanas de duración que asignó al azar a 155 pacientes que cumplían los criterios del American College of Rheumatology para artritis reumatoide.8,9 Todos los pacientes presentaron enfermedad activa temprana (menos de dos años, mediana de cuatro meses). Ninguno de los pacientes había sido tratado previamente con fármacos antirreumáticos modificadores de la enfermedad (FAMES). Un grupo fue tratado con una combinación de sulfasalazina, metotrexato e, inicialmente, dosis altas de prednisolona oral( régimen COBRA); el otro grupo fue tratado con sulfasalazina sola. La dosis de prednisolona fue de 60 mg/día en las dos primeras semanas y se redujo en pasos semanales a la dosis de mantenimiento de 7,5 mg/día en la semana 7. La prednisolona y el metotrexato se redujeron y se interrumpieron después de las semanas 28 y 40, respectivamente, mientras que se continuó con la sulfasalazina.

Se obtuvieron muestras de orina sin efecto de la segunda mañana sin ayuno al inicio, tres meses, seis meses, nueve meses y al final del ensayo, y se mantuvieron congeladas a -20°C.

El informe actual se basa en los 110 pacientes que tenían orina disponible tanto al inicio como al menos en una visita de seguimiento, incluidos 52 pacientes tratados con COBRA y 58 pacientes tratados con sulfasalazina. Durante y después del ensayo, se realizaron recuentos de articulaciones inflamadas y sensibles, así como una evaluación del bienestar global (escala visual analógica) y la velocidad de sedimentación eritrocitaria de Westergren (VSG). La actividad de la enfermedad se expresó como la puntuación de actividad de la enfermedad articular de 28 (DAS28), un índice validado compuesto por un recuento de inflamación y sensibilidad articular de 28, un reactivo de fase aguda (VSG) y una medida de bienestar global (escala analógica visual de 10 cm).

El telopéptido de enlace cruzado C-terminal urinario de colágeno tipo I (CTX-I) se midió mediante el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas Crosslaps (ELISA) (Nordic Biosciences, Herlev, Dinamarca). Este ensayo utiliza un antisuero policlonal levantado contra la secuencia β-isomerizada EKAH β DGGR del telopéptido C de las cadenas α1 de colágeno humano tipo I. Los coeficientes de variación intraensayo e interensayo son inferiores al 6% y al 9%, respectivamente.

El telopéptido de enlace cruzado C-terminal urinario de colágeno de tipo II (CTX-II) se midió mediante un ELISA competitivo (Cartilaps, Nordic Biosciences) basado en un anticuerpo monoclonal de ratón elevado contra la secuencia EKGPDP del telopéptido C de colágeno de tipo II humano. Esta secuencia, en la que el residuo de lisina (K) participa en la reticulación entre moléculas de colágeno de tipo II, está presente en la red de colágeno articular maduro producida por los condrocitos. Por lo tanto, se considera que la detección de esta secuencia en la orina refleja específicamente la degradación de moléculas de colágeno maduras de tipo II.

Los coeficientes de variación intraensayo e interensayo son inferiores al 8% y al 10%, respectivamente. El coeficiente de variación intraindividual medio a lo largo de 24 horas, que refleja la variabilidad diurna, fue de solo el 15%.

Los niveles urinarios de CTX-I y CTX-II se corrigieron mediante la concentración de creatinina urinaria (Rc) medida por un método colorimétrico estándar. Todas las mediciones de CTX – I y CTX-II se realizaron en un laboratorio central (Synarc, Lyon, Francia).

Ninguno de los pacientes presentaba deterioro marcado de la función hepática o renal que pudiera haber afectado los niveles urinarios de CTX-I o CTX-II.

Análisis estadístico

Los niveles de CTX-I y CTX-II se transformaron logarítmicamente, ya que ambas variables tenían una distribución sesgada en todos los momentos.

Análisis longitudinal de datos

Los conjuntos de datos longitudinales se caracterizan por observaciones con una alta variabilidad entre pacientes y una variabilidad bastante baja dentro de los pacientes. La alta correlación intrapaciente significa que las relaciones longitudinales no pueden analizarse utilizando métodos de regresión ordinarios. GEE (generalised estimating equations) es una técnica de regresión para estudiar relaciones intervariables en estudios longitudinales; toma en cuenta el tiempo, así como las covariables independientes y dependientes del tiempo.10 Las ventajas de GEE sobre los métodos ordinarios son que GEE utiliza todos los datos longitudinales disponibles, permite números desiguales de mediciones repetidas e intervalos de tiempo desiguales, y no requiere normalidad multivariante de la variable de resultado. El GEE requiere una estructura de correlación “de trabajo” a priori para ajustarse a la correlación dentro del sujeto que opera en diseños de medición repetidos. Debe elegirse una estructura de correlación sobre la base del conjunto de datos real. En este estudio, la estructura de correlación” intercambiable ” fue apropiada para todas las medidas de resultado, ya que en la matriz de correlación todas las correlaciones en diferentes puntos de tiempo fueron aproximadamente iguales (los coeficientes de correlación de Spearman para CTX-I y CTX-II diferían entre 0,45 y 0,60).

Construcción de modelos

El efecto del tiempo en CTX-I y CTX-II

Primero intentamos describir el curso de CTX-I y CTX-II en el tiempo matemáticamente, investigando la relación entre CTX-I/CTX-II y el tiempo, y posteriormente agregando time2 y time3 para aumentar el ajuste del modelo (modelo 1).

Factores basales (independientes del tiempo)

Posteriormente investigamos si las variables que se sabe predicen el resultado radiográfico (tratamiento, estado del factor reumatoide, daño basal) contribuyeron significativamente a explicar la varianza (modelo 2).

Factores longitudinales (dependientes del tiempo)

Luego agregamos variables que reflejan el alcance de la artritis clínicamente perceptible al modelo 3, con el fin de investigar la relación longitudinal entre la artritis y CTX-I/CTX-II (modelo 3). Este modelo se ejecutó varias veces, cada vez con una variable diferente que reflejaba la artritis.

Análisis autorregresivo

Luego agregamos al modelo 3 los niveles de CTX-I/CTX-II que se midieron un punto de tiempo antes (tres meses) (CTX-It-3 meses, CTX-IIt-3 meses) para investigar si las relaciones encontradas en el modelo 3 justificaban una interpretación longitudinal.

Análisis de retraso temporal

Este análisis se realizó para investigar la relación temporal entre la artritis y CTX-I/CTX-II. En el modelo 4, las evaluaciones concurrentes de la artritis se sustituyeron por evaluaciones de la artritis tres o seis meses antes. Las correlaciones entre las variables de artritis (VSG, recuento de articulaciones inflamadas, recuento de articulaciones sensibles, DAS28) y CTX-I o CTX-II se compararon utilizando coeficientes de regresión estandarizados. Un coeficiente de regresión estandarizado describe la relación entre una variable independiente estandarizada (normalizada) (aquí, las variables que reflejan la artritis) y la variable dependiente (aquí, CTX-I o CTX-II), y se puede utilizar para ponderar las correlaciones entre diferentes variables independientes y una variable dependiente.