Típusú kollagén lebomlását okozza korai rheumatoid arthritisben szenvedő betegeknél: longitudinális elemzés / a reumás betegségek évkönyvei
módszerek
betegek
a COBRA vizsgálatban részt vevő betegeket vizsgáltuk. A COBRA egy 56 hetes multicentrikus klinikai vizsgálat volt, amely véletlenszerűen 155 beteget osztott ki, akik megfeleltek az American College of Rheumatology kritériumainak a rheumatoid arthritisre.8,9 minden beteg korai aktív betegségben szenvedett (kevesebb, mint két év, medián négy hónap). A betegek egyikét sem kezelték korábban betegségmódosító reumaellenes szerekkel (DMARD). Az egyik csoportot szulfaszalazin, metotrexát és kezdetben nagy dózisú orális prednizolon (COBRA kezelés) kombinációjával kezelték; a másik csoportot önmagában szulfaszalazinnal kezelték. A prednizolon adag 60 mg/nap volt az első két hétben, és heti lépésekben a 7, 5 mg/nap fenntartó adagig csökkent a 7.héten. A prednizolont és a metotrexátot a 28., illetve a 40. hét után csökkentették és leállították, míg a szulfaszalazint folytatták.
a vizsgálat megkezdésekor, három hónapon, hat hónapon, kilenc hónapon és a vizsgálat végén nem éhgyomri vizeletmintákat vettek, és fagyasztva tartották őket -20-on (cc).
a jelenlegi jelentés azon 110 betegen alapul, akiknek mind a vizsgálat megkezdésekor, mind pedig legalább egy utóvizsgálaton rendelkezésre állt vizelet, amely 52 COBRA-val és 58 szulfaszalazinnal kezelt betegből állt. A vizsgálat alatt és után elvégezték a duzzadt és érzékeny ízületek számát, valamint a globális jólét (visual analogue scale) és a Westergren erythrocyta sedimentation rate (ESR) értékelését. A betegség aktivitását a 28 ízületi betegség aktivitási pontszám (DAS28), egy validált index, amely 28 ízületi duzzanat és érzékenység számból, akut fázisú reagensből (ESR) és a globális jólét mértékéből (10 cm-es vizuális analóg skála) áll.
az I. típusú kollagén (CTX-I) vizelet C-terminális keresztkötő telopeptidjét a Crosslaps enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) segítségével mértük (Nordic Biosciences, Herlev, Dánia). Ez a vizsgálat egy poliklonális antiszérumot használ, amelyet a C-telopeptid C-telopeptidje ellen emelnek fel az emberi I. típusú kollagén C-telopeptidje ellen. Az Intra-assay és interassay variációs együtthatók kisebb, mint 6% és 9%.
a II-es típusú kollagén (CTX-II) vizelet C-terminális keresztkötő telopeptidjét kompetitív ELISA-val (porcok, Nordic Biosciences) mértük egy egér monoklonális antitest alapján, amelyet a humán II-es típusú kollagén C-telopeptid EKG-szekvenciája ellen emeltek. Ez a szekvencia, amelyben a lizinmaradék (K) részt vesz a II.típusú kollagénmolekulák közötti keresztkötésben, jelen van a kondrociták által termelt Érett ízületi kollagén hálózatban. Így ennek a szekvenciának a vizeletben történő kimutatása kifejezetten tükrözi az érett II-es típusú kollagén molekulák lebomlását.
Intra-assay és interassay variációs együtthatók kisebb, mint 8% és 10%. Az átlagos intraindividuális variációs együttható 24 óra alatt, tükrözve a napi variabilitást, csak 15% volt.
a vizelet CTX-I és CTX-II szintjét standard kolorimetriás módszerrel mért vizelet kreatinin (CR) koncentrációval korrigáltuk. A CTX-I és CTX-II méréseket egy központi laboratóriumban végezték (Synarc, Lyon, Franciaország).
egyik beteg sem szenvedett jelentős máj-vagy vesefunkció-károsodást, amely befolyásolhatta a CTX-I vagy CTX-II vizeletszintjét.
statisztikai elemzés
a CTX-I és a CTX-II szintek logaritmikusan átalakultak, mivel mindkét változó eloszlása minden időpontban torz volt.
longitudinális Adatelemzés
a longitudinális adatkészleteket olyan megfigyelések jellemzik, amelyek a betegek között nagy variabilitást mutatnak, a betegeken belül pedig meglehetősen alacsony variabilitást mutatnak. A magas betegen belüli korreláció azt jelenti, hogy a longitudinális összefüggéseket nem lehet elemezni szokásos regressziós módszerekkel. A Gee (generalised estimating equations) egy regressziós technika a longitudinális vizsgálatok intervariábilis összefüggéseinek tanulmányozására; időt vesz igénybe, valamint időfüggetlen és időfüggő kovariánsokat is figyelembe vesz.10 A GEE előnye a hagyományos módszerekkel szemben, hogy a GEE az összes rendelkezésre álló longitudinális adatot felhasználja, egyenlőtlen számú ismételt mérést és egyenlőtlen időintervallumot tesz lehetővé, és nem követeli meg az eredményváltozó többváltozós normalitását. A GEE a priori” működő ” korrelációs struktúrát igényel az ismételt mérési tervekben működő tárgyon belüli korreláció beállításához. A korrelációs struktúrát a tényleges adatkészlet alapján kell kiválasztani. Ebben a tanulmányban a” cserélhető ” korrelációs struktúra minden eredménymérőhöz megfelelő volt, mert a korrelációs mátrixban a különböző időpontokban az összes korreláció megközelítőleg egyenlő volt (a CTX-I és a CTX-II Spearman korrelációs együtthatói 0,45 és 0,60 között különböztek).
modellépítés
az idő hatása a CTX-I-re és a CTX-II-re
először matematikailag próbáltuk leírni a CTX-I és a CTX-II menetét, a CTX-i/CTX-II és az idő közötti összefüggés vizsgálatával, majd a time2 és time3 hozzáadásával a modell illeszkedésének növelése érdekében (model 1).
kiindulási tényezők (időfüggetlenek)
ezt követően megvizsgáltuk, hogy a radiográfiai kimenetel előrejelzésére ismert változók (kezelés, reumatoid faktor státusz, kiindulási károsodás) jelentősen hozzájárultak-e a variancia magyarázatához (2.modell).
longitudinális tényezők (időfüggő)
ezután hozzáadtuk a klinikailag érzékelhető ízületi gyulladás mértékét tükröző változókat a 3.modellhez, hogy megvizsgáljuk az ízületi gyulladás és a CTX-I/CTX-II (3. modell) longitudinális kapcsolatát. Ezt a modellt többször futtatták, minden alkalommal egy másik változó tükröző ízületi gyulladással.
Autoregresszív elemzés
ezután hozzáadtuk a 3.modellhez a CTX-I/CTX-II szinteket, amelyeket egy időponttal korábban (három hónap) mértünk (CTX-It-3 hónap, CTX-IIt-3 hónap) annak vizsgálata érdekében, hogy a 3. modellben talált kapcsolatok indokoltak-e longitudinális értelmezést.
időeltolódás-elemzés
ezt az elemzést az arthritis és a CTX-I/CTX-II közötti időbeli összefüggés vizsgálatára végezték. a 4.modellben az ízületi gyulladás egyidejű értékelését három hónappal vagy hat hónappal korábban értékelték. Az ízületi gyulladás (ESR, duzzadt ízületek száma, érzékeny ízületek száma, DAS28) és a CTX-I vagy CTX-II változók közötti összefüggéseket standardizált regressziós együtthatók alkalmazásával hasonlítottuk össze. A standardizált regressziós együttható egy standardizált (normalizált) független változó (itt az arthritist tükröző változók) és a függő változó (itt, CTX-I vagy CTX-II) közötti összefüggést írja le, és felhasználható a különböző független változók és egy függő változó közötti korrelációk súlyozására.
