L’artrite provoca istantaneamente la degradazione del collagene di tipo I e di tipo II nei pazienti con artrite reumatoide precoce: un’analisi longitudinale / Annali delle malattie reumatiche
METODI
Pazienti
Abbiamo studiato i pazienti che partecipano allo studio COBRA. COBRA è stato uno studio clinico multicentrico di 56 settimane che ha assegnato in modo casuale 155 pazienti che hanno soddisfatto i criteri dell’American College of Rheumatology per l’artrite reumatoide.8,9 Tutti i pazienti avevano una malattia attiva precoce (meno di due anni, mediana quattro mesi). Nessuno dei pazienti era stato trattato con farmaci antireumatici modificanti la malattia (DMARD) in precedenza. Un gruppo è stato trattato con una combinazione di sulfasalazina, metotrexato e, inizialmente, prednisolone orale ad alte dosi( regime COBRA); l’altro gruppo è stato trattato con sulfasalazina da sola. La dose di prednisolone è stata di 60 mg / die nelle prime due settimane e si è ridotta a passi settimanali fino alla dose di mantenimento di 7,5 mg/die nella settimana 7. Prednisolone e metotrexato sono stati ridotti e interrotti dopo le settimane 28 e 40, rispettivamente, mentre la sulfasalazina è stata continuata.
Non digiuno mattina secondo void campioni di urina sono stati ottenuti alla partenza, tre mesi, sei mesi, nove mesi, e alla fine della prova, e sono stati tenuti congelati a -20°C.
L’attuale rapporto è basato su 110 pazienti che avevano urina disponibili al baseline sia almeno una visita di controllo, composto da 52 COBRA trattati e 58 sulfasalazine pazienti trattati. Durante e dopo lo studio, sono stati effettuati conteggi articolari gonfi e teneri, nonché una valutazione del benessere globale (scala analogica visiva) e del tasso di sedimentazione eritrocitaria di Westergren (ESR). L’attività della malattia è stata espressa come 28 joint disease activity score (DAS28), un indice convalidato composto da un numero di gonfiore e dolorabilità articolare di 28, un reagente di fase acuta (ESR) e una misura del benessere globale (scala analogica visiva di 10 cm).
Il telopeptide reticolante C-terminale urinario del collagene di tipo I (CTX-I) è stato misurato mediante il test ELISA (Nordic Biosciences, Herlev, Danimarca). Questo saggio utilizza un antisiero policlonale sollevato contro la sequenza β-isomerizzata EKAH β DGGR del C-telopeptide delle catene α1 del collagene umano di tipo I. I coefficienti di variazione intra-analisi e interassay sono rispettivamente inferiori al 6% e al 9%.
Il telopeptide di cross-linking C-terminale urinario del collagene di tipo II (CTX-II) è stato misurato da un ELISA competitivo (Cartilaps, Nordic Biosciences) basato su un anticorpo monoclonale di topo sollevato contro la sequenza EKGPDP del collagene C-telopeptide umano di tipo II. Questa sequenza, in cui il residuo di lisina (K) partecipa al cross linking tra molecole di collagene di tipo II, è presente nella rete di collagene articolare maturo prodotta dai condrociti. Così la rilevazione di questa sequenza in urina è considerata specificamente per riflettere la degradazione delle molecole mature del collagene di tipo II.
I coefficienti di variazione intra-analisi e inter-analisi sono rispettivamente inferiori all ‘ 8% e al 10%. Il coefficiente medio di variazione intraindividuale su 24 ore, che riflette la variabilità diurna, era solo del 15%.
I livelli urinari di CTX-I e CTX-II sono stati corretti dalla concentrazione urinaria di creatinina (Cr) misurata con un metodo colorimetrico standard. Tutte le misurazioni di CTX-I e CTX-II sono state effettuate in un laboratorio centrale (Synarc, Lione, Francia).
Nessuno dei pazienti ha sofferto di una marcata compromissione della funzionalità epatica o renale che potrebbe aver influenzato i livelli urinari di CTX-I o CTX-II.
Analisi statistica
I livelli di CTX-I e CTX-II sono stati trasformati logaritmicamente, poiché entrambe le variabili avevano una distribuzione distorta in tutti i punti temporali.
Analisi dei dati longitudinali
I set di dati longitudinali sono caratterizzati da osservazioni con un’elevata variabilità tra i pazienti e una variabilità piuttosto bassa all’interno dei pazienti. L’elevata correlazione all’interno del paziente significa che le relazioni longitudinali non possono essere analizzate utilizzando metodi di regressione ordinari. GEE (generalised estimating equations) è una tecnica di regressione per studiare le relazioni intervariabili negli studi longitudinali; ci vuole tempo, così come covariate indipendenti dal tempo e dipendenti dal tempo in considerazione.10 I vantaggi di GEE rispetto ai metodi ordinari sono che GEE utilizza tutti i dati longitudinali disponibili, consente numeri disuguali di misurazioni ripetute e intervalli di tempo disuguali e non richiede la normalità multivariata della variabile di risultato. GEE richiede una struttura di correlazione “funzionante” a priori per adattarsi alla correlazione all’interno del soggetto che opera in progetti di misurazione ripetuti. Una struttura di correlazione deve essere scelta sulla base del set di dati effettivo. In questo studio la struttura di correlazione “scambiabile” era appropriata per tutte le misure di risultato, perché nella matrice di correlazione tutte le correlazioni in diversi punti temporali erano approssimativamente uguali (i coefficienti di correlazione di Spearman per CTX-I e CTX-II differivano tra 0,45 e 0,60).
la costruzione di un Modello
L’effetto del tempo sulla CTX-I e CTX-II
in primo luogo Abbiamo cercato di descrivere il corso di CTX-I e CTX-II in tempo matematicamente, indagando la relazione tra CTX-I/CTX-II e tempo, e successivamente aggiungere time2 e time3 per aumentare l’adattamento del modello (modello 1).
Fattori basali (indipendenti dal tempo)
Successivamente abbiamo studiato se le variabili note per essere predittive dell’esito radiografico (trattamento, stato del fattore reumatoide, danno basale) hanno contribuito in modo significativo a spiegare la varianza (modello 2).
Fattori longitudinali (dipendenti dal tempo)
Abbiamo quindi aggiunto variabili che riflettono l’estensione dell’artrite clinicamente percepibile al modello 3, al fine di indagare la relazione longitudinale tra artrite e CTX-I/CTX-II (modello 3). Questo modello è stato eseguito più volte, ogni volta con una variabile diversa che riflette l’artrite.
Analisi autoregressiva
Abbiamo quindi aggiunto al modello 3 i livelli di CTX-I/CTX-II che sono stati misurati un tempo prima (tre mesi) (CTX-It-3 mesi, CTX-IIt-3 mesi) al fine di indagare se le relazioni trovate nel modello 3 giustificassero un’interpretazione longitudinale.
Time lag analysis
Questa analisi è stata eseguita per studiare la relazione temporale tra artrite e CTX-I/CTX-II. Nel modello 4, le valutazioni simultanee dell’artrite sono state sostituite da valutazioni dell’artrite tre mesi o sei mesi prima. Le correlazioni tra le variabili dell’artrite (ESR, conteggio delle articolazioni gonfie, conteggio delle articolazioni teneri, DAS28) e CTX-I o CTX-II sono state confrontate utilizzando coefficienti di regressione standardizzati. Un coefficiente di regressione standardizzato descrive la relazione tra una variabile indipendente standardizzata (normalizzata) (qui, le variabili che riflettono l’artrite) e la variabile dipendente (qui, CTX-I o CTX-II) e può essere utilizzata per ponderare le correlazioni tra diverse variabili indipendenti e una variabile dipendente.
