Zapalenie stawów natychmiast powoduje degradację kolagenu typu I i typu II u pacjentów z wczesnym reumatoidalnym zapaleniem stawów: analiza podłużna | roczniki chorób reumatycznych

metody

pacjenci

badaliśmy pacjentów uczestniczących w badaniu COBRA. COBRA było 56 tygodniowym wieloośrodkowym badaniem klinicznym, w którym losowo przydzielono 155 pacjentów, którzy spełnili kryteria American College of Rheumatology dla reumatoidalnego zapalenia stawów.8,9 wszyscy pacjenci mieli wczesną aktywną chorobę (mniej niż dwa lata, mediana czterech miesięcy). Żaden z pacjentów nie był wcześniej leczony lekami przeciwreumatycznymi modyfikującymi przebieg choroby (ang. disease modifying anti-rheumatic drugs, DMARDs). Jedna grupa była leczona kombinacją sulfasalazyny, metotreksatu i, początkowo, doustnym prednizolonem w dużych dawkach (schemat COBRA); druga grupa była leczona samą sulfasalazyną. Dawka prednizolonu wynosiła 60 mg/dobę w pierwszych dwóch tygodniach i stopniowo zmniejszała się co tydzień do dawki podtrzymującej 7,5 mg / dobę w 7. tygodniu. Prednizolon i metotreksat ulegały zwężeniu i przerwaniu odpowiednio po 28 i 40 tygodniach, podczas gdy sulfasalazyna była kontynuowana.

nieleczone na czczo próbki moczu z drugiego ranka otrzymywano przed rozpoczęciem badania, przez trzy miesiące, sześć miesięcy, dziewięć miesięcy i na koniec badania i trzymano je w zamrożeniu w temperaturze -20°C.

bieżący raport opiera się na 110 pacjentach, u których mocz był dostępny zarówno przed rozpoczęciem badania, jak i na co najmniej jednej wizycie kontrolnej, obejmującej 52 pacjentów leczonych kobrą i 58 pacjentów leczonych sulfasalazyną. W trakcie badania i po jego zakończeniu przeprowadzono badanie liczby obrzęków i tkliwości stawów, a także ocenę ogólnego samopoczucia (wizualna skala analogowa) i szybkości sedymentacji erytrocytów Westergrena (ESR). Aktywność choroby wyrażono jako 28-stopniowy wskaźnik aktywności choroby stawów (DAS28), zwalidowany wskaźnik składający się z 28-stopniowej liczby obrzęków i tkliwości stawów, czynnika ostrej fazy (ESR) i miary ogólnego samopoczucia (10 cm wizualna skala analogowa).

telopeptyd sieciujący C-terminal w moczu kolagenu typu i (CTX-I) oznaczono metodą testu Immunosorbentów sieciujących (ELISA) (Nordic Biosciences, Herlev, Dania). Ten test wykorzystuje poliklonalną surowicę podniesioną przeciwko izomeryzowanej β sekwencji EKAH β dggr C-telopeptydu łańcuchów α1 ludzkiego kolagenu typu I. Współczynniki zmienności wewnątrz-i między-testowej wynoszą odpowiednio mniej niż 6% i 9%.

telopeptyd sieciujący C-terminal w moczu kolagenu typu II (CTX-II) oznaczono kompetycyjnym testem ELISA (Cartilaps, Nordic Biosciences) opartym na mysim przeciwciale monoklonalnym, wyhodowanym przeciwko sekwencji EKGDP ludzkiego kolagenu C-telopeptydu typu II. Sekwencja ta, w której reszta lizyny (K) uczestniczy w sieciowaniu między cząsteczkami kolagenu typu II, jest obecna w dojrzałej stawowej sieci kolagenowej wytwarzanej przez chondrocyty. W związku z tym uważa się, że wykrywanie tej sekwencji w moczu wyraźnie odzwierciedla degradację dojrzałych cząsteczek kolagenu typu II.

współczynniki zmienności w teście i między teście wynoszą odpowiednio mniej niż 8% i 10%. Średni wewnątrzosobniczy współczynnik zmienności w ciągu 24 godzin, odzwierciedlający zmienność dobową, wynosił tylko 15%.

poziomy CTX-i I CTX-II w moczu zostały skorygowane za pomocą stężenia kreatyniny w moczu (Cr) mierzonego standardową metodą kolorymetryczną. Wszystkie pomiary CTX-I i CTX-II przeprowadzono w Centralnym Laboratorium (Synarc, Lyon, Francja).

żaden z pacjentów nie cierpiał na wyraźne zaburzenia czynności wątroby lub nerek, które mogły mieć wpływ na stężenie CTX-i lub CTX-II w moczu.

analiza statystyczna

stężenia CTX-I i CTX-II były przekształcane logarytmicznie, ponieważ obie zmienne miały wypaczony rozkład we wszystkich punktach czasowych.

Analiza danych podłużnych

zbiory danych podłużnych charakteryzują się obserwacjami z dużą zmiennością między pacjentami i raczej małą zmiennością wśród pacjentów. Wysoka korelacja wewnątrz pacjenta oznacza, że nie można analizować relacji podłużnych przy użyciu zwykłych metod regresji. GEE (uogólnione równania estymacyjne) jest techniką regresji do badania relacji międzymiennych w badaniach podłużnych; bierze pod uwagę czas, a także współzmienne niezależne od czasu i zależne od czasu.10 przewagą GEE nad zwykłymi metodami jest to, że GEE wykorzystuje wszystkie dostępne dane podłużne, pozwala na nierówną liczbę powtarzanych pomiarów i nierówne przedziały czasowe oraz nie wymaga wielowymiarowej normalności zmiennej wynikowej. GEE wymaga a priori “działającej” struktury korelacji w celu dostosowania się do korelacji wewnątrz-podmiotowej działającej w powtarzanych projektach pomiarowych. Struktura korelacji musi być wybrana na podstawie rzeczywistego zbioru danych. W tym badaniu “wymienna” struktura korelacji była odpowiednia dla wszystkich miar wyników, ponieważ w macierzy korelacji wszystkie korelacje w różnych punktach czasowych były w przybliżeniu równe (współczynniki korelacji Spearmana dla CTX-I I CTX-II różniły się od 0,45 do 0,60).

budowa Modelu

wpływ czasu na CTX-I I CTX-II

najpierw próbowaliśmy opisać przebieg CTX-i i CTX-II w czasie matematycznie, badając zależność między CTX-I/CTX-II a czasem, a następnie dodając time2 i time3 w celu zwiększenia dopasowania modelu (model 1).

czynniki wyjściowe (niezależne od czasu)

następnie zbadaliśmy, czy zmienne, o których wiadomo, że są predykcyjne dla wyników radiograficznych (leczenie, status czynnika reumatoidalnego, uszkodzenie wartości wyjściowych) znacząco przyczyniły się do wyjaśnienia wariancji (model 2).

czynniki Podłużne (zależne od czasu)

następnie dodaliśmy zmienne odzwierciedlające stopień klinicznie odczuwalnego zapalenia stawów do modelu 3, w celu zbadania zależności podłużnej między zapaleniem stawów a CTX-I/CTX-II (model 3). Model ten był uruchamiany kilka razy, za każdym razem z inną zmienną odzwierciedlającą artretyzm.

analiza Autoregresyjna

następnie do modelu 3 dodaliśmy poziomy CTX-I/CTX-II, które zostały zmierzone o jeden punkt czasowy wcześniej (trzy miesiące) (CTX-it-3 miesiące, CTX-IIt – 3 miesiące) w celu zbadania, czy relacje Znalezione w modelu 3 uzasadniają interpretację podłużną.

analiza opóźnienia czasowego

ta analiza została przeprowadzona w celu zbadania związku czasowego między zapaleniem stawów a CTX-I/CTX-II. w modelu 4 równoczesne oceny zapalenia stawów zostały zastąpione ocenami zapalenia stawów trzy miesiące lub sześć miesięcy wcześniej. Korelacje pomiędzy zmiennymi zapalenia stawów (ESR, obrzęk stawów, tender joint count, DAS28) i CTX-I lub CTX-II porównano stosując znormalizowane współczynniki regresji. Znormalizowany współczynnik regresji opisuje zależność między znormalizowaną (znormalizowaną) zmienną niezależną (tu zmienne odzwierciedlające artretyzm) a zmienną zależną (tu CTX-I lub CTX-II) i może być stosowany do korelacji wagowych między różnymi zmiennymi niezależnymi a jedną zmienną zależną.